本发明专利技术公开了一种针对人源抗体Fc片段的纳米抗体以及应用，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的VHH链，其编码基因序列如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30所示。通过本发明专利技术所公开的纳米抗体基因序列及宿主细胞，该纳米抗体能够在大肠杆菌内高效表达，应用于人源抗体和带有人源抗体Fc片段(标签)的重组蛋白的纯化和检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种针对人源抗体Fc片段的纳米抗体及其应用，属于生物技术或生物医学领域
技术介绍
抗体(Antibody)是一种由机体免疫系统针对外源物质(如细菌、病毒的蛋白)所产生的一种球状蛋白质，因此又被称为免疫球蛋白(Ig)。抗体通常由B细胞产生，在机体的免疫系统中行使多种生理学功能。抗体有多种类型，其中由B细胞分化而来的浆细胞所分泌的IgG型抗体是最普遍、最重要的一种类型，通常存在于脊椎动物的体液中，在成人的血液中含量能达到约10g/L。通常人们所说的抗体，即是指IgG型抗体。抗体是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过二硫键结合形成的、对称的Y型结构，Y型结构的两臂末端是抗原结合的部位，被称为Fab片段，Y型的柄部被称为Fc片段。由于抗体能够高效、特异地与体内和体外的各种抗原蛋白结合，使得抗体不仅能应用于调节免疫系统功能，还可以应用于各种高灵敏的检测方法。目前，抗体药物是生物技术药物最重要的组成部分，抗体试剂也是医学诊断和生物学研究中最常用到的试剂之一。因此，抗体相关的生物产品具有极高的应用前景和商业价值。抗体可以通过多种途径获得，例如：动物或人的血液、细胞培养、注射杂交瘤细胞的鼠的腹水等，但这均需要有效的方法进行纯化，以获得具有应用价值的抗体产品。目前最常用的抗体纯化方法是利用特殊蛋白质与抗体的Fc片段之间的高亲和力进行亲和层析。在进行抗体产品的工业生产的过程中，亲和层析是其中最为关键的一步，也是整个生产中耗费最高的部分。目前，纯化抗体普遍使用ProteinA或ProteinG偶联的交联琼脂糖进行亲和层析。但是，使用ProteinA/G进行抗体纯化，首先要进行ProteinA/G的表达和纯化，而ProteinA/G通常表达量较低，这就大大增加了抗体亲和层析的成本。在科研方面，有大量蛋白质采用融合人源Fc片段进行表达，以便识别和纯化，这都需要获得针对人源抗体Fc片段的抗体。因此，人们一直在努力探究新的方法来克服这些困难，针对人Fc片段的新型纳米抗体将有可能解决这一难题。纳米抗体是来源于骆驼科动物或软骨鱼的特殊抗体。研究表明，骆驼体内存在一种天然缺失轻链只含重链的抗体，称为重链抗体。克隆重链抗体的可变区可得到只由一个重链可变区组成的单域抗体，称为VHH抗体。VHH抗体的晶体直径仅有2.5nm，长4nm，因此又被称为纳米抗体。纳米抗体的大小只有传统IgG型抗体的十分之一，是天然存在的可与抗原结合的最小片段。纳米抗体能被单基因编码，可以很容易的利用微生物进行生产，并具有很高的产率。
技术实现思路
专利技术目的：为了解决上述技术问题，本专利技术筛选获得Anti-Fc的纳米抗体，并建立基于抗人源Fc片段纳米抗体的亲和层析方法，用于替代ProteinA/G，以降低实验室和工业化在纯化人源抗体和含人源抗体Fc片段的融合蛋白时的成本。技术方案：为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了一种针对人源抗体Fc片段的纳米抗体，所述纳米抗体具有SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25所示的氨基酸序列的VHH链，其编码核苷酸序列如SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30所示。作为优选，所述VHH链包括框架区FR和互补决定区CDR；所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3、FR4的氨基酸序列，其氨基酸序列分别为：SEQIDNO:1所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQIDNO:4所示FR4；或SEQIDNO:8所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQIDNO:4所示FR4；或SEQIDNO:10所示FR1，SEQIDNO:11所示FR2，SEQIDNO:12所示FR3，SEQIDNO:4所示FR4；或SEQIDNO:16所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQIDNO:4所示FR4；或SEQIDNO:8所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:17所示FR3，SEQIDNO:18所示FR4；所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列，对应上述各FR，所述CDR的氨基酸序列分别为：SEQIDNO:5所示CDR1，SEQIDNO:6所示CDR2，SEQIDNO:7所示CDR3；或SEQIDNO:9所示CDR1，SEQIDNO:6所示CDR2，SEQIDNO:7所示CDR3；或SEQIDNO:13所示CDR1，SEQIDNO:14所示CDR2，SEQIDNO:15所示CDR3；或SEQIDNO:9所示CDR1，SEQIDNO:6所示CDR2，SEQIDNO:7所示CDR3；或SEQIDNO:19所示CDR1，SEQIDNO:20所示CDR2，SEQIDNO:7所示CDR3。本专利技术还提供了一种DNA分子，其编码上述针对人源抗体Fc片段的纳米抗体，其核苷酸序列如SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30所示。本专利技术还提供了一种表达载体，其包含上述DNA分子的核苷酸序列。本专利技术还提供了一种宿主细胞，其表达上述针对人源抗体Fc片段的纳米抗体。本专利技术还提供了所述针对人源抗体Fc片段的纳米抗体在分离纯化人源抗体中的应用。本专利技术还提供了所述针对人源抗体Fc片段的纳米抗体在分离纯化含人源抗体Fc标签的融合蛋白中的应用。本专利技术最后还提供了所述人源抗体Fc片段纳米抗体在检测人源抗体Fc片段中的应用。技术效果：相对于现有技术，本专利技术具有以下技术优势：本专利技术采用人源抗体Fc片段免疫新疆双峰驼，随后利用该骆驼外周血淋巴细胞建立针对人源抗体Fc片段的纳米抗体基因文库，将人源抗体Fc片段偶联在酶标板上，以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选免疫性的纳米抗体基因库，从而获得了针对人源抗体Fc的高亲和力和高特异性的纳米抗体的基因，将此基因转入大肠杆菌中，建立了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株，根据序列比对软件分析各个克隆株的基因序列，获得针对人源抗体Fc片段的纳米抗体VHH链的氨基酸序列，并证明该纳米抗体可以和人源抗体Fc片段特异性结合，从而用于对人源抗体和偶联人源抗体Fc片段的重组蛋白的纯化。附图说明图1是对所构建的噬菌体展示纳米抗体文库进行插入率检测的菌落PCR的电泳图本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种针对人源抗体Fc片段的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的VHH链，其编码核苷酸序列分别如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30所示。
【技术特征摘要】
1.一种针对人源抗体Fc片段的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体具有SEQID
NO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24或SEQIDNO:25所示的氨基酸
序列的VHH链，其编码核苷酸序列分别如SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQID
NO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30所示。
2.根据权利要求1所述针对人源抗体Fc片段的纳米抗体，其特征在于，所述VHH
链包括框架区FR和互补决定区CDR；
所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3、FR4的氨基酸序列，其氨基酸序列分别为：
SEQIDNO:1所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQID
NO:4所示FR4；
或SEQIDNO:8所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQ
IDNO:4所示FR4；
或SEQIDNO:10所示FR1，SEQIDNO:11所示FR2，SEQIDNO:12所示FR3，
SEQIDNO:4所示FR4；
或SEQIDNO:16所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:3所示FR3，SEQ
IDNO:4所示FR4；
或SEQIDNO:8所示FR1，SEQIDNO:2所示FR2，SEQIDNO:17所示FR3，SEQ
IDNO:18所示FR4；
所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢维，孙琪琛，苏志鹏，赵林泓，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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