白细胞介素-31单克隆抗体制造技术

本发明专利技术提供了特异性结合到犬白细胞介素-31(IL-31)或猫IL-31中的至少一种上的分离的抗体。此类抗体可以是用于治疗狗和猫体内的瘙痒和/或过敏症的诊断和/或兽用组合物形式。

【技术实现步骤摘要】
本案是申请号为201280046131.2，申请日为2012-07-05，题目为“白细胞介素-31单克隆抗体”的申请的分案。
本专利技术涉及重组单克隆抗体领域及其在临床与科学程序，包括诊断程序中的用途。本专利技术还提供了用于治疗狗或猫的瘙痒症或过敏症的兽用组合物形式的分离的抗-IL31抗体。
技术介绍
特异性皮炎已经由美国兽医皮肤病学会特别工作组定义为“一种具有特征性临床表现的基因易患性炎症和瘙痒过敏性皮肤疾病(Olivry等人,VeterinaryImmunologyandImmunopathology2001；81:143-146)。该特别工作组还认识到，犬的此类疾病与变应原-特异性IgE相关(Olivry等人,2001supra；Marsella&OlivryClinicsinDermatology2003；21:122-133)。严重瘙痒伴随着继发性脱毛与红斑对宠物主人而言是最为明显和关心的症状。因贫乏和不一致的流行病学数据，特异性皮炎的流行率尚不能精确得知，但是估计为犬类总数的10％(Marsella&Olivry2003supra；Scott等人,CanadianVeterinaryJournal2002；43:601-603；HillierVeterinaryImmunologyandImmunopathology2001；81:147-151)。在全球，大约4.5亿只狗患有这种慢性和终身的疾病。发病率似乎在升高。怀疑品种和性别的偏向，但是随地理区域会发生巨大的变化(Hillier,2001supra；Picco等人,VetDermatol.2008；19:150-155)。过敏性皮炎中涉及的潜在因素很多，但了解甚少。食物成分可能引发特异性皮炎(Picco,2008supra)，以及环境变应原如跳蚤、尘螨、豚草、植物提取物等等。遗传因素也起着重要的作用。尽管并无证实的品种偏向，某些遗传方式被认为提高了对特异性皮炎的易感性(Sousa&MarsellaVeterinaryImmunologyandImmunopathology2001；81:153-157；Schwartzman等人,Clin.Exp.Immunol.1971；9:549-569)。白细胞介素-31(IL-31)是2004年克隆的细胞因子。其主要由活化的T辅助(Th)2细胞产生(Dillon等人,NatImmunol2004；5:752-60)，也是也可以在肥大细胞和巨噬细胞中产生。IL-31结合由IL-31受体A(IL-31RA)和制瘤素M受体(OSMR)组成的共同受体(Dillon等人,2004supra和Bilsborough等人,JAllergyClinImmunol.2006117(2):418-25)。受体激活导致通过JAK受体的STAT磷酸化。该共同受体的表达已经显示在巨噬细胞、角质形成细胞中和在背根神经节中。近来，已经发现IL-31涉及皮炎、瘙痒性皮肤病损、过敏和气道过敏，参见图1。用抗CD3和抗CD28抗体刺激T细胞立即上调IL-31mRNA表达(Dillon等人,2004supra)。微阵列分析已经表明，IL-31诱导某些趋化基因如CXCL1、CLL17(胸腺和活化调节的趋化因子[TARC])、CCL19(巨噬细胞炎性蛋白[MIP]3β)、CCL22(单核细胞衍生的趋化因子[MDC])、CCL23(MIP3)和CCL4(MIPβ)(Dillon等人,2004supra)。过度表达IL-31的转基因小鼠表现出皮肤炎症、瘙痒、严重皮炎和脱毛(Dillon等人,2004supra)。对小鼠皮下注射IL-31触发了被炎性细胞、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞浸润，并导致表皮增厚和皮肤黑棘。在患有自然原因导致的特异性皮炎(AD)的NC/Nga小鼠中，IL-31在皮肤损伤中过度表达并与瘙痒有关(Takaoka等人,EurJ.Pharmacol.2005；516,180-181；Takaoka等人,Exp.Dermatol.2006；15,161-167)。同样，在小鼠模型中，IL-31已经显示引发了迅速发作的瘙痒(Raap等人,JAllergyClinImmunol.2008；122(2):421-3)。进一步的研究表明，IL-31与特应性皮炎引起的人类的皮肤炎症和瘙痒有关。在人类AD患者中，IL-31mRNA的表达在皮肤损伤中远高于在非皮损皮肤中的表达，并且在非皮损皮肤中的表达远大于在来自健康患者的正常皮肤中的表达(Sonkoly等人,JAllergyClinImmunol2006；117:411-7)。另一研究已经报道了AD患者皮肤内的CD45RO+(记忆)皮肤淋巴细胞抗原(CLA))阳性T细胞表达IL-31mRNA和蛋白质(Bilsborough等人,2006supra)。还已经报道了患者皮肤中的IL-31mRNA过度表达或变态反应性接触性皮炎与IL-4和IL-13mRNA表达有关，但是与干扰素(IFN)-γmRNA表达无关(Neis等人,J.AllergyClin.Immunol.2006；118,930-937)。此外，IL-31血清水平已经显示在患有慢性自发性荨麻疹的人类患者体内提高，在AD患者体内甚至更高(Raap等人,ExpDermatol.2010；19(5):464-6)。同样，在人体内已经观察到了AD的严重程度与血清IL-31水平的相关性(Rapp等人,2008supra)。已经显示了在IgE交联后并在特应性个体中响应于金黄色葡萄球菌超抗原IL-31在肥大细胞中分泌提高。此外，IL-31已经显示了在人结肠肌成纤维细胞中刺激产生几种促炎介质，包括IL-6、IL-8、CXCL1、CC17和多种金属蛋白酶(Yagi等人,InternationalJournalofMolecularMedicine2007；19(6):941-946)。针对环境变应原的I型超敏反应被认为是犬AD的主要机制，并且Th2-介导的细胞因子，如IL-4的水平在患有AD的狗的皮肤损伤中提高(Nuttall等人,Vet.Immunol.Immunopathol.2002；87,379-384)。此外，infiltrationby炎性细胞、淋巴细胞和中性粒细胞浸润是潜在加重皮肤损伤的重要机制；趋化基因CCL17/TARC、CCR4和CCL28/黏膜相关上皮趋化因子(MEC)的过度表达在患有AD的狗体内导致皮肤损伤加重(参见Maeda等人,Vet.Immunol.Immunopathol.2005；103本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性结合到猫IL‑31上的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包括具有以下序列的可变重链(VH)和可变轻链(VL)互补决定区(CDR)1、2和3：1)11E12：SEQ ID NO:1的(VH)‑CDR1、SEQ ID NO:4的VH‑CDR2、SEQ ID NO:7的VH‑CDR3；SEQ ID NO:10的(VL)‑CDR1、SEQ ID NO:13的VL‑CDR2、SEQ ID NO:16的VL‑CDR3；2)19D07：SEQ ID NO:2的(VH)‑CDR1、SEQ ID NO:5的VH‑CDR2、SEQ ID NO:8的VH‑CDR3；SEQ ID NO:11的(VL)‑CDR1、SEQ ID NO:14的VL‑CDR2、SEQ ID NO:17的VL‑CDR3；3)34D03：SEQ ID NO:3的(VH)‑CDR1、SEQ ID NO:6的VH‑CDR2、SEQ ID NO:9的VH‑CDR3；SEQ ID NO:12的(VL)‑CDR1、SEQ ID NO:15的VL‑CDR2、SEQ ID NO:18的VL‑CDR3。

【技术特征摘要】
2011.07.21 US 61/510,2681.特异性结合到猫IL-31上的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或
其抗原结合部分包括具有以下序列的可变重链(VH)和可变轻链(VL)互补决定区(CDR)1、2
和3：
1)11E12：SEQIDNO:1的(VH)-CDR1、SEQIDNO:4的VH-CDR2、SEQIDNO:7的VH-CDR3；
SEQIDNO:10的(VL)-CDR1、SEQIDNO:13的VL-CDR2、SEQIDNO:16的VL-CDR3；
2)19D07：SEQIDNO:2的(VH)-CDR1、SEQIDNO:5的VH-CDR2、SEQIDNO:8的VH-CDR3；
SEQIDNO:11的(VL)-CDR1、SEQIDNO:14的VL-CDR2、SEQIDNO:17的VL-CDR3；
3)34D03：SEQIDNO:3的(VH)-CDR1、SEQIDNO:6的VH-CDR2、SEQIDNO:9的VH-CDR3；
SEQIDNO:12的(VL)-CDR1、SEQIDNO:15的VL-CDR2、SEQIDNO:18的VL-CDR3。
2.权利要求1的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体是嵌合的。
3.权利要求1的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体是猫源化的。
4.权利要求1至3中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体减轻、抑制或中和
猫体内的IL-31活性。
5.权利要求4的抗体，其中所述抗体减轻特异性皮炎的临床表现。
6.权利要求5的抗体，其中所述特异性皮炎的临床表现包括发痒。
7.如权利要求1至6中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体减
轻、抑制或中和猫的瘙痒症或过敏症。
8.权利要求7的抗体或其抗原结合部分，包含：
a)可变轻链序列，选自：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRT
DFTLTINPVETDDVATYYCQQSNKDPLTFGAGTKLELK(SEQIDNO:19；MU-11E12-VL)，
DIVMTQTPLSLSVSPGEPASISCRASESVDNYGISFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSGT
DFTLRISRVEADDAGVYYCQQSNKDPLTFGAGTKLEIK(SEQIDNO:20；CAN-11E12-VL-cUn-FW2)，
DIVMTQTPLSLSVSPGEPASISCRASESVDNYGISFMHWFQQKPGQSPQLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSGT
DFTLRISRVEADDAGVYYCQQSNKDPLTFGAGTKLEIK(SEQIDNO:21；CAN-11E12-VL-cUn-13)，
DIVMSQSPSSLSVSAGDKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPWQPPKLLIYGASTRESGVPDRFTGSGS
GTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPYTFGGGTKLEIK(SEQIDNO:22；MU-19D07-VL)，
EIVMTQSPASLSLSQEEKVTITCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPGQAPKLLIYGASTRESGVPSRFSGSGS
GTDFSFTISSLEPEDVAVYYCQNDYSYPYTFGQGTKLEIK(SEQIDNO:23；CAN-19D07-VL-998-1)，
DILLTQSPASLAVSLGQRAIISCKASQSVSFAGTGLMHWYQQKPGQQPKLLIYRASNLEAGVPTRFSGSGSRT
DFTLNIHPVEEEDAATYFCQQSREYPWTFGGGTKLEIK(SEQIDNO:24；MU-34D03-VL)，
EIVMTQSPASLSLSQEEKVTITCKASQSVSFAGTGLMHWYQQKPGQAPKLLIYRASNLEAGVPSRFSGSGSGT
DFSFTISSLEPEDVAVYYCQQSREYPWTFGQGTKLEIK(SEQIDNO:25；CAN-34D03-VL-998-1)；或
EIQMTQSPSSLSASPGDRVTITCKASQSVSFAGTGLMHWYQQKPGKVPKLLIYRASNLEAGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSLEPEDAATYYCQQSREYPWTFGQGTKLEIK(SEQIDNO:71；FEL-34D03-VL-021-1)；和
b)可变重链序列，选自：
QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFKYYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGGTKYNETFKGKATLTTD
KSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARGGTSVIRDAMDYWGQGTSVTVSS(SEQIDNO:26；MU-11E12-VH)，
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFKYYDINWVRQAPGAGLDWMGWIFPGDGGTKYNETFKGRVTLTAD
TSTSTAYMELSSLRAGDIAVYYCARGGTSVIRDAMDYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:27；CAN-11E12-VH-
415-1)，
EVKLVESGGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：GF巴莫特，SA敦哈姆，
申请(专利权)人：佐蒂斯有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US