抗缺刻蛋白1抗体制造技术

本发明专利技术提供结合缺刻蛋白1的抗体。本发明专利技术还提供制备此类抗体的方法、包含此类抗体的药物组合物、及用此类抗体及药物组合物治疗疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
本申请是2011年12月9日提交的题为“抗缺刻蛋白1抗体”的中国专利申请201180067647.0的分案申请。专利
本专利技术涉及抗缺刻蛋白(Notch)1的抗体。本专利技术还涉及使用此类抗体治疗癌症的方法。
技术介绍
缺刻蛋白(notch)受体通过信号传导途径控制多细胞生物体中正常细胞的生长、分化及死亡，所述信号传导途径由配体诱导的蛋白质水解所引发(Bray,Nat.Rev.Mol.CellBiol.7(9):678-689,2006)。成熟缺刻蛋白异二聚体在经弗林蛋白酶(furin)样蛋白酶于位点S1切割后，由三个Lin12/缺刻蛋白重复(LNR-A、B、C)与异二聚化(H)结构域所组成的近膜负调节区(NRR)而被保持在自身抑制状态。HD结构域通过在位点S1的切割而被分成N端半区(HD1)和C端半区(HD2)。经未确定的机制，Delta/Serrate/Lag-2(DSL)家族的配体与N端、EGF重复区的结合解除了此抑制并在靠近C端区HD-2的S2处及在缺刻蛋白的跨膜结构域内的S3处诱导另外两个连续的切割，这些切割分别由ADAM类的金属蛋白酶及γ分泌酶所催化(Gordon,W.R.,et.al,Nature Structural&Molecular Biology,2007,volume 14,295-300)。后者切割释放缺刻蛋白的胞内结构域(NotchICD)，允许其易位至细胞核并活化靶标基因的转录。在哺乳动物细胞中，有四种已知的缺刻蛋白受体。缺刻蛋白1-4在胚胎及成体组织中具有广泛、重叠模式的表达，并在造血干细胞特化、T细胞发育、肠隐窝细胞特化及血管发育期间发挥非冗余的作用。与特定缺刻蛋白1受体有关的获得性异常已被认为与癌相关，如T细胞急性淋巴母细胞白血病(T-ALL)、乳腺癌及肺癌。此外，经活化的缺刻蛋白1是小鼠模型中的有效白血病诱导剂，在多种实体肿瘤中过表达，包括非小细胞肺癌、乳腺癌及卵巢癌。超过50％的T-ALL患者携有缺刻蛋白1受体的突变，其中某些突变导致受体的组成性切割并产生缺刻蛋白1ICD，部分是因为在NRR中或靠近NRR的自身抑制结构域的改变所造成的缺刻蛋白1配体超敏性或配体非依赖性活化。这些突变可被分为3个主要类型。第1型突变是在HD1中的单一氨基酸取代及小规模的符合读框顺序的缺失或插入。第2型突变是在HD2的远端区域中较长的插入，所述插入将S2金属蛋白酶切割位点移位至自身抑制NRR结构域之外。第3型突变也称为近膜延伸(JME)突变，该突变由使NRR远离细胞膜的大规模插入所产生。开发了多种抑制缺刻蛋白信号传导的策略以用于治疗癌症之目的。一种方式通过γ分泌酶抑制剂(GSI)处理以阻断细胞内缺刻蛋白从细胞膜蛋白水解释放。虽然GSI已经进入临床阶段，但它们无法区别个体缺刻蛋白受体，并且由于其抑制缺刻蛋白1及缺刻蛋白2而造成小肠毒性。因此本领域仍需要新的抗缺刻蛋白1治疗，以用于治疗癌症同时减少不良反应，特别是小肠毒性。专利技术概述在一实施方案中，本专利技术提供结合缺刻蛋白1的抗体，该抗体具有重链可变区，所述重链可变区具有来自包含SEQ ID NO:71的重链可变区的CDR1区、CDR2区及CDR3区。在另一实施方案中，本专利技术提供结合缺刻蛋白1的抗体，该抗体具有轻链可变区，所述轻链可变区具有来自包含SEQ ID NO:97的轻链可变区的CDR1区、CDR2区及CDR3区。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体具有1)重链可变区，该重链可变区具有来自包含SEQ ID NO:71的重链可变区的CDR1区、CDR2区及CDR3区，及2)轻链可变区，该轻链可变区具有来自包含SEQ ID NO:97的轻链可变区的CDR1区、CDR2区及CDR3区。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含与SEQ ID NO:71具有至少90％相同性的重链可变区氨基酸序列。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含如SEQ ID NO:71所示的重链可变区氨基酸序列。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含与SEQ ID NO:97具有至少90％相同性的轻链可变区氨基酸序列。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含如SEQ ID NO:97所示的轻链可变区氨基酸序列。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含与SEQ ID NO:111具有至少90％相同性的重链氨基酸序列。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含如SEQID NO:111所示的重链氨基酸序列。本专利技术还提供具有与SEQ ID NO:113有至少90％相同性的轻链氨基酸序列的抗体。本专利技术还提供包含如SEQ ID NO:113所示的轻链氨基酸序列的抗体。在另一实施方案中，本专利技术提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含与SEQ IDNO:71具有至少90％相同性的重链可变区氨基酸序列，及与SEQ ID NO:97具有至少90％相同性的轻链可变区氨基酸序列。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含如SEQID NO:71所示的重链可变区氨基酸序列，及如SEQ ID NO:97所示的轻链可变区氨基酸序列。在另一实施方案中，本专利技术提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含与SEQ IDNO:111具有至少90％相同性的重链氨基酸序列，及与SEQ ID NO:113具有至少90％相同性的轻链氨基酸序列。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含如SEQ ID NO:111所示的重链氨基酸序列，及如SEQ ID NO:113所示的轻链氨基酸序列。在另一实施方案中，本专利技术提供结合人缺刻蛋白1的抗体，其中所述抗体结合含有至少8个选自如下氨基酸残基的表位结合：Asn 1461、Lys 1462、Val 1463、Cys 1464、Leu1466、Leu 1580、Tyr 1621、Gly 1622、Met 1670、Asp 1671、Val 1672、Arg 1673、Leu 1707、Ala 1708、Leu 1710、Gly 1711、Ser 1712、Leu 1713、Pro 1716和Lys 1718。在另一实施方案中，本专利技术提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体具有重链可变区，该重链可变区具有来自包含SEQ ID NO:115的重链可变区的CDR1区、CDR2区及CDR3区。在另一实施方案中，本专利技术提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体具有轻链可变区，该轻链可变区具有来自包含SEQ ID NO:129的轻链可变区的CDR1区、CDR2区及CDR3区。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体具有1)重链可变区，该重链可变区具有来自包含SEQ ID NO:115的重链可变区的CDR1区、CDR2区及CDR3区，及2)轻链可变区，该轻链可变区具有来自包含SEQ ID NO:129的轻链可变区的CDR1区、CDR2区及CDR3区。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含与SEQ ID NO:115具有至少90％相同性的重链可变区氨基酸序列。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含如SEQ ID NO:115所示的重链可变区氨基酸序列。本专利技术还提供结合缺刻蛋白1的抗体，所述抗体包含与SEQ ID NO:129具本文档来自技高网...

【技术保护点】
结合缺刻蛋白1的抗体，其包含：SEQ ID NO:115所示的重链可变区的CDR1、CDR2及CDR3，及选自SEQ ID NO:127、129、137、139、141、143、145和147的轻链可变区的CDR1、CDR2及CDR3。

【技术特征摘要】
2010.12.15 US 61/423,578;2011.10.28 US 61/552,5781.结合缺刻蛋白1的抗体，其包含：SEQ ID NO:115所示的重链可变区的CDR1、CDR2及CDR3，及选自SEQ ID NO:127、129、137、139、141、143、145和147的轻链可变区的CDR1、CDR2及CDR3。2.权利要求1的抗体，其包含：(a)SEQ ID NO:117所示的重链可变区CDR1，(b)SEQ ID NO:121所示的重链可变区CDR2，(c)SEQ ID NO:125所示的重链可变区CDR3，(b)SEQ ID NO:131所示的轻链可变区CDR1，(b)SEQ ID NO:133所示的轻链可变区CDR2，及(b)SEQ ID NO:135所示的轻链可变区CDR3。3.结合缺刻蛋白1的抗体，其包含：与SEQ ID NO:115至少90％相同的重链可变区氨基酸序列，及与SEQ ID NO:129至少90％相同的轻链可变区氨基酸序列。4.权利要求3的抗体，其包含：SEQ ID NO:115所示的重链可变区氨基酸序列，及SEQ ID NO:129所示的轻链可变区氨基酸序列。5.结合缺刻蛋白1的抗体，其包含：与SEQ ID NO:149至少90％相同的重链氨基酸序列，及与SEQ ID NO:151至少90％相同的轻链氨基酸序列。6.权利要求5的抗体，其包含：SEQ ID NO:149所示的重链氨基酸序列，及SEQ ID NO:151所示的轻链氨基酸序列。7.结合缺刻蛋白1的抗体，其中所述抗体结合包含至少8个选自如下的氨基酸残基的表位：Asp 1458、Asn 1461、Val 1463、Cys 1464、Leu 1466、Leu 1580、Met 1581、Pro 1582、Tyr 1621、Gly 1622、Arg 1623、Asp 1671、Val 1672、Arg 1673、Gly 1674、Leu 1710、Gly1711、Ser 1712、Leu 1713、Asn 1714、Ile 1715、Pro 1716和Lys 1718。8.结合缺刻蛋白1的抗体，...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·G·盖莱斯，BB·S·周，L·G·奇思蒂亚科娃，Y·高，J·巴德，
申请(专利权)人：惠氏有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US