ANG2抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合人血管生成素‑2(Ang2)的抗体，且可单独和与VEGF途径抑制剂组合用于治疗癌症，特别是由VEGFR2和Ang2驱动的癌症，包括胃癌、肝细胞癌、卵巢癌、结肠直肠癌和乳腺癌。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及医学领域。更具体而言，本专利技术涉及结合人血管生成素-2(Ang2)的抗体，且可用于治疗癌症、尤其肿瘤转移，且与人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)抑制剂组合用于由VEGFR2和Ang2驱动的实体瘤，包括胃癌、肝细胞癌、卵巢癌、结肠直肠癌和乳腺癌。癌症的标志是持续的新血管形成，称为血管生成。血管生成素-1(Ang1)和Ang2是调控血管生成的关键途径的成员；Ang1和Ang2是结合内皮细胞特异性受体酪氨酸激酶Tie2的分泌因子。Ang1由外周细胞组成型分泌且经由Tie2受体稳定血管完整性。Ang2仅响应于刺激(例如伤口愈合、肿瘤生长)从内皮细胞释放且经由Tie2信号传导促进血管出芽并抑制外周细胞-内皮细胞相互作用。研究已表明，抑制Ang2比Ang1对于抑制血管生成更重要，但在某些其它研究中，Ang2和Ang1的抑制已显示益处(Cascone等人，JClinOnc(2012)30(4):441)。当与VEGF阻断剂阿柏西普(aflibercept)组合给药时，针对人Ang2的抗体已显示在小鼠异种移植肿瘤模型中抑制肿瘤生长且降低肿瘤血管分布(Daly等人,CancerRes(2013)73(1):108中的REGN910和WO2011014469中的H1H685P)。在Brown等人(MolCancerTher(2010)9(1):145)中，mAb3.19.3(人Ang2抗体)据报导以小于Ang2至少500倍的亲和力结合Ang1，而在WO2006068953的实施例4和9中，申请人公开了3.19.3对Ang1具有强交叉反应性，其中对Ang2的KD大约为5pM且对Ang1的KD大约为30pM。在SW620异种移植研究中，将3.19.3与DC101(结合鼠VEGFR2的单克隆抗体)组合给药。仍然需要提供通过以高亲和力结合人Ang2且中和人Ang2来抑制Ang/Tie2血管生成途径的替代抗体。具体而言，仍然需要提供以高亲和力结合人Ang2且中和人Ang2、但不以高亲和力结合或中和人Ang1的抗体。因此，本专利技术的一个实施方案提供包含轻链(LC)和重链(HC)的抗体，其中轻链包含轻链可变区(LCVR)且重链包含重链可变区(HCVR)，其中LCVR具有SEQIDNO:3中给出的氨基酸序列，且HCVR具有SEQIDNO:1中给出的氨基酸序列。本专利技术的某些抗体以大于本领域已知的人Ang2抗体的高亲和力结合人Ang-2。此外，本专利技术的某些抗体在肿瘤异种移植模型(诸如用于三阴性乳腺癌的EL1997、用于卵巢癌的SKOV3x.1和用于前列腺癌的PC3)中表明阳性反应，指示作为癌症治疗剂的潜能。此外，本专利技术的某些抗体相比于人Ang-1选择性结合人Ang-2，且避免对人Ang1的潜在脱靶责任。在一个其它实施方案中，本专利技术提供抗体，其中LC具有SEQIDNO:4中给出的氨基酸序列，且HC具有SEQIDNO:2中给出的氨基酸序列。在一个其它实施方案中，本专利技术提供包含两条轻链和两条重链的抗体，其中各轻链具有SEQIDNO:4中给出的氨基酸序列，且各重链具有SEQIDNO:2中给出的氨基酸序列。在一个其它实施方案中，本专利技术提供抗体，其中所述重链之一与所述轻链之一形成链间二硫键，且另一重链与另一轻链形成链间二硫键，且所述重链之一与另一重链形成两个链间二硫键。在一个其它实施方案中，本专利技术提供抗体，其中该抗体被糖基化。在一个实施方案中，本专利技术提供结合人Ang2(SEQIDNO:7)的抗体，其包含轻链(LC)和重链(HC)，其中轻链包含分别由氨基酸序列KASQDVYIAVA(SEQIDNO:8)、YWASTRDT(SEQIDNO:9)和HQYSSYPPT(SEQIDNO:10)组成的轻链互补决定区LCDR1、LCDR2、和LCDR3，且其中重链包含分别由氨基酸序列GYSFTDYNMV(SEQIDNO:11)、YIDPYNGGTGYNQKFEG(SEQIDNO:12)和ARTRDRYDVWYFDV(SEQIDNO:13)组成的重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3。在一个实施方案中，本专利技术提供结合人Ang2(SEQIDNO:7)的抗体，其包含轻链(LC)和重链(HC)，其中轻链包含轻链可变区(LCVR)且重链包含重链可变区(HCVR)，其中LCVR具有SEQIDNO:3中给出的氨基酸序列，且HCVR具有SEQIDNO:1中给出的氨基酸序列。在一个其它实施方案中，本专利技术提供结合人Ang2(SEQIDNO:7)的抗体，其中LC具有SEQIDNO:4中给出的氨基酸序列，且HC具有SEQIDNO:2中给出的氨基酸序列。在一个其它实施方案中，本专利技术提供结合人Ang2(SEQIDNO:7)的抗体，其包含两条轻链和两条重链，其中各轻链具有SEQIDNO:4中给出的氨基酸序列，且各重链具有SEQIDNO:2中给出的氨基酸序列。在一个其它实施方案中，本专利技术提供结合人Ang2(SEQIDNO:7)的抗体，其中所述重链之一与所述轻链之一形成链间二硫键，且另一重链与另一轻链形成链间二硫键，且所述重链之一与另一重链形成两个链间二硫键。在一个其它实施方案中，本专利技术提供结合人Ang2(SEQIDNO:7)的抗体，其中该抗体被糖基化。在一个其它实施方案中，本专利技术提供对人Ang2的解离平衡常数KD小于约150pM的本专利技术抗体。本专利技术抗体的特征进一步在于与人Ang2的kon速率为约1×106M-1sec-1。本专利技术抗体的特征进一步在于与人Ang2的koff速率为约0.7×10-4sec-1。通过在37℃的结合动力学来确立KD、kon和koff值，如测定部分中的“结合动力学、亲和力和选择性”中所述。本专利技术抗体以高亲和力结合人Ang2。出于本公开的目的，术语“高亲和力”是指对人Ang2的KD小于约150pM。通过在37℃的结合动力学来确立KD值，如测定部分中的“结合动力学、亲和力和选择性”中所述。在一个实施方案中，本专利技术提供包含DNA分子的哺乳动物细胞，所述DNA分子包含：编码具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列；和编码具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列，其中该细胞能够表达包含具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的轻链和具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的重链的抗体。在一个实施方案中，本专利技术提供产生包含具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的轻链和具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的重链的抗体的方法，其包括在使得表达抗体的条件下培养本专利技术的哺乳动物细胞，且回收表达的抗体。在一个实施方案中，本专利技术提供通过本专利技术方法产生的抗体。在一个实施方案中，本专利技术提供包含本专利技术抗体和可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。在一个实施方案中，本专利技术提供治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本专利技术抗体。在一个其它实施方案中，本专利技术提供治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本专利技术抗体，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、胃癌、结肠直肠癌或肝细胞癌。在一个其它实施方案中，这些方法包括施用有效量的本专利技术抗体且同时、分开或依次组合施用一种或多种选自以下的抗肿瘤剂：顺铂、卡铂、脂质体多柔比星、多西他赛、环磷酰胺和多柔比星、诺维本、本文档来自技高网...

【技术保护点】
结合人Ang2(SEQ ID NO: 7)的抗体，其包含轻链(LC)和重链(HC)，其中所述轻链包含分别由氨基酸序列KASQDVYIAVA (SEQ ID NO: 8、YWASTRDT (SEQ ID NO: 9)和HQYSSYPPT (SEQ ID NO: 10)组成的轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，且其中所述重链包含分别由氨基酸序列GYSFTDYNMV (SEQ ID NO: 11)、YIDPYNGGTGYNQKFEG (SEQ ID NO: 12)和ARTRDRYDVWYFDV (SEQ ID NO: 13)组成的重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.19 US 62/0002531.结合人Ang2(SEQIDNO:7)的抗体，其包含轻链(LC)和重链(HC)，其中所述轻链包含分别由氨基酸序列KASQDVYIAVA(SEQIDNO:8、YWASTRDT(SEQIDNO:9)和HQYSSYPPT(SEQIDNO:10)组成的轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，且其中所述重链包含分别由氨基酸序列GYSFTDYNMV(SEQIDNO:11)、YIDPYNGGTGYNQKFEG(SEQIDNO:12)和ARTRDRYDVWYFDV(SEQIDNO:13)组成的重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3。2.抗体，其包含轻链(LC)和重链(HC)，其中所述轻链包含轻链可变区(LCVR)且所述重链包含重链可变区(HCVR)，其中所述LCVR具有SEQIDNO:3中给出的氨基酸序列，且所述HCVR具有SEQIDNO:1中给出的氨基酸序列。3.权利要求1或2中任一项的抗体，其中所述LC具有SEQIDNO:4中给出的氨基酸序列，且所述HC具有SEQIDNO:2中给出的氨基酸序列。4.权利要求1-3中任一项的抗体，其包含两条轻链和两条重链，其中各轻链具有SEQIDNO:4中给出的氨基酸序列，且各重链具有SEQIDNO:2中给出的氨基酸序列。5.权利要求1-4中任一项的抗体，其中所述重链之一与所述轻链之一形成链间二硫键，且另一重链与另一轻链形成链间二硫键，且所述重链之一...

【专利技术属性】
技术研发人员：DDM梁，J徐，
申请(专利权)人：伊莱利利公司，
类型：发明
国别省市：美国;US