用于治疗癌症的中和可溶性MIC的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术公开了涉及结合可溶性主要组织相容性复合物I类链相关分子(sMIC)的抗体的组合物和方法。具体来说，本发明专利技术公开了设计或选择用于对从MIC+肿瘤脱落的sMIC进行抑制(例如用于对sMIC进行中和)的抗体。本发明专利技术进一步公开了使用该抗体治疗MIC阳性癌症的方法。

Neutralizing monoclonal antibodies for the treatment of cancer with soluble MIC

The invention relates to compositions and methods relating to antibodies that bind to soluble major histocompatibility complex I chain like molecules (sMIC). Specifically, the present invention discloses the design or selection of antibodies to inhibit sMIC (MIC+, for example, neutralization of sMIC), which is derived from a tumor of the tumor. The invention further discloses a method for treating MIC positive cancer using the antibody.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用根据35U.S.C.§119(e)，本申请主张2013年7月5日递交的美国临时申请No.61/843,182和2013年10月21日递交的美国临时申请No.61/893,734的优先权，以引用的方式将以上文献的内容整体并入本文。关于联邦资助研究的声明本专利技术是在美国国防部颁发的W81XWH-06-1-0014以及美国国立卫生研究院颁发的R01CA149405的政府支持下作出的。美国政府对本专利技术享有一定的权利。序列表本申请包含序列表，所述序列表已经以ASCII格式进行了电子提交，以引用的方式将该序列表整体并入本文。所述ASCII拷贝创建于2014年6月26日，命名为034186-081580-PCT_SL.txt，大小为16,528字节。
技术介绍
血清可溶性NKG2D配体(可溶性sMIC)的升高与某些类型的癌症中的转移有关。在诊断患有前列腺癌的男性中，转移性疾病的发展与血清可溶性NKG2D配体(sMIC)的显著升高以及循环中的NK细胞的极度丧失相关。
技术实现思路
本文描述了关于对血清可溶性主要组织相容性复合物I类链相关蛋白(sMIC)进行中和是否可以作为转移性癌症的有效系统治疗的研究结果。特别是，对被设计或选择用于对由MIC+肿瘤脱落(shed)的sMIC进行抑制(例如，对sMIC进行中和)的抗体是否可有效地治疗这些肿瘤进行了研究。本文所述的研究使用了“人源化”双转基因TRAMP/MIC临床前模型，表明了以特异性抗体对血清sMIC进行中和通过重建NK细胞稳态、致敏(priming)并极化CD4T细胞和增强CD8T细胞功能、且不具有系统性细胞毒性的机制，使得晚期转移性前列腺癌发生消退。当前数据表明，sMIC中和疗法在治疗大范围的MIC+癌症中是有效的。因此，容易将这些结果推广至任何MIC+癌症。附图说明图1A-图1C表明在自发性前列腺癌的小鼠模型(TRAMP，小鼠前列腺的转基因腺癌)中，天然人MIC(B)的前列腺特异性表达促进低分化(PD)前列腺癌和转移的发展。图1A描绘了Kaplan-Meier曲线，显示与TRAMP小鼠相比，TRAMP/MICB小鼠的存活率显著降低(p＜0.001)。在分析中只考虑了肿瘤相关的死亡发生率。数字表示在所标明的存活时间内对动物进行研究。图1B表明与TRAMP同窝仔畜(n＝13)相比，24周龄的TRAMP/MICB小鼠(n＝12)的同期组群中前列腺重量显著增加。图1C示出了来自于TRAMP/MIC(B)小鼠(代表12只小鼠中的6只)和TRAMP同窝仔畜(代表13只小鼠中的12只)的肿瘤和相关淋巴结的大体外观的代表性图像。图2A-图2F表明在TRAMP/MIC小鼠中加速进展为PD癌与血清sMIC升高以及表面MIC丧失相关。图2A示出了肿瘤细胞上的表面MICB表达的IHC评分汇总。图2B示出了定量RT-PCR，显示PD和WD肿瘤中的MICB表达在mRNA水平上具有类似水平。图2C示出了在癌症发展期间，处于不同年龄的24周TRAMP/MICB小鼠的同期组群中sMICB的血清水平的ELISA检测。*表示p＜0.01。**表示p＜0.001。ns表示不显著。注意到PD癌的发展与sMICB血清水平的显著升高相关。图2D示出了24周龄的TRAMP/MICB小鼠中血清sMICB与肿瘤体积的相关性。图2E示出了定量RT-PCR，显示PD和WD肿瘤中的内源性NKG2D配体RAE-1表达在mRNA水平上具有类似水平。图2F示出了代表性的显微照片和IHC染色的汇总评分，表明TRAMP/MICB癌中内源性NKG2D配体RAE-1表达的模式。数据代表来自于四次独立分析的结果。图3A-图3E表明前列腺癌进展与sMIC诱导的NK细胞外周维持受损相关。图3A和图3B示出了24周龄TRAMP/MICB、TRAMP和野生型B6小鼠的同期组群中的脾CD8细胞(图3A)、NK细胞(图3B)和NKG2D+群的比较。左侧子图为流式细胞术分析的代表性散点图。右侧子图为每个同期组群的流式细胞术分析的合并统计数据。**表示与TRAMP小鼠相比或与发展为WD肿瘤的TRAMP/MICB小鼠相比p＜0.001。图3C表明根据对24周龄TRAMP/MICB小鼠的同期组群进行的分析，血清sMICB与脾NK细胞群为显著负相关。图3D示出了流式细胞术分析的代表性散点图以及合并数据的统计分析，表明在发展为PD癌的TRAMP/MICB小鼠中NK细胞的系统性(iLN和BM)耗竭(depletion)。iLN表示腹股沟淋巴结。BM表示骨髓。图3E示出了流式细胞术分析的代表性散点图和统计数据，表明在来自于TRAMP/MICB小鼠的PD肿瘤中，肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中的NK细胞显著减少。全部数据显示了来自于对至少5只动物进行的三次独立分析的代表性结果。图4A-图4D表明，sMIC在实验性TRAMP-C2肺转移模型中损害NK细胞外周稳态并促进肺转移；以及以单克隆抗体(mAbB10G5)对sMIC进行中和重建了NK细胞稳态并消除了肺转移。图4A示出了实验设计。图4B示出了肺微转移沉积的定量，表明sMIC促进了肺转移，并且以抗sMIC(mAbB10G5)进行处理抑制了肺转移。图4C示出了流式细胞术分析的代表性散点图(左侧子图)和合并统计数据(右侧子图)，表明了骨髓、淋巴结和脾中的NK细胞频率。cIgG表示中和sMIC的mAbB10G5的同种型对照IgG。*表示与抗sMIC(mAbB10G5)处理组和所有注射TRAMP-C2细胞的动物相比p＜0.05。图4D示出了代表性的流式细胞术分析和5天之中脾BrdU+NK细胞积聚的定量，表明了NK细胞的更新能力。数据表示了每一亚组五只动物和三次独立实验。图5A-图5D表明sMIC在移植的转移性TRAMP-C2-sMIC小鼠中扰乱过继转移的NK细胞的增殖。将1×107个V450标记的CD45.1+同类系脾细胞转移至植入了TRAMP-C2-sMICB或TRAMP-C2的CD45.2+小鼠中。在接受CD45.1+同类系脾细胞之前和之后，以sMICB中和抗体(mAbB10G5)或对照IgG(cIgG)对这些小鼠进行处理。同类系转移五天后对小鼠实施安乐死。图5A和图5B示出了安乐死时脾(图5A)和淋巴结(图5B)中总的过继转移的CD45.1+群中CD45.1+NK细胞的百分比。图5C和图5D示出了V450稀释试验的汇总，表明sMICB在脾(图5C)和淋巴结(图5D)中扰乱同类系CD45.1+NK细胞的增殖，并且使用抗sMIC(mAbB10G本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合至sMIC多肽的分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包含选自于由下述重链和轻链互补决定区(CDR)所组成的组中的一个或多个重链和轻链互补决定区(CDR)：a.具有SEQ ID NO：9的氨基酸序列的轻链CDR1；b.具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的轻链CDR2；c.具有SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链CDR3；d.具有SEQ ID NO：12的氨基酸序列的重链CDR1；e.具有SEQ ID NO：13的氨基酸序列的重链CDR2；以及f.具有SEQ ID NO：14的氨基酸序列的重链CDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.07.05 US 61/843,182;2013.10.21 US 61/893,7341.一种特异性结合至sMIC多肽的分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结
合部分包含选自于由下述重链和轻链互补决定区(CDR)所组成的组中的一个或多个重链和
轻链互补决定区(CDR)：
a.具有SEQIDNO：9的氨基酸序列的轻链CDR1；
b.具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的轻链CDR2；
c.具有SEQIDNO：11的氨基酸序列的轻链CDR3；
d.具有SEQIDNO：12的氨基酸序列的重链CDR1；
e.具有SEQIDNO：13的氨基酸序列的重链CDR2；以及
f.具有SEQIDNO：14的氨基酸序列的重链CDR3。
2.如权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包
含下述轻链互补决定区(CDR)：
a.具有SEQIDNO：9的氨基酸序列的轻链CDR1；
b.具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
c.具有SEQIDNO：11的氨基酸序列的轻链CDR3。
3.如权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分
包含下述重链互补决定区(CDR)：
a.具有SEQIDNO：12的氨基酸序列的重链CDR1；
b.具有SEQIDNO：13的氨基酸序列的重链CDR2；以及
c.具有SEQIDNO：14的氨基酸序列的重链CDR3。
4.如权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分
包含下述互补决定区(CDR)：
a.具有SEQIDNO：9的氨基酸序列的轻链CDR1；
b.具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的轻链CDR2；
c.具有SEQIDNO：11的氨基酸序列的轻链CDR3；
d.具有SEQIDNO：12的氨基酸序列的重链CDR1；
e.具有SEQIDNO：13的氨基酸序列的重链CDR2；以及
f.具有SEQIDNO：14的氨基酸序列的重链CDR3。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部
分包含具有SEQIDNO：7的序列的轻链。
6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部
分包含具有SEQIDNO：8的序列的重链。
7.一种特异性结合至sMIC多肽的分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结
合部分包含下述重链和轻链互补决定区(CDR)...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹妮弗·吴，
申请(专利权)人：华盛顿大学商业中心，
类型：发明
国别省市：美国;US