抗人芳香烃受体单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物、环境检测领域，具体涉及抗人芳香烃受体单克隆抗体，产生所述单克隆抗体的杂交瘤，包含所述单克隆抗体的组合物，以及所述单克隆抗体的使用方法和用途。本发明专利技术的单克隆抗体能够识别多种细胞中人芳香烃受体的肽段VCYNPDQIPPENSPL，并且能够检测细胞中原位表达的人芳香烃受体，该优势将更有利于对芳香烃受体的活化过程的研究以及对原位芳香烃受体的定位、表征及分析。

【技术实现步骤摘要】
抗人芳香烃受体单克隆抗体及其用途
本专利技术属于生物、环境检测领域，具体涉及抗人芳香烃受体单克隆抗体，产生所述单克隆抗体的杂交瘤，包含所述单克隆抗体的组合物，以及所述单克隆抗体的使用方法和用途。
技术介绍
人芳香烃受体(Arylhydrocarbonreceptor，AhR)是一种配基依赖性的转录因子。AhR属于螺旋-环-螺旋超家族中新发现的一个亚家族-PAS中的bHLH-PAS亚家族成员，具有一个碱性的螺旋-环-螺旋-PAS结构域。根据各部分功能的不同，AhR从N末端到C末端大致可划分为3个功能域：bHLH域、PAS域和转录激活域(TAD)。位于AhR分子N末端的bHLH结构域对蛋白质分子二聚化及DNA结合是必需的，其中b区决定结合DNA序列的特异性,HLH区似乎是蛋白质二聚化的接触界面。PAS域是在bHLH的羧基端由约250-300个氨基酸组成的同源序列，它包括2个由50个左右氨基酸组成的疏水共有序列，分别称为PAS(A)和PAS(B)。PAS(A)具有调节bHLH区域的构象,限制其广泛的二聚化的作用。该家族中最保守的PAS(B)区位于AhR第232-402位氨基酸，该区域具有配体结合的功能，该区域的自发突变可降低AhR与配体的亲和力。TAD定位于分子的羧基末端。不同于bHLH和PAS区的氨基酸序列在物种之间高度保守,该区域氨基酸的同源性较差，通常称为可变区。它包括富含酸性氨基酸区，富含谷氨酸区和富含P/S/T区，各区域之间既可独立激活转录又存在着协同作用。该区域介导增强子与启动子之间的信号传导，使之产生一种有利于启动子占位的染色质构象。另外，AhR还包含一个顺式作用抑制区，该区参与HSP90的结合，在有些细胞中可能参与抑制AhR的转录激活功能。静息状态下的AhR在细胞质中与2分子Hsp90、1分子p23辅助伴侣蛋白分子和1分子XAP2(也可能是AIP或ARA9)形成四聚体复合物。当配基与细胞质中AhR结合后，AhR被激活进而构象发生变化，暴露出入核序列，在入核序列的引导下进入细胞核，入核的AhR与芳香烃受体核转位蛋白及其它转录因子结合形成复合物，这些复合物可以结合到特定的DNA序列---DRE上，进而调控细胞色素P450等基因的表达，从而产生多种健康效应和毒理学效应，例如肝毒性，皮肤毒性，神经毒性，免疫毒性，致畸性，消耗综合症，内分泌干扰，诱导肿瘤的发生等。AhR的配基包括内源性配基和外源性配基，它们的结构存在较大差异，产生的作用也存在较大差异。AhR除了能介导产生多种生物学和毒理学效应外，近年研究发现AhR还具有重要的生理学功能，例如AhR能够维持免疫平衡，是膳食化合物与肠道免疫系统的感受器，此外它还能够影响肠道微生物种群，甚至能够提高肿瘤的逃逸。抗体作为重要的免疫学工具，在研究AhR介导的多种生物学和毒理学效应的分子机制以及发挥的生理学功能等方面具有广泛而重要的作用，例如研究配体对AhR的活化，AhR在细胞质和细胞核内与其它蛋白之间的相互作用，以及AhR与其它转录因子形成的复合物与DNA之间的相互作用。此外，近年来利用抗AhR抗体，并根据AhR信号通路中活化的AhR复合物与特异的DNA序列结合的特性所研究开发的Ah-Immunity检测方法，可以用来检测环境中能激活AhR的芳香烃类化合物，例如二恶英类化合物，多环芳香烃类化合物，卤代芳香烃类化合物等。目前商品化抗人源的AhR抗体有多克隆抗体和单克隆抗体。(1)多克隆抗体：与单克隆抗体相比，目前商品化的多克隆抗体种类较多，有兔多抗，山羊多抗，小鼠多抗和绵羊多抗等。在制备技术上，多克隆抗体具有成本低廉，所需技术和技能不高以及所需时间短等优点，但是易于产生批次间差异，产生大量非特异性抗体。在应用上，多克隆抗体因为能识别任一抗原上的多个表位，所以有助于放大低表达水平的靶蛋白信号；可在IP/ChIP中得到更好的结果；更能容许抗原中的微小变化。但是同时又因为靶蛋白可在多个表位上结合不止一个抗体分子，会给定量实验造成不利影响，导致结果不准确；也会识别出与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质；不适用于探测抗原的特定结构域等。(2)单克隆抗体：目前商品化的AhR单克隆抗体识别AhR的位点有四个，分别能识别AhR氨基酸序列的12-17&22-31，279-376，637-848和721-821位氨基酸。单克隆抗体由于是单克隆杂交瘤细胞株制得，所有批次都相同，对确保实验步骤和结果的一致性和标准化非常有帮助。与多克隆抗体相比，单克隆抗体的同质性非常高。如果实验条件保持不变，单克隆抗体的各实验结果重现性很高。另外，单克隆抗体只能检测某一抗原上的一个表位。所以可以更特异性地检测一个靶表位，而不与其它蛋白质发生交叉反应，进而所产生的背景显著低于多克隆抗体。单克隆抗体的特异性能使其在混合物中与抗原高效地结合，但是单抗使用时经过抗原的化学处理后比多克隆抗体更易于丢失表位，这可通过使用同一抗原的两个或多个单克隆抗体进行补偿。基于此，为了满足广泛深入开展AhR介导的多种效应的复杂分子机制的研究以及环境中芳香烃受体类化合物的检测，本领域仍需要更多能够识别AhR不同结构域、不同位点的单克隆抗体。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人经过大量实验，成功筛选获得了分泌抗人芳香烃受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并对分泌的单克隆抗体在免疫学方法的应用上进行了研究，由此完成了本专利技术。因此，本专利技术第一方面提供了特异性结合人芳香烃受体(hAhR)的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体与保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、具有保藏号CGMCCNo.10318的杂交瘤产生的抗体具有相同的重链CDR区和轻链CDR区。在本专利技术的一个实施方案中，所述单克隆抗体与保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、具有保藏号CGMCCNo.10318的杂交瘤产生的抗体具有相同的重链可变区和轻链可变区。根据已知单克隆抗体测定其轻链和重链的氨基酸序列已为本领域的公知常识，因此本领域技术人员完全可以根据保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、具有保藏号CGMCCNo.10318的杂交瘤产生的抗体测得其轻链和重链的氨基酸序列，包括其CDR区和可变区的氨基酸序列。在本专利技术的一个实施方案中，所述单克隆抗体FlAhR-Ma4a6的亚型为IgG2a。在本专利技术的一个实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合部分识别人芳香烃受体上的具有序列VCYNPDQIPPENSPL(SEQIDNO：1)的肽段或表位。在本专利技术的一个实施方案中，所述单克隆抗体为由保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、具有保藏号CGMCCNo.10318的杂交瘤产生的抗体，即抗体FlAhR-Ma4a6。在另一个方面，本专利技术提供了特异性结合人芳香烃受体的抗体或其抗原结合部分，其与单克隆抗体FlAhR-Ma4a6竞争结合人芳香烃受体上的肽段或表位，所述单克隆抗体FlAhR-Ma4a6为由保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、具有保藏号CGMCCNo.10318的杂交瘤产生的抗体。在本专利技术的一个实施方案中，其中所述的肽段或表位的序列包含VCYNPDQIPPENSPL(SEQIDNO:1)。在本专利技术的一个具体实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性结合人芳香烃受体(hAhR)的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体与保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、具有保藏号CGMCC No.10318的杂交瘤产生的抗体具有相同的重链CDR区和轻链CDR区。

【技术特征摘要】
1.特异性结合人芳香烃受体(hAhR)的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体与保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、具有保藏号CGMCCNo.10318的杂交瘤产生的抗体具有相同的重链CDR区和轻链CDR区。2.权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体与保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、具有保藏号CGMCCNo.10318的杂交瘤产生的抗体具有相同的重链可变区和轻链可变区。3.权利要求2的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述单克隆抗体的亚型为IgG2a。4.权利要求1-3任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，其识别人芳香烃受体上的具有序列VCYNPDQIPPENSPL(SEQIDNO：1)的肽段或表位。5.权利要求1-3任一项的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体为由保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、具有保藏号CGMCCNo.10318的杂交瘤产生的抗体。6.一种杂交瘤，其以保藏号CGMCCNo.10318保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。7.一种多肽，其序列为VCYNPDQIPPENSPL(SEQIDNO：1)。8.一种组合物，其包含权利要求1－5任一项的抗体或其抗原结合部分。9.权利要求1－5的抗体或其抗原结合部分的用途，其用于制备试剂盒，所述试剂盒用于检测人芳香烃受体在样品中的存在或其表达水平。10.权利要求9的用途，其中，所述样品选自组织样品和细胞样品。11.权利要求9或10的用途，其中，所述抗体或其抗原结合部分还包括可检测的标...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵斌，田文静，谢群慧，裴新辉，胡芹，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：北京;11