抗人类血管内皮生长因子受体的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术关于一种抗体或其抗原结合片段，其与人类第二型血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR‑2)结合。本发明专利技术亦关于一种于一需要个体中抑制VEGFR‑2调控的讯息传递的方法、一种治疗患有由VEGFR‑2的活性及/或讯息传递所导致或与其相关联疾病及/或失调的个体的方法、一种治疗患有肿瘤的个体的方法、一种于一需要个体中抑制内皮细胞的细胞增生的方法及一种侦测一样品中的人类第二型血管内皮生长因子受体的方法。

Antibody against human vascular endothelial growth factor receptor and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗人类血管内皮生长因子受体的抗体及其应用
本专利技术是关于一种抗体或其抗原结合片段及其应用，所述抗体或其抗原结合片段针对人类血管内皮生长因子受体(VEGFR)具特异性。
技术介绍
血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)的讯息传递路径的功能即是促进血管新生，血管新生是指由原有血管形成新的微血管。血管新生的调控异常和许多疾病的致病机转有关，同时也是多种癌症的一个特征。参与此讯息传递最主要的即是血管内皮生长因子家族的蛋白质及其受体，此路径的活化会引发复杂的讯息传递网络，促进血管内皮细胞的生长、移动和存活。此讯息传递路径被认为与肿瘤血管新生有密切关连，因此抑制血管内皮生长因子讯息路径为肿瘤血管新生的重要调控点。血管内皮生长因子包括一群序列高度保守的同源(homologous)双体醣蛋白(dimericglycoprotein)，以双硫键连结二条分子量各为24kDa的单链分子后才具有生物活性。目前已知的血管内皮生长因子家族成员有VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D与胎盘生长因子(placentagrowthfactor，PlGF)，其中VEGF-A最早被发现且研究最为透彻，其在血管新生中扮演关键性的角色。当血管内皮生长因子与血管内皮生长因子受体(VEGFreceptor，VEGFR)结合时，血管内皮生长因子受体会形成双体，并互相磷酸化。血管内皮生长因子受体的细胞外结构域共有七个似免疫球蛋白结构域(Ig-likedomains)，大致来说，第一至第三结构域负责受体与配体的结合，而第四至第七结构域则负责受体间双体化，并导致磷酸化及下游的讯息传递。血管内皮生长因子受体属于酪胺酸激酶(tyrosinekinase，TK)家族的成员的一，在细胞讯息传递过程中扮演极重要的角色，可以将细胞外诱导细胞生长、繁殖、以及抗凋亡的讯号传递到细胞内。血管内皮生长因子受体分为三类，分别为VEGFR-1(或称flt-1)、VEGFR-2(或称KDR/flk-1)与VEGFR-3(或称flt-4)。VEGF-A会和VEGFR-1及VEGFR-2结合，两种受体均表达于血管内皮细胞，而血管内皮生长因子的讯号最主要是经由第二型血管内皮生长因子受体传达。第一型血管内皮生长因子受体与配体的结合能力较第二型血管内皮生长因子受体强了十倍以上，但却只有相对较弱的激酶活性。第三型血管内皮生长因子受体则主要表达于淋巴内皮细胞上。目前已知肿瘤的血管新生除了由原有的周边血管内皮细胞增生形成外，也可藉由VEGFR-2的调控吸引血管内皮母细胞移动至肿瘤内或其周边，再分化为血管内皮细胞。由于和血管内皮生长因子有关的血管新生只发生于伤口修复和妇女生理周期时，阻断血管内皮生长因子讯息路径对于正常生理作用的影响有限，因此抑制血管内皮生长因子讯息路径便成为抑制肿瘤血管新生的重要调控点，进而导致肿瘤细胞死亡。血管内皮生长因子已知在多种实体肿瘤中有过度表达的情形，如大肠直肠癌、乳癌、前列腺癌、肺癌等。因此，仍需发展新的方法，以阻断血管内皮生长因子的信息传递路径。
技术实现思路
本专利技术提供一种抗体或其抗原结合片段，其与人类第二型血管内皮生长因子受体(vascularendothelialgrowthfactorreceptor2，VEGFR-2)或一人类第二型血管内皮生长因子受体片段结合。本专利技术的抗体可用于抑制VEGFR-2所调控的讯息传递，及治疗由VEGFR-2的活性或讯息传递所导致或与其相关联疾病或失调。本专利技术的抗体亦可用于抑制内皮细胞的细胞增生。本专利技术提供一种于一需要个体中抑制VEGFR-2调控的讯息传递的方法，包含给予所述个体一医药组合物，所述医药组合物包含前述的抗体或其抗原结合片段。本专利技术提供一种治疗患有由VEGFR-2的活性或讯息传递所导致或与其相关联疾病或失调的个体的方法，包含给予所述个体一医药组合物，所述医药组合物包含前述的抗体或其抗原结合片段。本专利技术提供一种治疗患有肿瘤的个体的方法，包含给予所述个体一医药组合物，所述医药组合物包含前述的抗体或其抗原结合片段。本专利技术提供一种于一需要个体中抑制内皮细胞的细胞增生的方法，包含给予所述个体一医药组合物，所述医药组合物包含前述的抗体或其抗原结合片段。本专利技术提供一种侦测一样品中的人类第二型血管内皮生长因子受体的方法，包含将所述样品与请前述的抗体或其抗原结合片段接触。本专利技术将于下述段落中详述，本专利技术的其他特征、目的及优点可见于实施方式及申请专利范围中。图式简单说明图1展示本专利技术抗体对小鼠VEGFR-2、人类VEGFR-1或VEGFR-3的结合亲和力分析的ELISA结果。图2展示本专利技术抗体的结合域定位(结构域1至结构域3及结构域4至结构域7)的ELISA结果。图3展示本专利技术抗体的结合域定位的ELISA结果。图4展示本专利技术抗体的抗原决定基定位的ELISA结果。图5展示本专利技术抗体的HUVEC增生抑制分析。图6藉由流式细胞测量术展示本专利技术抗体的抗体内在化至HUVEC中的结果。图7展示藉由DeltaVision显微镜成像系统观测的抗体内在化结果。图8展示根据本专利技术的抗体-药物接合物(ADC)的尺寸排阻层析分析结果。图9展示根据本专利技术的抗体-药物接合物的电泳分析结果。图10藉由流式细胞测量术展示根据本专利技术的ADC抗体内在化至HUVEC中的结果。图11展示本专利技术的ADC的HUVEC增生抑制分析。图12展示根据本专利技术的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)藉由流式细胞测量术的定量分析。图13展示根据本专利技术的嵌合抗原受体T细胞的细胞毒性分析。图14展示用放射性同位素标记根据本专利技术的抗体的效率。图15展示藉由放射线标记根据本专利技术的抗体在HT-29异种移植小鼠的NanoSPECT/CT中的肿瘤侦测的结果。图16展示人源化、小鼠及人类抗体的VL片段的比对。M：322A6；Hd：Hu322B1HdH。图17展示人源化、小鼠及人类抗体的VH片段的比对。M：322A6；Hu：人类模板IGHV1-46*01F；HuB1：Hu322B1HdH。具体实施方式本专利技术提供一种抗体或其抗原结合片段，其与人类第二型血管内皮生长因子受体(vascularendothelialgrowthfactorreceptor2，VEGFR-2)或一人类第二型血管内皮生长因子受体片段结合。详言的，本专利技术的抗体或其抗原结合片段与人类第二型血管内皮生长因子受体或其片段中的一抗原决定基特异性结合，其中所述人类第二型血管内皮生长因子受体具有如SEQIDNO：1所示的胺基酸序列，且所述抗原决定基包含：SEQIDNO：1中第606位点的白胺酸、第607位点的天冬胺酸、第647位点的精胺酸、第648位点的离胺酸及第649位点的苏胺酸；或SEQIDNO：1中第711位点的丝胺酸、第716位点的离本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与人类第二型血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factorreceptor 2，VEGFR-2)或其片段中的一抗原决定基特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述人类第二型血管内皮生长因子受体具有如SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，且所述抗原决定基包含：/nSEQ ID NO：1中第606位点的白胺酸、第607位点的天冬胺酸、第647位点的精胺酸、第648位点的离胺酸及第649位点的苏胺酸；或/nSEQ ID NO：1中第711位点的丝胺酸、第716位点的离胺酸、第717位点的天门冬胺酸及第725及726位点的精胺酸。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与人类第二型血管内皮生长因子受体(vascularendothelialgrowthfactorreceptor2，VEGFR-2)或其片段中的一抗原决定基特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述人类第二型血管内皮生长因子受体具有如SEQIDNO：1所示的胺基酸序列，且所述抗原决定基包含：
SEQIDNO：1中第606位点的白胺酸、第607位点的天冬胺酸、第647位点的精胺酸、第648位点的离胺酸及第649位点的苏胺酸；或
SEQIDNO：1中第711位点的丝胺酸、第716位点的离胺酸、第717位点的天门冬胺酸及第725及726位点的精胺酸。


2.如权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其为一哺乳类抗体。


3.如权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区的互补决定区(complementaritydeterminingregions，CDRs)及轻链可变区的互补决定区，其中所述重链可变区的互补决定区包含CDRH1、CDRH2及CDRH3区，且所述轻链可变区的互补决定区包含CDRL1、CDRL2及CDRL3区，所述CDRH1区包含如SEQIDNO：4所示的胺基酸序列或其实质相似序列；所述CDRH2区包含如SEQIDNO：5所示的胺基酸序列或其实质相似序列；所述CDRH3区包含如SEQIDNO：6所示的胺基酸序列或其实质相似序列；所述CDRL1区包含如SEQIDNO：7所示的胺基酸序列或其实质相似序列；所述CDRL2区包含如SEQIDNO：8所示的胺基酸序列或其实质相似序列；及所述CDRL3区包含如SEQIDNO：9所示的胺基酸序列或其实质相似序列。


4.如权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区的互补决定区(CDRs)及轻链可变区的互补决定区，其中所述重链可变区的互补决定区包含CDRH1、CDRH2及CDRH3区，且所述轻链可变区的互补决定区包含CDRL1、CDRL2及CDRL3区，所述CDRH1区包含如SEQIDNO：10所示的胺基酸序列或其实质相似序列；所述CDRH2区包含如SEQIDNO：11所示的胺基酸序列或其实质相似序列；所述CDRH3区包含如SEQIDNO：12所示的胺基酸序列或其实质相似序列；所述CDRL1区包含如SEQIDNO：13所示的胺基酸序列或其实质相似序列；所述CDRL2区包含如SEQIDNO：14所示的胺基酸序列或其实质相似序列；及所述CDRL3区包含如SEQIDNO：15所示的胺基酸序列或其实质相似序列。


5.如权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其包含一重链可变区，包含如SEQIDNO：17所示的胺基酸序列或其实质相似序列；及一轻链可变区，包含如SEQIDNO：19所示的胺基酸序列或其实质相似序列。


6.如权利要求5的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区域是由如SEQIDNO：16所示的核苷酸序列所编码；所述轻链可变区域是由如SEQIDNO：18所示的核苷酸序列所编码。


7....

【专利技术属性】
技术研发人员：赖建勋，艾丽霜，赖彦达，吴彦宥，蔡宜珊，蔡宜珏，黄若羽，游成州，徐铨龙，官建村，赖思良，王丽雅，
申请(专利权)人：财团法人生物技术开发中心，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71