本发明专利技术属于抗体药物的技术领域，提供抗CD20的全人源单克隆抗体及其应用，这些抗体是来源于人杂交瘤并经过细胞毒功能测试筛选和CD20亲和力筛选的，这些抗体对CD20的亲和力和特异性优异，对淋巴瘤细胞的细胞毒功效显著。在治疗人B细胞淋巴瘤Raji细胞侵润瘤模型的药效学试验中，显著延长实验动物的生存期。在治疗人B细胞淋巴瘤Raji细胞原位移植瘤的抑瘤试验中，显著抑制Raji细胞皮下移植瘤的生长。在生存期和抑制肿瘤生长上均显示不低于或比美罗华更好的疗效。对非霍奇金氏淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、风湿性和类风湿性疾病、系统性红斑狼疮、免疫性血小板减少性紫癜和多发性硬化症等疾病具有潜在的诊断和治疗价值。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 本申请是分案申请，其原申请的申请号为201210082298. 6,申请日为2012年3月 26日，专利技术名称为"抗CD20的全人源单克隆抗体及其应用"。
本专利技术设及抗体药物的
具体地说，设及一组全人源单克隆抗体新分子， 其可用于淋己瘤的诊断和治疗。
技术介绍
1.CD20 CD20是一种分子量为33~37kDa的非糖基化磯蛋白，有4个跨膜区，氨基端和駿 基端都位于细胞质膜内侧，在第=跨膜区和第四跨膜区之间，有一个由43个氨基酸残基组 成的环区，构成其主要的抗原表位。作为B淋己细胞表面分化抗原，它起始表达于pre-B细 胞阶段，到B细胞终端分化成浆细胞时结束，一直被认为是B系细胞表面特有的标识。它主 要参与调节B淋己细胞的增殖与分化，在免疫系统起重要作用。80%~85%的非霍奇金氏 淋己瘤（饥正）为B细胞来源，并且该些细胞的约95%均有表面CD20表达CD20的表达 因淋己瘤细胞的不同而有所差异，滤泡性淋己瘤细胞表面表达较高，小细胞淋己瘤白血病 细胞表面表达较低，在干细胞和浆细胞中不表达，慢性B淋己白血病细胞中的表达远低于 正常的B细胞和其他B淋己瘤细胞，CD20的表达高低在一定程度上决定了抗体和补体杀伤 瘤细胞的程度?。单核细胞、静息W及激活的T细胞、裸细胞W及非淋己细胞都不表达CD20 分子。CD20与抗CD20抗体结合后内化现象不明显，细胞表面CD20分子数量并不因为与抗 体结合而大量减少，CD20也不会发生明显细胞表面脱落的现象，因此，CD20是免疫治疗B细 胞淋己瘤的理想作用位点，特别是对治疗惰性、复发难治性B细胞淋己瘤有较肯定的疗效。 2.治疗性抗CD20抗体 抗CD20治疗可清除恶性B细胞和部分正常B细胞，但由于干细胞和B细胞前体不 表达CD20,因而不会造成长期B细胞损耗。其临床应用主要适应证为；1.单纯应用抗CD20 单克隆抗体治疗滤泡性B细胞型非霍奇金淋己瘤；2.抗CD20单克隆抗体与化疗联合应用 治疗弥漫大B细胞型淋己瘤及慢性B淋己细胞白血病炬-化L)。2. 1I?i1:uximab(美罗华）IDEC-C2B8,又名化化ximab，商品名为美罗华，1997年由抑A批准上市，是第一个 被美国FDA批准用于治疗肿瘤的单克隆抗体W。它是一个人鼠嵌合抗体，包含鼠源抗CD20 单克隆抗体2B8(Ibritumom油）的可变区和人源IgGl重链及K链的恒定区，用于B细胞淋 己瘤的治疗。Rituximab在体内通过抑制细胞增殖或触发多种细胞破坏机制，包括抗体依赖 性细胞毒作用（ADCC)和补体依赖性细胞毒作用（CDC)W及细胞调亡发挥明显的抗肿瘤功 效W。近年的临床研究证实，该药治疗谱较广，对B淋己细胞性疾病均可取得较好的疗效。 2. 2ZEVALIN 2002年2月，抑A批准了第一个放射性免疫治疗药物Zevalin。该药由IDEC制药 公司生产，通用名扣ritumom油Tiuxetan。FDA批准此药用于治疗复发性或难治性低恶性 度/滤泡性或转化的B细胞饥正，其中包括化tuximab难治性的滤泡性NHL。该产品由小鼠 IgGl-K单克隆抗体2B8abritumomab)连接同位素9°Y用于肿瘤治疗。其单抗部分对CD20 具有高的特异亲和性W。 2. 3 邸XXAR 2003 年 6 月 27 日，FDA批准Bexxar(Tositumom油和nijTositumom油）用于治疗 癌细胞已经或未发生转移、对化化ximab有耐药性、化疗后又复发的CD20阳性滤泡性饥正。 它由鼠源单克隆抗体一抗B1单克隆抗体（Tositumomab，IgG2a-A)与放射性同位素"4共 价偶联而成。 2. 4ARZERA 2009年10月26日，FDA批准ARZERA(Ofatumum油）用于治疗慢性淋己细胞性白血 病（化L)。它由KM人源转基因鼠免疫通过杂交瘤技术产生的人单克隆抗体。和化化ximab 相似其在体内通过抑制细胞增殖或触发多种细胞破坏机制，包括抗体依赖性细胞毒作用 (ADCC)和补体依赖性细胞毒作用（CDC)W及细胞调亡发挥明显的抗肿瘤功效。但其在治疗 非霍奇金氏淋己瘤（NHL)的S期临床试验失败。目前其主要用于对一线化疗药物耐受的慢 性淋己细胞性白血病。 3.化化ximab在临床的应用 3. 1单独应用治疗非霍奇金氏淋己瘤（NHL) 化化ximab可单独应用，推荐的使用剂量是每周375毫克/平方米，静脉内注射， 共4次，治疗复发或耐药性低度恶性CD20阳性B细胞NHL;II期临床试验表明，总体有效率 为48%，其中6%为完全有效，42%为部分有效，缓解期通常为1年。对于初治的低度恶性 饥正，单药有效率为50%~70%左右，维持治疗能够进一步提高疗效。副作用较温和，可随 抗体输入量的减少而减轻，治疗中没有或少有感染并发症发生。因而化化xim油作为一线 药物应用治疗饥正已有着无法替代的作用。 2004年，欧盟许可化化xim油联合标准化疗W治疗侵袭性饥正。一些临床试验用 来评估化化xim油单独或联合治疗惰性、侵袭性饥正和其他一些B细胞淋己组织增生素乱。 化tuxim油对类风湿性关节炎、免疫性血小板减少性紫藏、免疫性溶血性贫血、系统性红斑 狼疮和多发性硬化等自身免疫素乱性疾病的作用也在研究中W。 3. 2联合化疗治疗B细胞淋己瘤 徐志巧等W应用同期对照的前瞻性研究方法，将22例B细胞性饥正患者分为研 究组巧ituxim油组）和对照组，研究组11例用CHOP方案（环磯酷胺、多柔比星、长春新碱 和泼巧松）联合化化xim油治疗；对照组11例单用CHOP方案。结果化化xim油组完全缓 解率（CR)达72. 7%巧/II)，总有效率90. 9% (10/11);对照组CR为36. 4% (4/11)，总有 效率为54. 6% (6/11)，两组疗效差异有统计学意义。初步研究结果提示，化化xim油联合 CHOP方案治疗CD20阳性的B细胞性饥正的疗效显著，不良反应与单纯化疗相似，可作为该 病目前的首选方案。 3. 3在风湿性疾病治疗中的应用 类风湿关节炎（rheumatoidart虹itis，RA)是一种W滑膜炎为主要病理改变的全 身性自身免疫病，W慢性破坏性关节病变为特征。B细胞是类风湿因子（RF)、抗瓜氨酸抗体 (抗CCP)等自身抗体的主要来源细胞，同时研究表明RA滑膜中T细胞活化主要依赖于B细 胞抗原呈递作用?，是RA等自身免疫病发病机制核屯、环节之一。 Edwards等nw报道了161例大样本的随机双盲对照研究，试验分为口服甲氨蝶 岭组（>lOmg/ 周）、I?i1:uximab组（Igdl，dl5)、I?i1:uximab联用环磯酷胺组（750mgd3， dl7)、化化ximab联用甲氨蝶岭组，结果显示，化化xim油治疗组24周后达到ACR2065%~ 76%，单用甲氨蝶岭治疗组为38%，两者比较有显著性差异（P<0. 025);持续观察48周， 化化xim油治疗组疗效（ACR2033%~65% )与单用甲胺蝶岭组（ACR2020% )相比仍有显 著性差异（P《〇. 01)。在治疗第24周达AC贴0缓解的患者，单用化化xim油组（33%)、联用 甲氨本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗CD20的全人源单克隆抗体，所述抗体的重链恒定区为人IgG1重链的恒定区，所述抗体的轻链恒定区为人κ链的恒定区，且所述抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列为：1)氨基酸序列为Seq ID NO:2的重链可变区，和氨基酸序列为Seq ID NO:7的轻链可变区；2)氨基酸序列为Seq ID NO:4的重链可变区，和氨基酸序列为Seq ID NO:5的轻链可变区；3)氨基酸序列为Seq ID NO:3的重链可变区，和氨基酸序列为Seq ID NO:5的轻链可变区；4)氨基酸序列为Seq ID NO:1的重链可变区，和氨基酸序列为Seq ID NO:8的轻链可变区；5)氨基酸序列为Seq ID NO:1的重链可变区，和氨基酸序列为Seq ID NO:5的轻链可变区；6)氨基酸序列为Seq ID NO:4的重链可变区，和氨基酸序列为Seq ID NO:7的轻链可变区；或7)氨基酸序列为Seq ID NO:3的重链可变区，和氨基酸序列为Seq ID NO:8的轻链可变区。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：冯晓，王涛，李新灵，
申请(专利权)人：北京安保康生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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