抗-WT1/HLA双特异性抗体制造技术

技术编号:14657264 阅读:214 留言:0更新日期:2017-02-16 22:48
本文公开了一种与人免疫效应细胞抗原和WT1肽/HLA‑A表位具有反应性的T细胞受体模拟(TCRm)mAb的双特异性形式。该抗体选择性结合于表达WT1和HLA‑A的白血病和实体瘤细胞以及释放干扰素‑(IFN‑γ)并在体外杀伤靶癌细胞的活化的静止人T细胞。重要的是,所述抗体介导自体T细胞增殖和针对新鲜卵巢癌细胞的定向的强效细胞毒性。利用3种不同的表达WT1/HLA‑A2的人癌症(包括弥漫性Ph+急性淋巴细胞性白血病(ALL)、弥漫性急性髓系白血病或腹膜间皮瘤)在NOD SCID SCID γc*(NSG)小鼠中证明所述抗体的体内治疗活性。在两个白血病异种移植物模型中,接受所述抗体和T细胞的小鼠也显示更长的存活时间和延迟的肢体瘫痪。还提供了使用本文所述的双特异性抗体刺激初次T细胞应答和二次T细胞应答的方法,所述初次T细胞应答包括刺激针对第一肿瘤抗原的细胞毒性T细胞,所述二次T细胞应答包括刺激针对第一肿瘤抗原和/或针对第二肿瘤抗原的效应T细胞和/或记忆T细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用据此依据35U.S.C.§119(e)要求2013年11月7日提交的美国临时申请序列第61/901,310号和2014年8月15日提交的美国临时专利申请序列号62/037,875的权益,这两个优先权文件的公开内容通过引用整体并入本文。本申请包含与下列申请的主题相关的主题:2011年4月1日提交的美国临时申请第61/470,635号和2011年5月31日提交的美国临时申请第61/491,392号,以及2013年9月27日提交的标题为\T-CellReceptorLikeAntibodiesSpecificforWT1Peptides\的美国非临时申请第14/008,447号和2013年3月15日提交的标题为\AntibodiestoCytosolicPeptides\的共同转让的美国临时申请第61/798,563;每个申请的内容据此通过引用整体并入。联邦资助研究下的权利声明本专利技术根据美国国立卫生研究院授予的第P01CA23766和R01CA55349号拨款在政府支持下完成。政府享有本专利技术的某些权利。序列表本申请包含计算机可读格式的序列表(文件名:48317_SeqListing.txt;创建于:2014年11月7日;大小:93,841个字节)作为本公开的单独部分,所述序列据此通过引用整体并入本申请。
本专利技术总体上涉及抗胞质溶胶蛋白的抗体。更具体地说,本专利技术涉及抗维尔姆斯氏肿瘤(Wilm'stumor)癌基因蛋白(WT1)的抗体,特别是识别与主要组织相容性抗原以及免疫效应细胞表面上展示的抗原结合的WT1肽的双特异性抗体。专利技术背景识别MHCI类分子的背景中的关键细胞内蛋白的肽片段的治疗性T细胞受体样单克隆抗体(TCRmmAb)的开发,正作为靶向细胞内肿瘤特异性抗原(Ag)的新方法出现。大多数肿瘤特异性Ag是对于经典mAb疗法来说不可及的细胞内蛋白质。这些蛋白质被降解、加工并通过MHCI类分子作为肽/MHC复合物来展示,所述肽/MHC复合物被细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的TCR识别。因此,许多针对触发对低密度的肿瘤特异性肽/MHC复合物的T细胞应答的方法已被尝试,取得有限的成功。肾母细胞瘤蛋白(WT1)是用于T细胞免疫疗法的被良好验证的人类肿瘤特异性Ag。WT1在广泛的人造血恶性肿瘤、白血病干细胞以及不同实体瘤中过表达。在正常成人组织中,所述蛋白具有有限的低表达,这使得其成为理想的癌症特异性靶(Gessler等Nature.1990;346(6280):194-197;Menssen等Leukemia.1995;9(6):1060-1067;Oji等JpnJCancerRes.1999;90(2):194-204)。WT1表位特异性T细胞和针对WT1全蛋白的抗体在患有造血恶性肿瘤和实体瘤的患者中均被检测到,这表明WT1是高度免疫原性抗原(Gaiger等Clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch.2001;7(3增刊):761s-5s;Gillmore等Clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch.2006;12(1):34-42)。此外,在异体移植干细胞移植后观察到移植物抗白血病与可检测的WT1特异性CTL之间的相关性,进一步证明了这些T细胞的治疗活性。WT1-衍生的肽片段RMFPNAPYL(RMF;SEQIDNO:1)是在HLA-A0201分子的背景中用于CD8T细胞识别的研究最充分和验证最充分的表位。RMF表位已被广泛地应用于肽疫苗或作为来自患者(患有急性髓系白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)和各种实体瘤)的离体扩增的过继转移的CD8T细胞的靶。这些研究证明与一些患者中的临床应答相关的肽表位的免疫原性(Krug等CancerImmunolImmunother.2010;59(1467-1479);Maslak等Blood.2010;116(2):171-9;Keilholz等Blood.2009;113(26):6541-8;Oka等ScientificWorldJournal.2007;7:649-65;Oka等ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica.2004;101(38):13885-90;Letsch等和Keiholz,U.,编辑AssociateforImmunotherapyofCancer:CancerImmunotherapy-2ndAnnualMeeting;2004;Mainz,Germany)。尽管T细胞免疫疗法取得了显著进展,但仍然很少看到客观临床反应。基于T细胞的疗法的低效率已被归因于低的TCR亲和力,有限的针对高肿瘤负荷的体内强效细胞毒反应、效应细胞的持久性的缺乏,对自身肿瘤Ag的耐受性和通过T调节性(T-reg)细胞和细胞因子产生的免疫抑制(Morris等BloodReviews2006;20:61-69;KonnigR.CurrOpinImmunol2002:14(1)75-83)。为了开发靶向WT1的该重要表位的不同方法,产生对于RMF/HLA-A0201复合物是特异的完全人TCRmmAb。所述mAb显示通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的针对表达WT1的白血病和实体瘤的体外和体内强效治疗活性(Dao等SciTranslMed.2013;5(176):176ra133)。ADCC取决于天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和其他免疫效应细胞的存在,所述细胞在白血病或癌症患者中,尤其在治疗后,可以是极其异质的。调节mAb细胞溶解疗法的替代性和有效方法是使用T细胞作为效应细胞。T细胞是最强效的细胞毒性细胞之一,并且占据最大数量的循环细胞毒性细胞。将mAb特异性添加至T细胞的最近方法,诸如经工程化具有基于抗体的嵌合抗原受体(称为CAR)和具有针对肿瘤Ag和CD3T细胞的双重特异性的过继转移的T细胞,已作为将多克隆人T细胞重定向至定义明确的肿瘤相关Ag的高效策略出现。双特异性抗体构建体被设计来将癌细胞上的表面Ag与T细胞上的TCR/CD3复合物交联。所述分子可重定向CD4和CD8T细胞,从而以不依赖于细胞的内部Ag特异性TCR识别、共刺激分子和肿瘤细胞上的HLA表达的一系列方式杀伤肿瘤细胞。其还避免疫苗接种、细胞因子施用或Ag-特异性患者来源的T细胞的离体扩增和输注(Frankel和Baeuerle.Currentopinioninchemicalbiology.2013;17(3):385-92;Brischwein等Journalofimmunotherapy.2007;30(8):798-807;Nagorsen等Pharmacology&therapeutics.2012;136(3):334-42;Aigner等Leukemia.2013;27(5):11本文档来自技高网...
<a href="http://www.xjishu.com/zhuanli/27/201480061156.html" title="抗-WT1/HLA双特异性抗体原文来自X技术">抗-WT1/HLA双特异性抗体</a>

【技术保护点】
一种重组抗体,所述抗体包含:(i)第一抗原结合部分,所述第一抗原结合部分包含:(A)包含含有表1‑6中所示的氨基酸序列的HC‑CDR1、HC‑CDR2和HC‑CDR3的重链(HC)可变区;和包含含有表1‑6中所示的氨基酸序列的LC‑CDR1、LC‑CDR2和LC‑CDR3的轻链(LC)可变区;(B)包含表1‑6中所示的第一氨基酸序列和第二氨基酸序列的VH和VL;或(C)包含表1‑6中所示的氨基酸序列的scFv;和(ii)第二抗原结合部分,其包含表7中所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.11.07 US 61/901,310;2014.08.15 US 62/037,8751.一种重组抗体,所述抗体包含:(i)第一抗原结合部分,所述第一抗原结合部分包含:(A)包含含有表1-6中所示的氨基酸序列的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3的重链(HC)可变区;和包含含有表1-6中所示的氨基酸序列的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3的轻链(LC)可变区;(B)包含表1-6中所示的第一氨基酸序列和第二氨基酸序列的VH和VL;或(C)包含表1-6中所示的氨基酸序列的scFv;和(ii)第二抗原结合部分,其包含表7中所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的重组抗体,其中所述第一抗原结合部分和/或所述第二抗原结合部分为选自由以下组成的组的抗体片段:Fab片段;由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段;F(ab)2片段;包含通过铰链区的二硫桥键连接的两个Fab片段的二价片段;由VH和CH1结构域组成的Fd片段;由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段;dAb片段;分离的CDR;和scFv。3.根据权利要求2所述的重组抗体,其中所述第一抗原结合部分和/或所述第二抗原结合部分为scFv。4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组抗体,其中所述第一抗原结合部分特异性结合于WT1/HLA并且所述第二抗原结合部分特异性结合于免疫效应细胞的表面抗原。5.根据权利要求4所述的重组抗体,其中所述免疫效应细胞选自由以下组成的组:天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞和T细胞。6.根据权利要求4所述的重组抗体,其中所述免疫效应细胞为CD3+细胞并且所述重组抗体特异性结合于CD3。7.根据权利要求1-6中任一项所述的重组抗体,其中所述重组抗体结合于WT1/HLA2+细胞。8.根据权利要求7所述的重组抗体,其中所述WT1/HLA2+细胞在其表面上具有低密度的WT1/HLA2。9.根据权利要求1-8中任一项所述的重组抗体,其中所述重组抗体特异性结合于CD3。10.根据权利要求1-9中任一项所述的重组抗体,其中所述重组抗体结合于CD3+细胞。11.根据权利要求1-10中任一项所述的重组抗体,所述抗体包含SEQIDNO:110中所示的氨基酸序列。12.一种核酸,所述核酸编码权利要求1-11中任一项所述的重组抗体。13.一种药物组合物,所述药物组合物包含权利要求1-11中任一项所述的重组抗体或权利要求12所述的核酸。14.一种用于杀伤WT1+细胞的方法,所述方法包括将所述细胞与权利要求1-11中任一项所述的抗体和所述免疫效应细胞接触。15.根据权利要求14所述的方法,其中所述免疫效应细胞为细胞毒性细胞。16.一种治疗患有WT1阳性疾病的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1-11中任一项所述的抗体。17.根据权利要求1-11中任一项所述的抗体在制造用于治疗受试者中的WT1阳性疾病的药剂的用途。18.根据权利要求1-11中任一项所述的抗体,所述抗体用于治疗受试者中的WT1阳性疾病的方法。19.根据权利要求16-18中任一项所述的方法或用途,所述方法或用途还包括向所述受试者施用免疫效应细胞。20.根据权利要求19所述的方法或用途,其中所述免疫效应细胞为细胞毒性细胞。21.根据权利要求20所述的方法或用途,其中所述细胞毒性细胞为CD3+细胞毒性T细胞。22.根据权利要求21所述的方法或用途,其中所述CD3+细胞毒性T细胞为自体T细胞。23.根据权利要求16-22中任一项所述的方法或用途,其中所述WT1阳性疾病为慢性白血病或急性白血病或WT1+癌症。24.根据权利要求23所述的方法或用途,其中所述WT1阳性疾病选自由以下组成的组:慢性粒细胞性白血病、多发性骨髓瘤(MM)、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性髓性/髓系白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、间皮瘤、卵巢癌、胃肠癌、乳腺癌、前列腺癌和胶质母细胞瘤。25.一种重组抗体,所述抗体包含:(I)第一抗原结合部分,所述部分包含以下之一:(A)包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的单链可变片段(scFV):SEQIDNO:18、36、54、72、90、108和132;或(B)重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL),其中所述VH和VL分别包含选自由以下组成的组的氨基酸序列:SEQIDNO:(i)14和16;(ii)32和34;(iii)50和52;(iv)68和70;(v)86和88;(vi)104和106;(vii)128和130;或(C)(i)随后3个VH互补决定区(CDR):(a)包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的VHCDR1:SEQIDNO:2、20、38、56、74、92和116;和(b)包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的VHCDR2:SEQIDNO:3、21、39、57、75、93和117;和(c)包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的VHCDR3:SEQIDNO:4、22、40、58、76、94和118;和(ii)随后3个VLCDR:(a)包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的VLCDR1:SEQIDNO:8、26、44、62、80、98和122;和(b)包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的VLCDR2:SEQIDNO:9、27、45、63、81、99,和123;和(c)包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的VLCDR3:SEQIDNO:10、28、46、64、82、100和124;和(II)第二抗原结合部分,所述部分包含:(A)包含SEQIDNO:113中所示的氨基酸序列的scFV;或(B)重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL),其中所述VH和VL分别包含SEQIDNO:111和112或SEQIDNO:134和136中所示的氨基酸序列。26.根据权利要求25所述的重组抗体,其中所述第一抗原结合部分包含以下之一:(A)包含SEQIDNO:18中所示的氨基酸序列的scFV:或(B)包含SEQIDNO:14中所示的氨基酸序列的VH和包含SEQIDNO:16中所示的氨基酸序列的VL;或(C)包含SEQIDNO:2中所示的氨基酸序列的VHCDR1;包含SEQIDNO:3中所示的氨基酸序列的VHCDR2;包含SEQIDNO:4中所示的氨基酸序列的VHCDR3;包含SEQIDNO:8中所示的氨基酸序列的VLCDR1;包含SEQIDNO:9中所示的氨基酸序列的VLCDR2;和包含SEQIDNO:10中所示的氨基酸序列的VLCDR3。27.根据权利要求25所述的重组抗体,其中所述第一抗原结合部分包含以下之一:(A)包含SEQIDNO:36中所示的氨基酸序列的scFV;或(B)包含SEQIDNO:32所示的氨基酸序列的VH和包含SEQIDNO:34中所示的氨基酸序列的VL;或(C)包含SEQIDNO:20中所示的氨基酸序列的VHCDR1;包含SEQIDNO:21中所示的氨基酸序列的VHCDR2;包含SEQIDNO:22中所示的氨基酸序列的VHCDR3;包含SEQIDNO:26中所示的氨基酸序列的VLCDR1;包含SEQIDNO:27中所示的氨基酸序列的VLCDR2;和包含SEQIDNO:28中所示的氨基酸序列的VLCDR3。28.根据权利要求25所述的重组抗体,其中所述第一抗原结合部分包含以下之一:(A)包含SEQIDNO:54中所示的氨基酸序列的scFV;或(B)包含SEQIDNO:50所示的氨基酸序列的VH和包含SEQIDNO:52中所示的氨基酸序列的VL;或(C)包含SEQIDNO:38中所示的氨基酸序列的VHCDR1;包含SEQIDNO:39中所示的氨基酸序列的VHCDR2;包含SEQIDNO:40中所示的氨基酸序列的VHCDR3;包含SEQIDNO:44中所示的氨基酸序列的VLCDR1;包含SEQIDNO:45中所示的氨基酸序列的VLCDR2;和包含SEQIDNO:46中所示的氨基酸序列的VLCDR3。29.根据权利要求25所述的重组抗体,其中所述第一抗原结合部分包含以下之一:(A)包含SEQIDNO:72中所示的氨基酸序列的scFV;或(B)包含SEQIDNO:6...

【专利技术属性】
技术研发人员:D·沙因伯格向京宜陶道言甦刘诚
申请(专利权)人:纪念斯隆凯特琳癌症中心优瑞科生物技术公司
类型:发明
国别省市:美国;US

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