针对B7-H1的靶向结合剂制造技术

公开了针对B7-H1的人单克隆抗体和这些抗体在诊断学中和用于治疗与B7-H1的活性和/或表达相关的疾病的用途。此外，公开了表达所述抗体的杂交瘤或其它细胞系。

【技术实现步骤摘要】
针对B7-H1的靶向结合剂本申请是国际申请PCT/US2010/058007，国际申请日2010年11月24日，中国国家阶段申请号201080053042.1的专利技术专利申请的分案申请。专利
本专利技术涉及针对B7-H1蛋白的靶向结合剂和所述药剂的用途。在一些实施方案中，本专利技术涉及针对B7-H1的完全人单克隆抗体和这些抗体的用途。本专利技术的方面还涉及表达所述靶向结合剂或抗体的细胞系。所描述的靶向结合剂用作诊断法和用于治疗与B7-H1的活性和/或表达相关的疾病的治疗。相关技术的描述适应性免疫应答涉及称作T细胞和B细胞的两种主要类别的淋巴细胞的激活、选择和克隆增殖。遇到抗原之后，T细胞增殖并分化为抗原特异性效应细胞，而B细胞增殖并分化为抗体分泌细胞。T细胞激活是多步骤过程，需要T细胞和抗原呈递细胞(APC)之间的一些信号转导事件。对于要发生的T细胞激活，必须向静止T细胞递送两种类型的信号。第一种类型是通过抗原特异性T细胞受体(TcR)来介导，并赋予对免疫应答的特异性。第二种共刺激类型调节应答的大小并通过T细胞上的辅助受体来递送。主要的共刺激信号通过结合其配体B7-1或B7-2后激活CD28受体来递送。相比之下，同样的B7-1或B7-2配体与抑制性CTLA-4受体的结合导致T细胞应答的弱化。因此，CTLA-4信号对抗由CD28介导的共刺激。在高抗原浓度时，CD28共刺激超越了CTLA-4抑制性作用。CD28和CTLA-4表达的暂时调节维持了激活信号和抑制性信号之间的平衡并确保了有效的免疫应答的形成，同时防范自身免疫的形成。最近已鉴定了CD28和CTLA-4的分子同源物和它们的B-7样配体。ICOS是CD28样共刺激受体。PD-1(程序性死亡1)是抑制受体和CTLA-4的对应物。本公开内容涉及对由B7-H1介导的免疫应答的调节。B7-H1，又称作PD-L1，是大小约53kDa的I型跨膜蛋白。在人中，B7-H1在多种免疫细胞类型上表达，包括活化的T细胞和无反应性的/衰竭的T细胞、在天然B细胞和活化B细胞上表达、以及在髓系树突细胞(DC)、单核细胞和肥大细胞上表达。其还在非免疫细胞上表达，包括胰岛、肝脏库普弗细胞(Kupffercell)、血管内皮细胞和选择的上皮细胞，例如，气管上皮细胞和肾小管上皮细胞，其中在炎性发作过程中其表达是增强的。还发现在多种肿瘤上B7-H1以增高的水平表达，所述多种肿瘤包括但不限于，乳腺、结肠、结肠直肠、肺、肾，包括肾细胞癌、胃、膀胱、非小细胞肺癌(NSCLC)、肝细胞癌(HCC)和胰腺癌，以及黑素瘤。B7-H1是B7家族蛋白的成员，其含有两个胞外Ig结构域，一个N末端V型结构域，之后是C型结构域。30个氨基酸长度的胞内结构域不含明显的信号转导基序，但含有蛋白激酶C磷酸化的可能位点。B7-H1的鼠形式与B7-H1的人形式具有69％氨基酸同一性，并也共有保守结构。已知B7-H1与两个可替代性配体结合，其中之一，PD-1，为50-55kDa的I型跨膜受体，其最初鉴定于经历激活诱导的凋亡的T细胞中。PD-1表达于活化T细胞、B细胞和单核细胞以及免疫系统的其它细胞中并与B7-H1(PD-L1)和相关的B7-DC(PD-L2)结合。第二是B7家族成员B7-1，其表达于活化T细胞、B细胞、单核细胞和抗原呈递细胞。PD-1是免疫球蛋白(Ig)超家族的成员，其在其胞外区中含有单一的IgV样结构域。PD-1胞浆域含有两个酪氨酸，最接近膜的酪氨酸(小鼠PD-1中的VAYEEL)位于ITIM(基于免疫受体酪氨酸的抑制基序)中。PD-1上ITIM的存在表明该分子发挥作用以通过募集胞浆磷酸酶来减弱抗原受体信号转导。人和鼠PD-1蛋白共有约60％的氨基酸同一性，其中为保守的是4个可能的N-糖基化位点，和限定Ig-V结构域的残基。胞质区中的ITIM和围绕羧基末端酪氨酸的ITIM样基序(人和小鼠中的TEYATI)在人和鼠直系同源物之间也是保守的。认为经由PD-1/B7-H1轴线的信号转导通过负向地调控T细胞应答在免疫系统中起关键的、非冗余的作用。该调控参与胸腺中的T细胞发育、慢性炎症应答的调控并维持外周耐受和免疫赦免二者。这些功能的关键性质在表现出自身免疫表型的PD-1缺陷的小鼠中示出。C57BL/6小鼠中的PD-1缺陷导致了慢性进行性狼疮样肾小球肾炎和关节炎。在Balb/c小鼠中，PD-1缺陷导致由于心脏组织特异性自身反应性抗体的存在引起的严重的心肌病。经由B7-H1/B7-1的信号转导的功能较不清楚，但认为其也参与向T细胞和抗原呈递细胞递送负调控信号。认为表达于肿瘤细胞的B7-H1有助于肿瘤回避免疫系统的检测和消除。B7-H1经由一些可选择的机制在该方面起作用，所述机制包括驱使浸润T淋巴细胞的肿瘤的衰竭和无反应性、刺激免疫抑制性细胞因子分泌到肿瘤微环境中、刺激抑制性调控T细胞起作用并防止表达B7-H1的肿瘤细胞被肿瘤细胞特异性细胞毒性T细胞裂解。总之，存在提供用于与免疫反应的抑制有关的疾患的安全且有效的治疗方法的需要，所述疾患比如，例如癌症和慢性病毒感染。这些疾患中涉及的免疫应答的调节可通过对B7-H1/PD-1通路进行操作来实现。专利技术概述本专利技术涉及与B7-H1特异性结合并抑制B7-H1的生物活性的靶向结合剂。在本专利技术的一个实施方案中，本专利技术涉及与B7-H1特异性结合并从而抑制B7-H1活性的靶向结合剂。在本专利技术的另一个实施方案中，本专利技术涉及与B7-H1特异性结合并从而抑制B7-H1与PD-1的结合的靶向结合剂。在本专利技术的又一个实施方案中，本专利技术涉及阻断B7-H1诱导的T细胞抑制并从而增强抗肿瘤免疫力的靶向结合剂。在本专利技术又一个另外的实施方案中，本专利技术还涉及可进一步刺激以下活性中的一种或多种的靶向结合剂，所述活性包括混合淋巴细胞反应中的T细胞增殖、IFN-γ和/或IL-2分泌。本专利技术的实施方案涉及与B7-H1特异性结合并抑制B7-H1的生物活性的靶向结合剂。在一个实施方案中，与不存在所述靶向结合剂时可能发生的相比较，靶向结合剂抑制了生物活性的至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。本专利技术的实施方案涉及与B7-H1特异性结合并从而抑制B7-H1活性的靶向结合剂。在一个实施方案中，与不存在所述靶向结合剂时可能发生的相比较，靶向结合剂抑制了B7-H1活性的至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。本专利技术的实施方案涉及与B7-H1特异性结合并从而抑制与PD-1的结合的靶向结合剂。在一个实施方案中，与不存在靶向结合剂时可能发生的相比较，靶向结合剂抑制了B7-H1/PD-1受体配体结合的至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与B7‑H1特异性结合的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含：氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的VH CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的VH CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的VH CDR3，氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的VL CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示的VL CDR2，和氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的VL CDR3；或氨基酸序列如SEQ ID NO:63所示的VH CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO:64所示的VH CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO:65所示的VH CDR3，氨基酸序列如SEQ ID NO:68所示的VL CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO:69所示的VL CDR2，和氨基酸序列如SEQ ID NO:70所示的VL CDR3。

【技术特征摘要】
2009.11.24 US 61/264,0611.一种与B7-H1特异性结合的分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含：氨基酸序列如SEQIDNO:3所示的VHCDR1，氨基酸序列如SEQIDNO:4所示的VHCDR2，氨基酸序列如SEQIDNO:5所示的VHCDR3，氨基酸序列如SEQIDNO:8所示的VLCDR1，氨基酸序列如SEQIDNO:9所示的VLCDR2，和氨基酸序列如SEQIDNO:10所示的VLCDR3。2.根据权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述抗体是单克隆抗体。3.根据权利要求2所述的抗体或其片段，其中所述抗体是完全人单克隆抗体。4.根据前述权利要求任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段的重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:2所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；或者所述抗体或其片段的重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:62所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:67所示。5.根据权利要求4所述的抗体或其片段，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·奎瓦，M·莫罗，S·哈芒德，M·阿利姆扎诺夫，J·巴布库克，I·福尔茨，J·S·康，L·塞科洛夫，M·伯勒，M·乔多吉，R·斯图沃特，K·A·穆尔葛如，
申请(专利权)人：米迪缪尼有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB