本文公开了特异性结合包含于c-Met的α-链中的表位的抗体、其变型、组合物和用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 相关申请的交叉引用 本申请要求2013年8月23日提交的新加坡专利申请号201306428-2和2013年4月30 日提交的新加坡专利申请号201303329-5的优先权的权益，这两个新加坡专利申请的内容 出于所有目的在此以引用方式整体并入。
本专利技术属于免疫学领域并且涉及特异性结合c-Met的抗体、其片段和其用途。
技术介绍
C-Met是由通过二硫键连接到跨膜β-链的胞外α-链构成的190kD酪氨酸激酶受体。 c-Met是作为170kD单一多肽合成的，其被蛋白水解切割而形成α-链和β-链。成熟的α-链是 45kD并且构成了 sema结构域的一部分。sema结构域是信号素（semaphorin)和神经丛素 (plexin)共有的保守结构域。该结构域呈对于同型二聚化重要的七叶β-螺旋桨（seven-bladed beta-propeller)结构。在c-Met中，α-链和β-链均形成对于受体二聚化和配体结合 必要且充分的sema结构域。 肝细胞生长因子(HGF)是唯一已知的C-Met配体。在HGF结合时，C-Met受体在细胞 表面上二聚化，这导致激酶结构域中的酪氨酸残基的自身磷酸化。自身磷酸化被认为诱导 c-Met的构象变化，暴露了c-Met的羧基末端尾中的对接位点（docking site)。这导致c-Met 对接位点中的酪氨酸残基的转磷酸化。对接位点可用于募集接头分子和信号传导分子，导 致各种信号传导途径(包括AKT/P13K、RAS/MAPK和STAT途径)的激活。 c-Met信号传导途径的异常C-Met激活与各种人癌症中的过度增殖、肿瘤细胞侵 袭、肿瘤血管生成和不良预后相关联。另外，c-Met信号传导通过抑制凋亡并诱导对癌症疗 法的抗性、由此阻碍肿瘤治疗的作用来保护肿瘤细胞。c-Met作为癌症预后标志物和其参与 癌症转移和药物抗性使c-Met成为非常有吸引力的药物靶标。 各种机制已被用于抑制c -Me t激活。小分子激酶抑制剂如PHA-6 6 5 7 5 2、AM7和 SU11274在抑制c-Met激活方面是极为成功的。然而，由于小分子抑制剂的脱靶效应(off-target effect) 所致的毒性组织是主要担忧。另外， SU11274 被报道针对特定的 c-Met 突变 是无效的。 UlsnRNA/核酶的使用也被报道下调C-Met/HGF的表达水平。然而，该方法由于药物 递送问题而对于癌症治疗是不可行的。为了有效，UlsnRNA/核酶必须被有效地递送到待表 达的每个肿瘤细胞中。 已对使用HGF片段和C-Met片段(分别如NK4和诱饵(decoy)-Met)来竞争Met-HGF相 互作用进行检查。这些竞争性抑制剂显示了体内异常移植模型中对c-Met激活的有效抑制； 然而，它们的临床效用仍有待确定。 许多抗体如赫赛汀(Herceptin)(临床上被称为曲妥珠单抗(Trastuzamab))已在 临床上获得成功。赫赛汀是用于乳腺癌治疗的靶向酪氨酸受体激酶HER2的嵌合抗体。 随着治疗性抗体的成功，已尝试开发针对Met-HGF轴的治疗性抗体。开发了旨在 封阻Me t-HGF相互作用的靶向HGF的中和抗体。只有当使用两种或三种不同的抗-HGF抗体的 组合时，c-Met与HGF的结合才被封阻。已开发出靶向HGF的β-链的五种完全人抗-HGF抗体。 这些抗体在封阻U-87MG胶质母细胞瘤细胞中的Met-HGF相互作用方面是成功的。 开发靶向C-Met的治疗性二价抗体已经是具有挑战性的。先前已开发出针对C-Met 的胞外结构域的两种单克隆抗体(D0-24和DN-30)。有趣的是，两种单克隆抗体充当激动剂 而非拮抗剂并且在体内激活c-Met信号传导。为了避免二价单克隆抗体对c-Met的激活，对 DN-30Fab片段进行工程化。DN-30Fab保持了其对c-Met的高结合亲和力，但丧失了其对c-Met的激动剂活性。DN_30Fab通过引起c-Met胞外结结构域脱落和受体下调而有效地抑制c-Met信号传导。 单臂5D5抗体(MetMab或临床上被称为奥纳珠单抗(Onartuzumab))是革E向c-Met的 单价嵌合抗体。与DN-30类似，当被转化为单价Fab时，二价5D5抗体变成拮抗剂。与Fab DN-30不同，Me tMab通过与HGF竞争c-Met结合而充当诘抗剂并且引起c-Met内化和下调。因此，需要提供克服或至少改善一个或多个上述缺点的结合c-Met的新诘抗性抗 体。
技术实现思路
下面描述了针对人c-Met的α-链的抗体。开发针对抗人C-Met的α-链而产生的一组 二价抗-Met鼠科动物单克隆抗体。通过蛋白质印迹法(Western blotting)、免疫沉淀、流式 细胞术、表位定位和对c-Met的激动剂/诘抗剂活性来表征这些抗体。令人惊讶地，这些抗体 都不是c-Met激动剂。两种抗体mAb 2和mAb 13通过流式细胞术显示与天然c-Met的最强结 合，但在检测蛋白质印迹上的变性c-Met方面效果差。mAb 2在降低细胞增殖方面是最有效 的。通过流式细胞对mAb 2的进一步分析显示其与活细胞上的c-Met的结合是温度敏感性 的。mAb 2表位的详细定位揭示部分mAb 2表位被包埋在c-Met内。因此，在第一方面，提供特异性结合包含在c-Met的α-链中的表位的抗体。 在第二方面，提供编码如本文所述的抗体的核酸，其中所述抗体的重链包含如SEQ ID NO: 1中所示的序列或由如SEQ ID NO: 1中所示的序列组成。 在第三方面，提供包含如本文所述的抗体或由如本文所述的抗体组成的药物组合 物。 在第四方面，提供治疗和/或预防癌症的方法，其包括施用治疗有效量的如本文所 述的抗体。 在第五方面，提供诊断癌症的方法，其包括通过施用用于检测c-Met的如本文所述 的抗体来检测c-Met的异常表达。 在第六方面，提供本文所公开的抗体在制造用于治疗和/或预防癌症的药剂中的 用途。 在第七方面，提供本文所公开的抗体用于检测具有异常c-Met表达的细胞的用途。 在第八方面，提供本文所公开的抗体作为癌症预后标志物的用途。【附图说明】【附图说明】 了所公开的实施方案并且用于解释所公开的实施方案的原理。然而，应 当理解，附图被设计为只用于说明的目的，而不是作为本专利技术范围的定义。 图1是图解说明抗-α-链c-Met单克隆抗体表位定位的定位的草图。A)抗体结合区 域的图解。利用肽扫描(一种基于ELISA的测定)来确定21种单克隆上清液的结合区域。合成 跨越整个c-Meta-链的连续重叠肽并且将其涂覆于96孔中。为了确定α-链上的抗体结合区 域，向每条肽中添加单克隆细胞上清液。抗体结合导致比色反应，通过450ηΜ下的吸光度读 数对其进行分析。将所述抗体的表位分类成各个区域。共有同一结合区域的抗体被指示。图 并非按比例绘制。Β和C) c -Me t的晶体结构的抗体结合区域的定位。结合HGF0-链的c -Me t胞 外结构域(氨基酸残基25-567)的晶体结构。从蛋白质数据库(PDB)以保藏号1SHY获得晶体 结构。以绿色突出显示c-Met并且以蓝色突出显示HGF。从两个不同的角度(B)和(C)本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗体，其特异性结合包含在c‑Met的α‑链中的表位。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄淑娴，大卫·雷恩，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG
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