本发明专利技术公开了一种抗BASIGIN人源化抗体及其应用，该抗体包含免疫球蛋白轻链可变区和免疫球蛋白重链可变区，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含CDR1：如序列表中SEQ ID NO:13所示；CDR2：如序列表中SEQ ID NO:14所示；CDR3：如序列表中SEQ ID NO:15所示；所述的免疫球蛋白重链可变区包含CDR1：如序列表中SEQ ID NO:16所示；CDR2：如序列表中SEQ ID NO:17所示；CDR3：如序列表中SEQ ID NO:18所示。所述的抗BASIGIN人源化抗体在制备治疗肺癌、肝癌和结直肠癌药物中的应用；所述的抗BASIGIN人源化抗体在制备治疗疟疾药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体地说，本专利技术提供了一种抗BASIGIN人源化抗体及其应用。
技术介绍
BASIGIN(EMMPRIN、Neurothelin、M6antigen、BASIGIN)是一种高度糖基化的、分子量为50～60kD的跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白超家族(IgSF)成员。在人类，BASIGIN共有269个氨基酸组成，可分为胞外区、跨膜区及胞内区。N端起始翻译后前21个残基为信号肽，22～205构成胞外区，206～229为跨膜区，具有典型的亮氨酸拉链结构，C端230～269为胞内区。已证实BASIGIN在许多类型的人实体瘤，如肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、食管癌或胃癌中过度表达。既往研究表明，BASIGIN分子是肿瘤发展过程重要的功能性膜蛋白，参与多种与癌症有关的现象，如：①BASIGIN介导肿瘤细胞的粘附和运动：肿瘤细胞表面表达的BASIGIN与vinclin相互作用，促进肿瘤细胞伪足形成，铺展及粘附；与膜联蛋白annxinII相互作用，促进肿瘤细胞MMP-2分泌，增强肿瘤细胞运动能力和侵袭潜能；通过刺激肿瘤细胞自身及其周围的成纤维细胞，分泌多种基质金属蛋白酶(extracellularmatrixmetalloproteinase，MMP)，包括MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-11以及MT1-MMP和MT2-MMP等，从而加快肿瘤周围基质的降解，促进了肿瘤的转移。②BASIGIN参与肿瘤细胞的无氧代谢：BASIGIN是单羧酸转运体(monocarboxylatetransporter)MCT-1和MCT-4的重要分子伴侣。BASIGIN可以与MCT-1和MCT-4相互结合，辅助它们在细胞膜上正确定位，并继续调节它们对乳酸代谢产物的转运功能。由于肿瘤细胞主要依靠无氧代谢产生能量，因此BASIGIN可间接通过影响MCT的表达和功能调节肿瘤细胞的能量代谢。③BASIGIN促进肿瘤细胞耐药：BASIGIN分子在通过共表达调节机制影响MDR基因的转录，促进P-g的表达，从而可诱导肿瘤的多药耐药。Kanekura等证实BASIGIN通过P-g导致MDR，所以下调BASIGIN的表达可能是一个有效抵制MDR的靶点。另外，BASIGIN促进p-TFII-I细胞核内定位，上调未折叠蛋白反应(UPR)的关键因子Bip表达，引起肿瘤细胞内质网应激和UPR，从而抑制凋亡及对药物的不敏感性，抑制BASIGIN分子可促进肝癌细胞凋亡，并可增强肿瘤细胞对现有抗肿瘤药物的敏感性。④BASIGIN上调VEGF表达促进肿瘤新生血管形成，抑制BASIGIN的表达，能够显著抑制VEGF的分泌和肿瘤血管的生成。⑤BASIGIN结合多种分子参与相互作用：BASIGIN蛋白的跨膜段存在一个在进化上高度保守的负电荷谷氨酸，是其可以与多种细胞膜蛋白发生相互作用的结构基础，同时也提示BASIGIN可以通过与多种蛋白的相互作用，影响细胞的多种生理活动。BASIGIN可以通过与CD98、Integrin、caveolin-1、cyclophilins(CyP)等多种蛋白相互作用，从能量代谢、细胞-基质相互作用、信号传导等多个方面影响肿瘤细胞的生长和转移过程。此外，多项回顾性研究还表明BASIGIN分子在肿瘤组织中的表达强度与肿瘤病人的预后之间，存在着紧密的相关性。在非小细胞肺癌病人中，BASIGIN表达增高的水平与病人的预后情况密切相关。因此，BASIGIN分子已成为肿瘤治疗的新靶点，其中抗体药物“利卡汀”的研制成功，证明了该靶点成药的安全性和有效性。此外，红细胞上表达的BASIGIN通过与恶性疟原虫的棒状体蛋白PfRh5以配体-受体的方式发生相互作用，介导了原虫与红细胞的远端识别，是恶性疟原虫入侵红细胞的关键环节。PfRh5与红细胞上的BASIGIN分子的相互作用在不同恶性疟虫株是普遍存在的，提示靶向红细胞上的BASIGIN分子有望成为抗疟新药的重要靶点。新型的抗人红细胞的BASIGIN分子的抗疟药物与传统的抗疟化学药物共同使用，能够克服化疗药物的耐药性。单克隆抗体(McAb)以其高特异性、高亲和力、毒副作用小、免疫原性低、体内作用时间长、可利用体内自身免疫系统发挥疗效等优点，在许多疾病的诊疗中得到广泛应用，成为新型药物研制的一条有效途径。然而，鼠源McAb重复注入人体内会引起患者诱发人抗鼠抗体(humanantimouseantibody，HAMA)反应，出现全身过敏毒性反应并阻断抗体功效的发挥。因此，人源抗体和人源化抗体以其特有的优势越来越成为抗体药物研发的主流趋势。本专利技术基于以上的研究背景，通过噬菌体抗体库筛选高亲和力的新型抗BASIGIN人源抗体，并通过实验验证其生物学活性。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷和不足，本专利技术的目的是提供一种抗BASIGIN人源化抗体及其应用。第一方面，本专利技术提供了三种抗人BASIGIN人源化抗体，分别命名为单克隆抗体HP6H8-1、单克隆抗体HP6H8-2和单克隆抗体HP6H8-3，其均包含免疫球蛋白轻链可变区和免疫球蛋白重链可变区；(1)免疫球蛋白轻链可变区包含CDR1：如序列表中SEQIDNO:13所示；CDR2：如序列表中SEQIDNO:14所示；CDR3：如序列表中SEQIDNO:15所示；(2)免疫球蛋白重链可变区包含CDR1：如序列表中SEQIDNO:16所示；CDR2：如序列表中SEQIDNO:17所示；CDR3：如序列表中SEQIDNO:18所示；在一个优选实例中，单克隆抗体HP6H8-1包含如SEQIDNO:1所示的轻链可变区氨基酸序列和如SEQIDNO:3所示的重链氨基酸序列；该抗体的亲和性KD＝9.05×10-11M。在一个优选实例中，单克隆抗体HP6H8-2包含如SEQIDNO:5所示的轻链可变区氨基酸序列和如SEQIDNO:7所示的重链氨基酸序列；该抗体的亲和性KD＝5.83×10-11M。在一个优选实例中，单克隆抗体HP6H8-3包含如SEQIDNO:9所示的轻链可变区氨基酸序列和如SEQIDNO:11所示的重链氨基酸序列；该抗体的亲和性KD＝1.02×10-10M。本专利技术的另一目的在于提供编码上述重组人源化抗体的DNA分子。在一个优选实例中，单克隆抗体HP6H8-1轻链可变区核苷酸序列为SEQIDNO:2所示的序列，重链可变区的核苷酸序列为SEQIDNO:4所示的序列，该抗体的亲和性KD＝9.05×10-11M；在一个优选实例中，单克隆抗体HP6H8-2轻链可变本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗BASIGIN人源化抗体，其特征在于，该抗体包含免疫球蛋白轻链可变区和免疫球蛋白重链可变区，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含CDR1：如序列表中SEQ ID NO:13所示；CDR2：如序列表中SEQ ID NO:14所示；CDR3：如序列表中SEQ ID NO:15所示；所述的免疫球蛋白重链可变区包含CDR1：如序列表中SEQ ID NO:16所示；CDR2：如序列表中SEQ ID NO:17所示；CDR3：如序列表中SEQ ID NO:18所示。
【技术特征摘要】
1.一种抗BASIGIN人源化抗体，其特征在于，该抗体包含免疫球蛋白轻链可变区和免疫
球蛋白重链可变区，所述的免疫球蛋白轻链可变区包含CDR1：如序列表中SEQIDNO:13所
示；CDR2：如序列表中SEQIDNO:14所示；CDR3：如序列表中SEQIDNO:15所示；
所述的免疫球蛋白重链可变区包含CDR1：如序列表中SEQIDNO:16所示；CDR2：如序列
表中SEQIDNO:17所示；CDR3：如序列表中SEQIDNO:18所示。
2.如权利要求1所述的抗BASIGIN人源化抗体，其特征在于，所述的抗BASIGIN人源化抗
体包括单克隆抗体HP6H8-1，单克隆抗体HP6H8-1的轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:1
所示，单克隆抗体HP6H8-1的重链氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。
【专利技术属性】
技术研发人员：陈志南，朱平，黄婉，张征，张阳，张梦瑶，边惠洁，蒋建利，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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