本发明专利技术提供了一种重组抗NC08单克隆抗体，轻链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，重链可变区具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。本发明专利技术还公开了编码该抗体的DNA分子，表达该抗体的载体以及被该表达载体转化的真核宿主细胞。本发明专利技术提供的抗NC08单克隆抗体能在NC08用药过程中快速检测受试者血清中NC08浓度，同时也能作为抗NC08的阳性对照抗体应用于NC08的免疫原性检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及抗体
具体地说，本专利技术设及一种新的重组抗人抗狂犬病毒 单克隆抗体的单克隆抗体，及其制备方法和用途。
技术介绍
狂犬病是由狂犬病毒所致的自然疫源性或动物源性人畜共患急性传染病，流行性 广，病死率几近百分之百，对人民生命健康造成严重威胁。人狂犬病主要通过患病动物咬 伤、抓伤或由粘膜感染引起，在特定的条件下还可通过呼吸道气溶胶传染。传染动物主要是 犬（超过90%)，其次是猫。根据中国疫情报告系统资料，1998年后狂犬病疫情年增长幅度 越来越高，死亡人数不断攀升。 对于狂犬病毒暴露后预防，WK)推荐的处理方法是全程注射狂犬疫苗，同时合并注 射抗狂犬病马血清巧RIG)或抗狂犬病毒人免疫球蛋白（HRIG)。但HRIG由于来源限制价格 昂贵，而马血清制品则较易发生严重的过敏反应，所W现今国际上已经公认有必要用重组 单克隆抗体取代狂犬病毒暴露后预防中使用的抗狂犬病毒血源抗体。 此外，抗狂犬病毒重组单克隆抗体具有中和效果好、安全性好、成本低、可大量生 产等优点，具有取代邸IG和皿IG的潜在能力，可用于狂犬病的暴露后预防。陈哲等人运用 瞻菌体表面呈现技术，采集多个具有高滴度狂犬病毒抗体的狂犬病毒疫苗注射者外周血淋 己细胞，构建了抗狂犬病毒Fab基因工程抗体文库，并对抗体库进行富集筛选，获得特异 性抗狂犬病毒基因工程抗体Fab段，并将其命名为RVFabS。由于小分子抗体在亲和力和中 和活性方面均低于全抗体，于是他们将上述F油抗体RVF油8的轻链和重链基因分别克隆进 入全抗体表达载体化cA-化并转染昆虫S巧细胞，利用杆状病毒/昆虫细胞系统实现全抗 体的分泌型表达得到全抗体RVIgGS。并进一步对其进行功能鉴定，结果表明RVIgGS具有 较好的中和活性，能达到876. 61IU/mg，完全具备了中和国际标准攻击毒株CVS-11株的能 力（病毒学报.2010. 7; 26(4) : 271-275)(中国专利；人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性抗体 (RVF油8)，公开号CN101812131A)。 华北制药集团新药研究开发有限责任公司将RVF油8的全抗体基因序列在CH0 细胞表达系统中表达，构建出成功高效表达该抗体的工程细胞，并把得到的单克隆抗体 命名为NC08。该方法操作工艺简便、产品表达水平高、生产的抗体质量均一性及稳定 性好，具备产业化价值（中国专利；重组人抗狂犬病毒单克隆抗体的制备方法，公开号 CN101100663A)。此外，NC08与本公司之前开发的醒57组成组合制剂，可进一步扩大对狂 犬病毒毒株的覆盖。 在NC08及其组合制剂进行临床前研究及临床研究的过程中，W及将来成为药物 后患者应用的过程中，为了研究药物代谢及保证用药安全，需要检测受试者(动物或人）或 患者血清的NC08浓度或者需要检测人抗NC08的抗体。在某些情况下，可能需要从现有产 品中检测有无NC08的添加。因此，迫切需要一种能有效、快速检测NC08和人抗NC08抗体 的广品。
技术实现思路
本专利技术需要解决的第一个技术问题是提供一种抗NCOS单克隆抗体，用于检测 NC08浓度和人抗NC08抗体。 本专利技术需要解决的第二个技术问题是提供一种编码上述抗NC08单克隆抗体的 DNA分子。 本专利技术需要解决的第=个技术问题是提供一种表达载体。 本专利技术需要解决的第四个技术问题是提供一种真核宿主细胞。 本专利技术需要解决的第五个技术问题是提供一种该重组抗NC08单克隆抗体的制备 方法。 本专利技术需要解决的第六个技术问题是提供上述单克隆抗体的两种用途。 为实现上述专利技术目的，本专利技术一方面提供了一种重组抗NC08单克隆抗体，该抗体 含有重链可变区和轻链可变区，其特征在于，轻链可变区具有SEQIDNO: 1所示的氨基酸序 列，重链可变区具有SEQIDN0:2所示的氨基酸序列。 本专利技术另一方面提供了编码上述单克隆抗体的DNA分子。 在一个较佳的实例中，该DNA分子含有SEQIDN0:3所示的编码所述单抗轻链可 变区的核巧酸序列，W及SEQIDN0:4所示的编码所述单抗重链可变区的核巧酸序列。 本专利技术第S方面提供了一种表达载体，该表达载体含有上述DNA分子。 本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，其特征在于，它含有上述表达载体。在一个 较佳的实例中，该宿主细胞是CH0细胞。 本专利技术第五方面提供了一种制备上述单克隆抗体的方法，其特征在于，该方法包 括： a) 构建含有权利要求2所述DNA分子的表达载体； b) 用步骤a)所述的表达载体转化宿主细胞； C)培养步骤b)所得的宿主细胞； d)分离纯化获得所述单克隆抗体。 本专利技术提供的抗体可W在体外检测NC08的浓度和人抗NC08抗体，本专利技术第六方 面提供了一种利用本专利技术所述抗体检测NC08浓度的方法。在一个较佳的实例中，检测方法 为桥联化ISA法。该抗体可用于制备检测试剂或者检测试剂盒。 本专利技术设及一种重组抗NC08单克隆抗体，该抗体包含重链可变区和轻链可变区， 轻链可变区具有SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列，重链可变区具有SEQIDNO:2所示的氨 基酸序列。 本文所用的术语"单克隆抗体(单抗)"指从一类基本均一的群体获得的抗体，即该 群体中包含的单个抗体是相同的，除少数可能存在的天然发生的突变外。单克隆抗体高特 异性地针对单个抗原位点，而且，与常规多克隆抗体制剂(通常是具有针对不同决定簇的不 同抗体）不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性外，单克隆抗 体的好处还在于它们是通过基因工程手段合成的，不会被其它免疫球蛋白污染。修饰语"单 克隆"表示了抗体的特性，是从基本均一的抗体群中获得的，该不应被解释成需要用任何特 殊方法来生产抗体。 本文所用的术语"抗体"和"免疫球蛋白"是有相同结构特征的约150000道尔顿 的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链（L)和两个相同的重链化）组成。每条轻链通过一 个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重 链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区（VH)，其后是多个恒定区。 每条轻链的一端有可变区（VU，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相 对，轻链的可变区与重链的可变区相对。特殊的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形 成界面。本文所用的术语"可变"表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形 成各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并不均匀地分布在整个抗体 可变区中。它集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区（CDR)或超变区中的=个片段 中。可变区中较保守的部分称为构架区（FR)。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个 FR区，它们大致上呈0-折叠构型，由形成连接环的=个CDR相连，在某些情况下可形成 部分0折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR-起形 成了抗体的抗原结合部位。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的 效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。 单克隆抗体可用本领域技术人员熟知的各种方法来制得。例如，单克隆抗体可用 杂交瘤方法制得，或用重组DNA方法制得，也可从瞻菌体抗体库中分离获得。本专利技术还提供了编码本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种重组抗NC08单克隆抗体，它包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李燕霞，赵伟，王惠欣，刘艳玲，常亮，段迎霞，李立敏，刘国芳，曹晨华，刘晓志，程立均，高健，段宝玲，
申请(专利权)人：华北制药集团新药研究开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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