MET结合剂及其用途制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合人MET的结合剂、特异性结合WNT通路的一个或更多个组件的结合剂、结合人MET和WNT通路的一个或更多个组件的双特异性试剂以及使用该试剂治疗疾病例如癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2013年3月14日提交的美国临时申请No.61/783552、2013年5月31日提交的美国临时申请No.61/829477和2013年11月1日提交的美国临时申请No.61/898851的优先权，每一项申请在此通过引用整体并入本文。
本专利技术一般地涉及结合MET、WNT信号通路的一个或更多个组件或者MET和WNT信号通路的一个或更多个组件二者的抗体、双特异性试剂以及其它结合剂，特别是结合MET和一个或更多个WNT蛋白二者的双特异性试剂以及利用所述结合剂用于治疗疾病例如癌症的方法。
技术介绍
癌症是发达国家的主要死亡原因之一，其中超过100万人被诊断为癌症，并且仅在美国每年就有500000人死亡。总的说来，估计超过1/3的人将在其一生中患有某种形式的癌症。存在超过200种不同类型的癌症，其中乳腺、肺、结直肠和前列腺四种癌症占所有新病例的约一半(Siegel等人，2011,CA:ACancerJ.Clin.61:212-236)。信号传导通路正常使细胞外信号与导致直接或间接控制细胞生长、分化、存活和死亡的基因表达的核相连接。在各种癌症中，信号传导通路是失调的并且可能与肿瘤启动和/或进展相关。与人类肿瘤形成相关的信号传导通路包括但不限于WNT通路、Ras-Raf-MEK-ERK或MAPK通路、PI3K-AKT通路、MET/HGF通路、CDKN2A/CDK4通路、Bcl-2/TP53通路和NOTCH通路。MET/HGF(肝细胞生长因子)通路已经显示出在早期胚胎发育中发挥关键作用。然而，在成人组织中，MET通路被严格控制并且在其生长信号传导程序中主要是静止的，除了例如伤口修复过程之外。MET通路失调可导致细胞增殖，保护免受凋亡、血管生成、浸入和转移。多种不同的机制可使MET失调，包括蛋白过度表达、组成型活化、配体依赖性活化、基因扩增、基因突变和/或MET修饰(例如磷酸化)。已证明MET通路在许多肿瘤类型中失调，包括但不限于肺癌、结肠直肠癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌和脑癌。WNT信号传导通路是胚胎模式形成、胚后组织维持和干细胞生物学的几个关键调节剂之一。更具体地，WNT信号传导在细胞极性和细胞命运特化的生成包括由干细胞群自我更新中起重要作用。未经调节的WNT通路激活与其中据信激活可改变细胞发育命运的许多人类癌症相关。WNT通路的激活可维持肿瘤细胞处于未分化的状态和/或导致不可控的增殖。因此，致癌作用可通过超越控制正常发育和组织修复的稳态机制而进行(在Reya&Clevers,2005,Nature,434:843-50；Beachy等人，2004,Nature,432:324-31中进行了综述)。MET通路和WNT通路两者已被确定为癌症治疗的潜在靶标。本专利技术的一个目的是提供用于癌症治疗的改进的分子，特别是特异性结合人MET和WNT通路的一个或更多个WNT组件(例如WNT蛋白)的双特异性试剂。本专利技术的另一个目的是利用这些新的双特异性试剂来调节MET通路和WNT通路并抑制肿瘤生长。
技术实现思路
本专利技术提供结合MET、WNT通路的一个或更多个组件或者MET和WNT通路的一个或更多个组件两者的结合剂，例如抗体、可溶性受体或双特异性试剂，以及包含所述结合剂的组合物，例如药物组合物。还提供了结合MET、结合WNT通路的一个或更多个组件，或结合MET和WNT通路的一个或更多个组件两者的结合剂以及这样的结合剂的药物组合物。在某些实施方案中，所述结合剂是新的多肽，例如抗体、抗体片段以及与这样的抗体相关的其它多肽。在某些实施方案中，所述结合剂是新的多肽，例如可溶性受体以及与这样的可溶性受体相关的其它多肽。在某些实施方案中，所述结合剂是特异性结合人MET的抗体。在一些实施方案中，所述结合剂是特异性结合一个或更多个人WNT蛋白的抗体。在一些实施方案中，所述结合剂是特异性结合一个或更多个人Frizzled(FZD)蛋白的抗体。在一些实施方案中，所述结合剂是特异性结合一个或更多个人WNT蛋白的可溶的FZD受体。在一些实施方案中，所述结合剂是特异性结合人MET和WNT通路的一个或更多个组件的双特异性试剂。在一些实施方案中，所述结合剂是特异性结合人MET和一个或更多个WNT蛋白的双特异性试剂。在一些实施方案中，所述结合剂是特异性结合人MET和一个或更多个人FZD蛋白的双特异性分子。本专利技术还提供通过向肿瘤受试者施用所述结合剂抑制肿瘤生长的方法。本专利技术还提供通过向有需要的受试者施用所述结合剂来治疗癌症的方法。在一些实施方案中，治疗癌症或抑制肿瘤生长的方法包括利用所述结合剂靶向癌症干细胞。在某些实施方案中，所述方法包括减少肿瘤中癌症干细胞的频率、减少肿瘤中癌症干细胞的数量、降低肿瘤的致瘤性和/或通过减少肿瘤中癌症干细胞的数量或频率来减少肿瘤的致瘤性。在一个方面，本专利技术提供了特异性结合人MET的结合剂，例如抗体。在一些实施方案中，所述结合剂抑制MET结合于肝细胞生长因子上。在一些实施方案中，所述结合剂抑制MET激活。在某些实施方案中，所述结合剂(例如双特异性试剂)除了结合人MET之外还特异性结合人WNT通路的一个或更多个组件。在某些实施方案中，所述结合剂(例如双特异性试剂)除了结合人MET之外还特异性结合一个或更多个人FZD蛋白。在某些实施方案中，所述结合剂(例如双特异性试剂)除了结合人MET之外还特异性结合一个或更多个人WNT蛋白。在某些实施方案中，所述结合剂特异性结合人MET的细胞外结构域。在一些实施方案中，所述结合剂特异性结合人MET的Sema结构域。在一些实施方案中，所述结合剂特异性结合人MET的Sema结构域内。在一些实施方案中，所述结合剂特异性结合人MET的PSI(神经丛蛋白-脑信号蛋白-整合素)结构域。在一些实施方案中，所述结合剂特异性结合人MET的IPT(免疫球蛋白样折叠、神经丛蛋白、转录因子)结构域。在一些实施方案中，所述结合剂特异性结合人MET的一个或更多个IPT重复结构域。在一些实施方案中，所述结合剂特异性结合所述Sema结构域、所述PSI结构域和/或人MET的一个或更多个IPT重复结构域。在一些实施方案中，所述结合剂特异性结合在人MET的氨基酸25-932(SEQIDNO:93)内。在一些实施方案中，所述结合剂特异性结合在人MET的氨基酸25-836(SEQIDNO:93)内。在一些实施方案中，所述结合剂特异性结合在人MET的氨基酸25-515(SEQIDNO:93)内。在一些实施方案中，所述结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双特异性试剂，其包括：a)特异性结合人MET的第一结合位点，和b)特异性结合WNT通路的一个或更多个组件的第二结合位点。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.14 US 61/783,552;2013.05.31 US 61/829,477;1.一种双特异性试剂，其包括：
a)特异性结合人MET的第一结合位点，和
b)特异性结合WNT通路的一个或更多个组件的第二结合位点。
2.根据权利要求1所述的双特异性试剂，其中所述第一结合位点包括特异性结合人MET
的抗体的抗原结合位点。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的双特异性试剂，其中所述第一结合位点包括含有
ASYAWS(SEQIDNO:1)的重链CDR1、含有YISYSGGTDYNPSLKS(SEQIDNO:2)的重链CDR2和含
有KGAY(SEQIDNO:3)的重链CDR3；以及含有SASSSVSSSYLY(SEQIDNO:4)的轻链CDR1、含
有STSNLAS(SEQIDNO:5)的轻链CDR2和含有HQWSSYPYT(SEQIDNO:6)的轻链CDR3。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的双特异性试剂，其中所述第二结合位点包括特异
性结合所述WNT通路的一个或更多个组件的抗体的抗原结合位点。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的双特异性试剂，其是双特异性抗体。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的双特异性试剂，其中所述第二结合位点特异性地
结合一个或更多个人WNT蛋白。
7.根据权利要求6所述的双特异性试剂，其中所述一个或更多个WNT蛋白选自由WNT1、
WNT2、WNT2b、WNT3、WNT3a、WNT7a、WNT7b、WNT8a、WNT8b、WNT10a和WNT10b所组成的组。
8.根据权利要求1-5中任一项所述的双特异性试剂，其中所述第二结合位点特异性结
合一个或更多个Frizzled(FZD)蛋白。
9.根据权利要求8所述的双特异性试剂，其中所述第二结合位点特异性结合选自由
FZD1、FZD2、FZD5、FZD7和FZD8所组成的组中的一个或更多个FZD蛋白。
10.根据权利要求1、2、3、6或7中任一项所述的双特异性试剂，其包括可溶性FZD受体。
11.根据权利要求10所述的双特异性试剂，其中所述可溶性受体包括人FZD蛋白的Fri
结构域。
12.根据权利要求10所述的双特异性试剂，其中所述人FZD蛋白是人FZD8。
13.根据权利要求11所述的双特异性试剂，其中所述人FZD蛋白的Fri结构域包括选自
由SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:
26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:31、SEQID
NO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQIDNO:37、SEQID
NO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40和SEQIDNO:41所组成的组中的序列。
14.根据权利要求13所述的双特异性试剂，其中所述人FZD蛋白的Fri结构域包括SEQ
IDNO:28、SEQIDNO:29或SEQIDNO:39。
15.根据权利要求10-14中任一项所述的双特异性试剂，其中所述人FZD蛋白的Fri结构
域直接连接至异源多肽上。
16.根据权利要求10-14中任一项所述的双特异性试剂，其中所述人FZD蛋白的Fri结构
域通过接头连接至异源多肽上。
17.根据权利要求15或权利要求16所述的双特异性试剂，其中所述异源多肽包括人Fc
区。
18.根据权利要求15-17中任一项的双特异性试剂，其中所述异源多肽包括SEQIDNO:
44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQID
NO:50、SEQIDNO:51、SEQIDNO:52、SEQIDNO:42、SEQIDNO:43、SEQIDNO:91或SEQ
IDNO:92。
19.根据权利要求10所述的双特异性试剂，其中所述可溶性FZD受体包括：
(a)基本由SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:
25、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQID
NO:31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQID
NO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40或SEQIDNO:41组成的第一多肽；以及
(b)包括SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、
SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51或SEQIDNO:52的第二多肽；
其中所述第一多肽直接连接至所述第二多肽上。
20.根据权利要求10所述的双特异性试剂，其中所述可溶性FZD受体包括：
(a)包括SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、
SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30、SEQIDNO:
31、SEQIDNO:32、SEQIDNO:33、SEQIDNO:34、SEQIDNO:35、SEQIDNO:36、SEQID
NO:37、SEQIDNO:38、SEQIDNO:39、SEQIDNO:40或SEQIDNO:41的第一多肽；以及
(b)包括SEQIDNO:44、SEQIDNO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、
SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQIDNO:51或SEQIDNO:52的第二多肽；
其中所述第一多肽通过接头连接至所述第二多肽上。
21.根据权利要求19或权利要求20所述的双特异性试剂，其中所述第一多肽由SEQID
NO:28组成。
22.根据权利要求21所述的双特异性试剂，其中所述第二多肽由SEQIDNO:44、SEQID
NO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQID
NO:51或SEQIDNO:52组成。
23.根据权利要求19或权利要求20所述的双特异性试剂，其中所述第一多肽由SEQID
NO:29组成。
24.根据权利要求23所述的双特异性试剂，其中所述第二多肽由SEQIDNO:44、SEQID
NO:45、SEQIDNO:46、SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50、SEQID
NO:51或SEQIDNO:52组成。
25.根据权利要求10所述的双特异性试剂，其中所述可溶性FZD受体包括SEQIDNO:53
或SEQIDNO:56。
26.根据权利要求10所述的双特异性试剂，其中所述可溶性FZD受体包括SEQIDNO:
56。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的双特异性试剂，其中所述第一结合位点包括与
SEQIDNO:7或SEQIDNO:94具有至少约90％序列同一性的重链可变区和与SEQIDNO:8
或SEQIDNO:95具有至少约90％序列同一性的轻链可变区。
28.根据权利要求27所述的双特异性试剂，其中所述第一结合位点包括与SEQIDNO:7
或SEQIDNO:94具有至少95％序列同一性的重链可变区和与SEQIDNO:8或SEQIDNO:95
具有至少95％序列同一性的轻链可变区。
29.根据权利要求27所述的双特异性试剂，其中所述第一抗原结合位点包括：
(a)包括SEQIDNO:7的重链可变区和包括SEQIDNO:8的轻链可变区；或者
(b)包括SEQIDNO:94的重链可变区和包括SEQIDNO:95的轻链可变区。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的双特异性试剂，其包括第一CH3结构域和第二
CH3结构域，其中对每一个进行改性以促进形成异二聚体。
31.根据权利要求30所述的双特异性试剂，其中基于静电效应对第一和第二CH3结构域
进行改性。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的双特异性试剂，其包括第一人IgG2恒定区，其在
对应于SEQIDNO:75的249和288位具有氨基酸替代，其中所述氨基酸被替代为谷氨酸或天
冬氨酸；以及第二人IgG2恒定区，其在对应于SEQIDNO:75的236和278位具有氨基酸替代，
其中所述氨基酸被替代为赖氨酸。
33.根据权利要求1-31中任一项所述的双特异性试剂，其包括第一人IgG2恒定区，其在
对应于SEQIDNO:75的236和278位具有氨基酸替代，其中所述氨基酸被替代为赖氨酸；以
及第二人IgG2恒定区，其在对应于SEQIDNO:75的249和288位具有氨基酸替代，其中所述
氨基酸被替代为谷氨酸或天冬氨酸。
34.根据权利要求30所述的双特异性试剂，其中使用杵臼技术对所述第一和第二CH3结
构域进行改性。
35.一种特异性结合人MET并特异性结合WNT通路的一个或更多个组件的双特异性试
剂，其包括：
(a)SEQIDNO:13的重链和SEQIDNO:14的轻链；
(b)SEQIDNO:100的重链和SEQIDNO:101的轻链；或者
(c)SEQIDNO:111的重链和SEQIDNO:101的轻链。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的双特异性试剂，其结合KD为约100nM或更小的人
MET并结合KD为约100nM或更小的WNT通路的一个或更多个组件。
37.一种双特异性试剂，其是315B06、315B07或315B09。
38.根据权利要求1-37中任一项所述的双特异性试剂，其抑制MET与肝细胞生长因子的
结合。
39.根据权利要求1-38中任一项所述的双特异性试剂，其促进MET内化。
40.根据权利要求1-39中任一项所述的双特异性试剂，其刺激MET降解。
41.根据权利要求1-38中任一项所述的双特异性试剂，其抑制MET二聚化。
42.根据权利要求1-41中任一项所述的双特异性试剂，其抑制MET的活化。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的双特异性试剂，其抑制一个或更多个WNT蛋白与
至少一个FZD的结合。
44.根据权利要求43所述的双特异性试剂，其中所述FZD选自由FZD1、FZD2、FZD5、FZD7
和FZD8所组成的组。
45.根据权利要求44所述的双特异性试剂，其中所述FZD是FZD8。
46.根据权利要求1-45中任一项所述的双特异性试剂，其抑制WNT信号传导。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的双特异性试剂，其抑制经典的WNT信号传导。
48.根据权利要求1-47中任一项所述的双特异性试剂，其抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长。
49.根据权利要求1-48中任一项所述的双特异性试剂，其诱导肿瘤中分化标记物的表
达。
50.根据权利要求1-49中任一项的双特异性试剂，其诱导肿瘤中的细胞分化。
51.根据权利要求1-50中任一项的双特异性试剂，其降低肿瘤中癌症干细胞的频率。
52.根据权利要求1-51中任一项的双特异性试剂，其抑制上皮-间质转化(EMT)。
53.一种特异性结合人MET的分离抗体，其包括：
含有ASYAWS(SEQIDNO:1)的重链CDR1、含有YISYSGGTDYNPSLKS(SEQIDNO:2)的重链
CDR2和含有KGAY(SEQIDNO:3)的重链CDR3；以及含有SASSSVSSSYLY(SEQIDNO:4)的轻链
CDR1、含有STSNLAS(SEQIDNO:5)的轻链CDR2和含有HQWSSYPYT(SEQIDNO:6)的轻链
CDR3。
54.一种特异性结合人MET的分离抗体，其包括：
(a)与SEQIDNO:7或SEQIDNO:94具有至少约90％序列同一性的重链可变区；以及
(...

【专利技术属性】
技术研发人员：奥斯丁·L·格尼，谢明宏，克里斯多夫·约翰·邦德，
申请(专利权)人：昂科梅德制药有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US