抗VEGF抗体及其用途制造技术

一种抗血管内皮生长因子抗体或其结合片段，其包括重链可变区，包括：(1)CDRH1序列，选自SEQ ID NO:17、20、23、26、29、32、35或38；(2)CDRH2序列，选自SEQ ID NO:18、21、24、27、30、33、36或39；和(3)CDRH3序列，选自SEQ ID NO:19、22、25、28、31、34、37或40；以及轻链可变区，包括：(1)CDRL1序列，选自SEQ ID NO:41、44、47、50、53、56、59或62；(2)CDRL2序列，选自SEQ ID NO:42、45、48、51、54、57、60或63；以及(3)CDRL3序列，选自SEQ ID NO:43、46、49、52、55、58、61或64。一种使用该抗体治疗或预防血管内皮生长因子相关疾病的方法，例如糖尿病性视网膜病、老年性黄斑病变或癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术设及VEGF抗体，尤其是运些抗体的生产及用途。
技术介绍
血管内皮生长因子（Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是一种可 促进血管形成（vasculogenesis)(即一种在胚胎发育中制造血管的过程）及血管新生 (angiogenesis)(即一种从既有的血管上形成新血管的过程）的信号蛋白。因其具有血管 新生的特性，VEGF可W于血液循环不足时（例如受伤后）恢复组织的氧气供应。 阳00引 当组织中的VEGF过度表达时，可导致疾病症状。例如，VEGF过度表达会导致视网 膜上的血管疾病（如糖尿病性视网膜病（di油eticretinopathy))。此外，实体瘤（solid tumor)在没有足够的血管供应W获得生长所需的营养情况下，无法生长超过一定限制的大 小。因此为了克服该限制，实体瘤会表达VEGFW使得其生长及转移。VEGF家族成员包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和胎盘生长因子（placenta growthfactor,PGF)。其中，VEGF-A为最重要的因子，其可调控正常和病理性的血管新 生（即血管生成）。VEGF-C和VEGF-D则调控淋己管的生成。VEGF-A包括数个蛋白质异构 体一-VEGFi2i、VEGFie日、VEGFisg和VEGF2D6(下标数字代表蛋白质的长度），其可通过不同的 生理特性和胞外蛋白分解W调控生理功能。例如，VEGFi2i是唯一无法连接肝素的VEGF，因 此无法附着于细胞表面。VEGFiee则具有外分泌的性质，故可附着于胞外基质。在运些之中， VEGFiw是一种具有许多基本氨基酸（高pi值）的蛋白质，并且几乎完全吸附于细胞表面。 VEGFiee是一种具有生理活性的主要异构物。通过胞外蛋白酶对VEGF的降解影响其生物有 效性。例如，纤溶酶（plasmin)可分解VEGFie或VEGFiwW释放出保有生物活性的前110个 残基片段。然而，纤溶酶也可消化VEGF片段W降低其有丝分裂的活性。 阳0化]正常组织的血管生成是通过VEGF调控。在此过程中，数种分化的上皮细胞发挥不 同的作用。例如，尖端细胞（tipcells)可能形成为柄细胞（sta化cells),然后该柄细胞 会在该尖端细胞上增殖W形成血管内腔。在正常情况下，VEGF和抗VEGF会平衡地存在。因 此，血管可正常地生成及分化。但在肿瘤生长的过程中，会失去运种平衡，并且形成网状的 血管分布围绕着肿瘤W提供血液和所需营养给肿瘤细胞，因此该肿瘤细胞可持续的生长及 转移。 自1970年后，VEGF的生理功能逐渐被鉴别出来。基于抑制血管新生可抑制并治疗 癌症的理论来发展药品。一些药品已经出现于市场上。现今，AvaStin⑥化evacizum油） 为主要抗血管新生的抗体药品。在2011年，Avastin⑩在美国的整体销售额高达61.93亿 美元（Med.Ad.化WS, 2011年10月）。Ayastin⑥可有效治疗肺癌、乳癌、结肠癌、肾癌、脑癌 和其它恶性肿瘤。除了可使围绕肿瘤的血管收缩外，Avastin⑥也帮助其它化疗药物渗透 入肿瘤内W发挥其功效。 因为抗VEGF试剂可W是一种有用的药品，所W可用于治疗或控制VEGF相关疾病 的抗体仍然是有其需求的。
技术实现思路
本专利技术的实施方式设及可抑制血管内皮生长因子（VEG巧功能的抗体。该抗体可 能是多株抗体或单株抗体。 在一个方面，本专利技术设及能够中和VEGF活性的抗VEGF抗体。根据本专利技术的一个 实施方式的抗体可W是多株或单株抗体。根据本专利技术的实施方式，抗体可预防与VEGF不希 望的活性有关的疾病，如癌症生长及转移。 根据本专利技术的实施方式，抗体或其结合片段（例如，其scFv、F油或F(油)2片段） 包括重链可变区化eavychainvari油leregion,Vh)，所述重链可变区包括CDRH1、CDR肥 和CDR册序列，其中所述CDRH1的序列选自沈QIDN0:17、20、23、26、29、32、35或38,其中 所述CDR肥的序列选自沈QID^:18、21、24、27、30、33、36或39，^及其中所述〔0册3的序 列选自沈QIDN0:19、22、25、28、31、：M、37 或 40。 根据本专利技术的一些实施方式，抗体或其结合片段（例如，其scFv、F油或F(油)2片 段）包括轻链可变区（li曲tchainvari油leregion，VL)，该轻链可变区包括CD化1、CD化2 和CD化3序列，其中所述CD化1序列选自沈QIDN0:41、44、47、50、53、56、59或62,其中所 述CD化2序列选自沈QID^:42、45、48、51、54、57、60或63，^及其中所述〔0化3序列选自 沈QID側：43、46、49、52、55、58、61或64。 根据本专利技术的一些实施方式，抗体或其结合片段（例如，其scFv、F油或F(油)2 片段）包括重链可变区（Vh)，所述重链可变区包括CDRHUCDR肥和CDR册序列，其中所述 CDRH1序列选自沈QID側：17、20、23、26、29、32、35或38，其中所述〔0册2序列选自沈9 10 ^:18、21、24、27、30、33、36或39，^及其中所述〔0册3序列选自沈910^:19、22、25、28、 31、34、37或40 及轻链可变区（\)，所述轻链可变区包括CD化1、CD化2和CD化3序列， 其中所述CD化1序列选自沈QID^:41、44、47、50、53、56、59或62，其中所述〔0化2的序 列选自沈QID側:42、45、48、51、54、57、60或63，^及其中所述〔0化3的序列选自沈910 N0:43、46、49、52、55、58、61 或 64。 根据本专利技术的任一上述实施方式，抗体或其结合片段（例如，其scFv、F油或 F(油)2片段）可能与一或多个在VEGF上具有沈QIDN0:66、沈QIDN0:67和/或沈QID N0:68序列的抗原决定位（epitope)结合。 在另一个方面，本专利技术设及通过投药予有需要的个体能够中和VEGF活性的抗 VEGF抗体，来治疗或预防VEGF相关疾病（如糖尿病性视网膜病或癌症（癌症生长或转移）） 的方法。 根据如前所述的任何实施方式，抗体可能为单株抗体。根据如前所述的任何实施 方式，抗体可能为人源化抗体化umanizedantibody)或完全人类抗体（completehuman antibody)。 本专利技术的其他方面和优点将通过下列描述和权利要求书变得显然。【附图说明】 图1示出了根据本专利技术实施方式利用隧菌体库产生抗VEGF抗体的示意图。 图2示出了根据本专利技术实施方式利用隧菌体库W产生抗VEGF抗体的示例方法。 图3A示出了本专利技术的抗体重链可变区序列。图3B示出了本专利技术抗体的轻链可变 区序列。 图4A示出了根据本专利技术实施方式的抗VEGF抗体的重链可变区序列CDRHUCDR肥 和CDR册与Avastin?抗体的比较。 阳02U 图4B示出了根据本专利技术实施方式的抗VEGF抗体的轻链可变区序列C抓L1、CD化2 和CD化3与Avastin⑥抗体的比较。 图5示出了各种用于定性本专利技术全本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗血管内皮生长因子抗体或其结合片段，包括：重链可变区，包括：(1)CDRH1序列，选自SEQ ID NO:17、20、23、26、29、32、35或38；(2)CDRH2序列，选自SEQ ID NO:18、21、24、27、30、33、36或39；和(3)CDRH3序列，选自SEQ ID NO:19、22、25、28、31、34、37或40；其中所述抗体具有中和血管内皮生长因子活性的能力。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖建勋，赖彦达，吴彦宥，蔡宜玨，林祐莹，
申请(专利权)人：财团法人生物技术开发中心，DCB美国有限责任公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71