本实用新型专利技术涉及一种快速检测大豆致敏蛋白glycinin的胶体金免疫层析试纸，该试纸基于双抗体夹心的原理检测glycinin，试纸含有支撑层、吸附层、保护层，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫；结合垫吸附有glycinin的特异性抗体，纤维素膜设有用glycinin兔源多克隆抗体溶液喷点的检测线以及用羊抗小鼠IgG抗体或兔抗小鼠IgG抗体溶液喷点的质控线，glycinin的特异性抗体采用胶体金纳米颗粒标记的glycinin鼠源单克隆抗体。本实用新型专利技术的免疫层析试纸特异性强、灵敏度高，检测简便、直观、准确，成本低，适用范围广，易于推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本技术涉及一种快速检测大豆致敏蛋白glycinin的胶体金免疫层析试纸。
技术介绍
近几年，食物过敏逐渐成为重要的食品安全问题，引起了各国食品安全监督管理 部门的重视。一些发达国家为保护食物过敏人群，专门立法规定食品包装上要标注食物过 敏原，我国在2012年实施的食品安全国家标准《预包装食品标签通则》（GB 7718-2011)中 也推荐食品包装上标注致敏物质。因此，针对食品过敏原的检测技术就显得意义重大，可为 食品安全提供重要的技术依据。 大豆中蛋白质含量丰富，一般为35°/『38%，氨基酸组成平衡，且富含不饱和脂肪酸， 是人体和动物体重要的植物蛋白和植物油来源。由于其种植面积广，产量大，长久以来一直 被广泛应用于食品和饲料的加工原料，然而，大豆也是联合国粮农组织认定的8种最重要 的食物过敏源之一。这主要是因为大豆中含有一系列过敏原，容易在婴幼儿和幼龄动物体 内引起IgE (Immunoglobulin E)抗体介导的速发型（I型)超敏反应，从而导致肠内组胺过 量释放等过敏性损伤。 自1934年Duke发现大豆可引起婴儿腹泻、肠炎等反应，提出大豆可能是一个重 要的过敏源以来，人们对于大豆中致敏因子的研究逐步深入。据统计，大豆过敏原会导致 大约0. 4%的儿童产生过敏反应，过敏原数据库网站（http://www. allergenonline. org) 在2014年1月更新的数据信息显示，大豆中共存在38种过敏原，这些过敏原是大豆及其 制品中能够导致人或畜禽过敏的蛋白质或糖蛋白，包括大豆疏水蛋白（Gly m 1)、大豆外 壳蛋白（Gly m 2)、大豆抑制蛋白（Gly m 3)、大豆球蛋白（Glycinin)、β-伴大豆球蛋白 (β-conglycinin)、大豆空泡蛋白（Gly m Bd 30Κ)、胰蛋白酶抑制因子等。其中glycinin 大豆中最主要的致敏蛋白之一，并且大量的动物试验研究也表明，glycinin可以导致犊牛、 仔猪和鼠等幼龄动物发生过敏反应。当其存在于婴幼儿食品以及幼龄动物饲料中，就很可 能会诱发过敏反应。但是，婴幼儿配方食品和复合饲料所用的原料成分较多，其中存在的 glycinin含量相对于其他原料往往很低，这就增加了快速、准确、定量检测的难度。 免疫层析试纸检测方法具有成本低、快速、便携且易操作等优点，可以用于大批量 样品的定性与定量检测，在准确性和灵敏度上也能够满足要求，该法分析过程简单，用作 glycinin的检测有独特优势，是需要优先发展的检测技术。但目前仍没有关于大豆致敏蛋 白glycinin免疫层析试纸检测方法的报道，所以该方法将会成为未来大豆过敏原检测方 法的一个发展方向。
技术实现思路
本技术要解决的技术问题：针对现有技术存在的不足，提供一种特异、灵敏、 简便、安全、快速检测glycinin的免疫层析试纸。 本技术的技术方案： -种快速检测glycinin的胶体金免疫层析试纸，底层为支撑层，中间层为吸附 层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫。在 纤维素膜设有用glycinin兔源多克隆抗体溶液喷点的检测线以及用羊抗小鼠 IgG抗体或 兔抗小鼠 IgG抗体溶液喷点的质控线；所述结合垫吸附有胶体金纳米颗粒标记的glycinin 鼠源单克隆抗体。 所述支撑层用不吸水的韧性材料制成；样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙 烯膜或聚酯膜制成；结合垫用玻璃纤维棉、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成；纤维素膜用硝 酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成。纤维素膜 上的隐形检测线和隐形质控线为平行排列的" I I "直线式，或为其他类似印记。 快速检测glycinin的胶体金免疫层析试纸的制备方法：包括用胶体金纳米颗粒 标记的glycinin鼠源单克隆抗体(金标单抗）制备结合垫，用glycinin兔源多克隆抗体溶 液喷点隐形检测线，用羊抗小鼠 IgG抗体或兔抗小鼠 IgG抗体溶液喷点隐形质控线，然后在 支撑层上黏贴样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫。在所述样品垫、结合垫及吸水垫上覆盖 有保护膜，在样品垫与结合垫交界处对应的保护膜上喷点有样品标记线，最后加上保护层。 该试纸利用双抗体夹心检测抗原的原理，当试纸测试端插入待测样品溶液后，待 测溶液通过虹吸作用带动待测glycinin及结合垫中的金标单抗一起向纤维素膜扩散，并 最终渗入手柄端的吸水材料层。在扩散过程中待测glycinin可先与金标单抗相结合，进而 与纤维素膜上喷点的兔源多克隆抗体检测线结合，金标抗体和兔源多克隆抗体分别与样品 中被检测的glycinin分子上的不同抗原决定簇结合，glycinin被夹在金标单抗和兔源多 克隆抗体之间，形成金标单抗-抗原-兔源多抗复合物，即双抗体夹心模式，显示红色检测 印记" I ";纤维素膜上喷点的羊或兔抗小鼠 IgG抗体质控线也可与金标抗体结合，形成红色 质控印记" I "，即两条红色印记" I I "表示为阳性；反之样品溶液中无 glycinin时，则不 能与金标抗体结合，同样也不能与纤维素膜上喷点的兔源多克隆抗体检测线结合，不显示 红色检测印记，而纤维素膜上喷点的羊或兔抗小鼠 IgG抗体质控线可与金标抗体结合，显 示红色质控线印记" I "，形成一条红色印记" I "表示为阴性。无论结果为阳性还是阴性， 都会显示红色质控印记，若不显示则表示试纸失效。 本技术的积极有益效果： (1)特异性强，灵敏度高。本技术试纸以双抗体夹心原理为基础制备而成，两 种抗体分别为胶体金纳米颗粒标记的鼠源单克隆抗体和兔源多克隆抗体。金标抗体中金颗 粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对 抗体的特异性及亲和力影响很小，且具有较高的标记率。试验表明，该试纸具有较强的特异 性和较高的灵敏度，可检测50ng/mL的微量glycinin。 (2)简便、快速。使用本技术试纸，无需其他任何试剂和仪器，可现场操作。只 需将试纸插入被检样品液中，IOmin后即可判定检测结果。 (3)结果显示形象、直观、准确。本技术试纸以显示红色印记" I I "和" I " (或类似性状）作为检测的阳性和阴性标记，即在纤维素膜上显示两条红色印记" I I "（检 测线和质控线)，表示被检样品中含有glycinin;显示一条红色印记" I "（质控线)，表示被 检样品中不含glycinin。此结果可用肉眼直接观测，判定形象、直观、准确，简单明了，不易 出现假阳性和假阴性等人为误判。 (6)节省费用。适用于进行现场检测，费用低廉，节省大量贵重仪器及设备费用。 (7)适用范围广，便于推广应用。本技术实现了基于双抗体夹心的原理在快速 检测glycinin胶体金免疫层析试纸中的应用，该试纸操作简便，能满足不同层次人员的需 要，包括海关检疫、卫生检疫、质量监测、农畜产品生产企业和饲料加工企业等。本技术 在保障食品安全、保护对于大豆过敏的消费者健康以及保障畜禽饲料安全等方面具有极其 重要的意义，将具有明显的经济效益和社会效益。【附图说明】 图1为大豆致敏蛋白glycinin鼠源本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速检测大豆致敏蛋白glycinin的胶体金免疫层析试纸，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫，其特征在于：在纤维素膜设有用glycinin兔源多克隆抗体溶液喷点的隐形检测线以及用羊抗小鼠IgG抗体或兔抗小鼠IgG抗体溶液喷点的隐形质控线；所述结合垫吸附有胶体金纳米颗粒标记的glycinin鼠源单克隆抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡骁飞，邓瑞广，魏凤仙，王耀，柴书军，孙亚宁，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：新型
国别省市：河南;41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。