此处提供了一种鉴定气味或芳香物质特别是吲哚和粪臭素的恶臭的特定家族哺乳动物气味受体的新方法，以及它们在能用于发现调节(阻断、增强、掩蔽或模仿化合物)其活性的化合物的用途。从响应于目标化合物的嗅觉感觉神经元中鉴定出孤小鼠气味受体。所得的受体以及它们的人类对应物可在分析方法中针对测试化合物进行筛选，以确认它们作为气味或芳香受体特别是恶臭受体的身份，并随后发现例如抑制人类对恶臭感知的调节剂。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本
设及气味（odorant)和芳香受体，W及可用于鉴定气味和/或芳香化 合物的分析方法，并且更具体而言设及恶臭化合物如吗I噪或粪臭素的抑制剂或冲消剂。
技术介绍
嗅觉是最复杂并且最少了解的人类感觉系统之一。从嗅觉受体（OR)的激活作用 到感知，仍有许多步骤需要进一步研究。如果我们能够理解用于个体气味和混合物的OR代 码如何转化为感知，那么我们就可W利用此知识为一些领域带来显著的利益。运些领域包 括：气味调节剂，比如阻挡难闻气味的感知的恶臭冲消剂；替代不可生物降解或有毒化合 物的新的调味料和芳香成分；和气味增强剂，其将限制我们对于难W从天然来源探源化合 物的依赖性。"嗅觉代码"的组合示例W如下观察为中屯、：任何单一OR可由多种气味激活， 并且相反，多数气味能够激活少数几种OR。在小鼠基因组中，有大约1200种不同的OR。相 比之下，人类有大约400种。在运两种情形中，OR的清单由世界上数千种气味激活，而正是 运种组合的复杂性造成我们能感知的嗅觉感受的广度。然而，自2010年W来，使用传统的 脱孤法（deo巧hanization)只对于82种小鼠OR(约77% )和17种人类OR(约44% )鉴 定出气味或配体。此外，大多数的人类OR配体（主要是试管内鉴定的）的生理相关性还未 经测试。 不同的OR脱孤法已见诸文献。运些方法中的许多种都特定地依赖基于细胞的分析，其中OR在适合于高 通量筛选的非嗅觉细胞中表达。然而，OR通常保持在运样的异源细胞的内质网中。因此， 如果不投放到细胞表面，运些OR就无法与气味相互作用。因此，一种系统的方法--其中数百至数千种不同的 细胞系，其中各细胞系均具有可用于评估气味活性的独特的OR蛋白一一对于全面解码气味 与OR之间的组合相互作用来说是不适合的方法，因为许多或大多数受体在运样的细胞系 中不能正常起作用。因此，需要新的方法，其能在生物体中存在的OR的完整列表中迅速且 可靠地鉴定出由一种或多种气味特异性地激活或抑制的OR的相对较小的子集。进一步需 要一种方法，其设及从推定OR具有全部功能的嗅觉神经元本身鉴定出0R，从而规避在非嗅 觉细胞中OR分析的公知挑战。 恶臭化合物如吗I噪、粪臭素（3-甲基吗I噪）和对甲酪产生难闻的气味，其例如出 现于厕所和其他包含排泄物等的"浴室"来源。因此，掩盖或减少例如人对运些化合物的嗅 觉的恶臭冲消剂是所希望的。需要鉴定出气味受体，更特别而言恶臭受体。结合于吗I噪和 粪臭素的受体也已鉴定出，结合于那些受体的化合物也已被发现并报告为恶臭的潜在调节 剂。然而，由于存在于哺乳动物的众多0R，对于结合至恶臭受体，尤其是吗I噪和粪臭素受体 的受体完整列表的快速鉴定仍然是所希望的。进一步希望依赖于新的恶臭受体W鉴定出结 合至运些受体的新的有效化合物的分析。
技术实现思路
阳〇化]本文提供一种鉴定被气味或芳香化合物激活的嗅觉受体的方法，包括： 阳006] i)从非人类哺乳动物物种中将含有天然嗅觉神经元的分离的嗅觉上皮解离成单 个细胞，其中每个神经元都表达嗅觉受体； j)给嗅觉细胞加载指示剂染料，该染料允许测定嗅觉受体的气味或芳香受体结合 活性； k)使嗅觉受体与各气味或芳香化合物相继接触； 1)测定由气味或芳香诱导的神经元活性的变化； m)将被气味或芳香化合物激活的一个或多个嗅觉神经元分离； η)扩增所分离的嗅觉受体的mRNA ; 0)通过下一代测序技术对mRNA的转录组的至少一部分进行测序；并且P)通过将该转录组的序列与同一物种和其他脊椎动物物种的参考基因组序列进 行比较，从而确定从由气味和芳香受体组成的群组中选出的一组嗅觉受体的同一性。 本文还提供一种鉴定被恶臭化合物激活的嗅觉受体的方法，包括： 阳015] a)从非人类哺乳动物物种中将含有天然嗅觉神经元的分离的嗅觉上皮解离成单 个细胞，其中每个神经元都表达嗅觉受体； b)给嗅觉细胞加载指示剂染料，该染料允许测定嗅觉受体的恶臭受体结合活性；C)使嗅觉受体与各恶臭化合物相继接触； d)测定由气味诱导的神经元活性的变化；e)将被恶臭化合物激活的一个或多个嗅觉神经元分离； f)扩增所分离的嗅觉受体的mRNA ;g)通过下一代测序技术对mRNA的转录组的至少一部分进行测序；并且 h)通过将该转录组的序列与同一物种和其他脊椎动物物种的参考基因组序列进 行比较，从而确定一组恶臭嗅觉受体的同一性。 阳023] 本文还提供一种分离的核酸序列，其与从由如下序列构成的群组中选出的核酸序 列具有至少60%的序列同一性：SEQIDN0:1、SEQIDN0:3、SEQIDN0:5、SEQIDN0:7、SEQ IDN0:9、SEQIDN0:11、WQIDN0:13、WQIDN0:15、WQIDN0:27、WQIDN0:29、WQ IDN0:31、沈QIDN0:33、沈QIDN0:35、沈QIDN0:37、沈QIDN0:39、沈QIDN0:41、沈Q IDN0:43、沈QIDN0:45、沈QIDN0:47、沈QIDN0:49、沈QIDN0:51、沈QIDN0:53、沈Q IDN0:55、沈QIDN0:57、沈QIDN0:59、沈QIDN0:61、沈QIDN0:63、沈QIDN0:65、沈Q IDN0:67、沈QIDN0:69、沈QIDN0:71、沈QIDN0:73、沈QIDN0:75、沈QIDN0:77、沈Q IDN0:79、沈QIDN0:81、沈QIDN0:83 和沈QIDN0:85。 本文还提供一种如上所述的分离的核酸序列，其编码多肤，该多肤与具有从由如 下序列构成的群组中选出的氨基酸序列的多肤具有至少60%的序列同一性：SEQIDN0:2、 SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQIDN0:8、SEQIDN0:10、WQIDN0:12、WQIDN0:14、WQ IDNO: 16、沈QIDNO:28、沈QIDNO:30、沈QIDNO:32、沈QIDNO:34、沈QIDNO:36、沈Q IDNO:38、沈QIDNO:40、沈QIDNO:42、沈QIDNO:44、沈QIDNO:46、沈QIDNO:48、沈Q IDNO:50、沈QIDNO:52、沈QIDNO:54、沈QIDNO:56、沈QIDNO:58、沈QIDNO:60、沈Q IDNO:62、沈QIDNO:64、沈QIDNO:66、沈QIDNO:68、沈QIDNO:70、沈QIDNO:72、沈Q IDNO:74、沈QIDNO:76、沈QIDNO:78、沈QIDNO:80、沈QIDNO:82、沈QIDNO:84 和 沈QIDNO:86。 本文还提供一种分离的多肤，其包含与从由如下序列构成的群组中选出的氨基酸 序列具有至少60%序列同一性的氨基酸序列：SEQIDN0:2、SEQIDN0:4、SEQIDN0:6、SEQ IDNO:8、SEQIDNO: 10、沈QIDNO: 12、沈QIDNO: 14、沈QIDNO: 16、沈QIDNO:28、沈Q IDNO:30、沈QIDNO:32、沈QIDNO:34、沈QIDNO:36、沈QIDNO:38、沈QIDNO:40、沈Q IDNO:42、沈QIDNO:44、沈QIDNO:46、沈QIDNO:48、沈QID本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鉴定被气味和/或芳香化合物激活的嗅觉受体的方法，包括：a)从非人类哺乳动物物种中将含有天然嗅觉神经元的分离的嗅觉上皮解离成单个细胞，其中每个神经元都表达嗅觉受体；b)给嗅觉细胞加载指示剂染料，该染料允许测定嗅觉受体的恶臭受体结合活性；c)使嗅觉受体与恶臭化合物接触；d)测定由气味诱导的神经元活性的变化；e)将被恶臭化合物激活的一个或多个嗅觉神经元分离；f)扩增所分离的嗅觉受体的mRNA；g)通过下一代测序技术对该mRNA的全部转录组的至少一部分进行测序；并且h)通过将该转录组的序列与同一物种的参考基因组序列进行比较，从而确定一组恶臭嗅觉受体的同一性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·普菲斯特，M·E·罗杰斯，K·J·帕里斯，
申请(专利权)人：弗门尼舍有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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