【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种ccg-1423抑制猪流行性腹泻病毒体外感染的方法及应用，属于细胞生物学、病毒学。
技术介绍
1、猪流行性腹泻病(porcine epidemic diarrhea，ped)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，pedv)引起的一种肠道传染病，可感染各个年龄段的猪，表现出呕吐、食欲下降、脱水、腹泻等症状，但新生仔猪的感染情况更严重，死亡率可达100％。该病的传播途径主要是粪口传播，也可通过初乳从母猪垂直传播给新生仔猪。pedv属于冠状病毒科α-冠状病毒属，病毒粒子近似球形，外有囊膜，直径约为130nm(90-190nm)，是单股正链rna病毒。pedv在体外主要感染猪肾细胞llc-pk1、非洲绿猴肾上皮细胞vero等。目前，临床上尚无抗pedv感染特效药物，阻碍了对ped的有效防控，因此亟需研发pedv抗病毒药物来降低ped的发病率和死亡率。
2、ccg-1423的正式名称为n-[2-[4(4-氯苯基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙氧基]-3，5-双(三氟甲基)-苯甲酰胺，其结构式如下：
3、
4、ccg-1423可以直接阻断血清应答因子(serum response factor，srf)，它是一种小g蛋白ras同源基因家族成员a(ras homolog gene family member a，rhoa)信号通路的小分子抑制剂。研究表明，ccg-1423对癌细胞侵袭的抑制作用往往会改善其他病理变化，包括胰岛素抵抗、血管疾病中新
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种ccg-1423抑制猪流行性腹泻病毒体外感染的方法及应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
3、一种小分子抑制剂ccg-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的药物中的应用。
4、所述的小分子抑制剂ccg-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的蛋白表达的药物中的应用。
5、所述的小分子抑制剂ccg-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的rna含量的药物中的应用。
6、所述的小分子抑制剂ccg-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的病毒滴度的药物中的应用。
7、所述的应用中，小分子抑制剂ccg-1423的浓度为2μm。
8、一种小分子抑制剂ccg-1423抑制猪流行性腹泻病毒体外感染的方法，具体步骤为：
9、(1)将猪肾细胞llc-pk1按2.5×105个/ml铺设于24孔细胞培养板上，每孔加入500μl的dmem培养基，于37℃、5％co2培养箱中培养24h；
10、(2)更换新的dmem培养基，分别以病毒感染复数为0.5的pedv流行毒株hnxx和毒株dr13于37℃孵育llc-pk1细胞1h；弃培养上清，用pbs缓冲液清洗细胞三次，洗去未侵入细胞的病毒粒子；
11、(3)向细胞培养板孔中加入含2μm ccg-1423的500μl dmem培养基，感染pedv hnxx流行毒株的细胞中需另外加入终浓度为2μg/ml的胰蛋白酶，于37℃继续培养24h。
12、所述dmem培养基含10％(v/v)的胎牛血清、100u/ml的青霉素、100μg/ml的链霉素。
13、本专利技术的有益效果：
14、本专利技术综合利用细胞生物学和病毒学等技术，首次发现ccg-1423具有抑制猪流行性腹泻病毒体外感染的活性，提供了ccg-1423在制备抗猪流行性腹泻病毒药物中的应用。ccg-1423在宿主细胞表现出显著的抑制猪流行性腹泻病毒增殖的作用，具有良好的抗猪流行性腹泻病毒效果。
15、本专利技术实施例中，以猪肾细胞llc-pk1作为细胞模型进行研究，实验结果表明：ccg-1423在10μm浓度范围内，对细胞没有明显毒性；在细胞感染pedv过程中添加2μm ccg-1423，与未加抑制剂的对照组相比，添加有ccg-1423处理组pedv的病毒感染情况、蛋白表达量、rna含量和病毒滴度明显降低。因为ccg-1423可抑制pedv体外感染中的病毒滴度，预测ccg-1423可作为安全有效的抗猪流行性腹泻病毒药物而进行开发，具有良好应用前景。
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1.一种小分子抑制剂CCG-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的小分子抑制剂CCG-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的蛋白表达的药物中的应用。
3.如权利要求1所述的小分子抑制剂CCG-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的RNA含量的药物中的应用。
4.如权利要求1所述的小分子抑制剂CCG-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的病毒滴度的药物中的应用。
5.如权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，小分子抑制剂CCG-1423的浓度为2μM。
6.一种小分子抑制剂CCG-1423抑制猪流行性腹泻病毒体外感染的方法，其特征在于，具体步骤为：
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述DMEM培养基含10％(v/v)的胎牛血清、100U/mL的青霉素、100μg/mL的链霉素。
【技术特征摘要】
1.一种小分子抑制剂ccg-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的小分子抑制剂ccg-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的蛋白表达的药物中的应用。
3.如权利要求1所述的小分子抑制剂ccg-1423在制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的rna含量的药物中的应用。
4.如权利要求1所述的小分子抑制剂ccg-1423在制备抑制猪流行性腹...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏蔷，黄慧敏，刘运超，金前跃，贾广敏，张改平，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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