本发明专利技术属于抗体药物的技术领域，提供抗TNFα的全人单克隆抗体及其应用，这些抗体是来源于人杂交瘤并经过细胞毒功能测试筛选和通过噬菌体展示技术进行亲和力筛选获得的，具有对TNFα的优异的亲和力和特异性。在细胞模型的药效学试验中，这些抗体能够有效中和TNFα及其所产生的细胞学效应。在动物实验中，这些抗体同样能有效中和TNFα，并抑制动物模型中TNFα所带来的表型。其效果显示不低于或比Humira更好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体药物的
具体地说，涉及一组新的全人源单克隆抗体分 子，其可用于治疗TNFa引起的疾病治疗。
技术介绍
众所周知，肿瘤坏死因子（tumornecrosis factor,TNF)家族参与各种免疫和炎症 反应的调控，是自身免疫性疾病（autoimmune disease)的关键性细胞因子。自身免疫性疾 病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。常见的系统性自 身免疫病有：类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、口眼干燥综合征、硬皮病、 结节性多动脉炎、Wegener肉芽肿病。TNF参与类风湿关节炎（RA)复杂的细胞网络反应，调 节炎症反应，因而针对TNF治疗RA及其他自身免疫疾病在理论上是有效的。事实上，大样 本多中心临床试验证明 ，抗TNF治疗能明显改善RA的症状，减轻疾病活动。 (一）TNF蛋白结构 人TNF- α基因定位在染色体6q21. 3区域，与主要组织相容性抗原复合体III类 基因（MHC-III)紧密连锁。基因组全长3kb (含4个外显子和3个内含子），成熟产物由157 个氨基酸组成，80%的氨基酸序列由第4个外显子编码。TNF-α是一个非螺旋、富含β折 叠的蛋白多肽，每个单体由反向平行的β折叠组成，通常以二聚体、三聚体或五聚体的形 式存在于体内，具有生物学活性的TNF-α分子是紧密连接的三聚体。 1984年从HL-60、U937等细胞中克隆成功rHu TNF- a cDNA，并在大肠杆菌中获得 高表达。人TNF-α前体由233个氨基酸残基组成，含76个氨基酸残基的信号肽，切除信号 肽后成熟型TNF-α为157氨基酸残基，非糖基化，第69位和101位两个半胱氨酸形成分子 内二硫键。rHu TNF-α分子量为17kDa。小鼠 TNF-α前体为235氨基酸残基，信号肽79 氨基酸残基，成熟的小鼠 TNF-a (rMuTNF-α )分子量为17kDa，由156个氨基酸残基组成， 第69位和100位两个半胱氨酸形成分子内二硫键，有一个糖基化点，但糖基化不影响其生 物学功能。rHu TNF-α与rMu TNF-α有79 %氨基酸组成同源性，TNF-α的生物学作用似 无明显的种属特异性。 TNF- α基因是RA发病遗传因素的一个重要候选基因，TNF增强子238为GG基因 型于RA进展性关节破坏程度相关且不依赖于DR4的存在。此外有研究发现 ，TNF区域多 态性可能于DR等位基因存在交互作用从而影响疾病易感性。 (二）TNF分子的功能 炎症疾病中，TNF-a主要来源于单核巨噬细胞，同时淋巴细胞、自然杀伤细胞、中 性粒细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、肥大细胞、内皮细胞、表皮细胞和成骨细胞等也能产生 和释放TNF- α 。 TNF-a与2种不同的受体TNFRl (p60、p55和CD120a，表达于所有有核细胞表面） 和TNFR2 (p80、p75和⑶120b，表达于造血干细胞系的细胞表面）结合，通过多种信号转导 途径（见图6)在不同类型细胞中、甚至同一类型细胞不同分化阶段中发挥多种不同的生物 学效应。 TNF-α是维持机体免疫平衡的重要生物介质，它参与淋巴细胞的迁移、活化、增殖 与分化以及淋巴组织的再生，在抗肿瘤、免疫防御和炎症反应中发挥重要作用。但值得 注意的是，TNF-α具有双重生物学效应 ，一方面TNF和受体系统能够诱导细胞程序化死 亡（即细胞凋亡），另一方面它又能促进细胞增殖、分化和成熟使细胞得以存活并产生相应 的多种生物学效应。正常情况下，TNF和受体系统维持着这两方面功能的平衡，当这种平衡 在某些病理条件下被打破时，便可导致机体免疫环境和功能紊乱，发生疾病。 Shenm等研究表明，抗TNF-α抗体（例如Humira)能够同时结合游离TNF-α和 细胞膜表面的TNF-α，从而阻止了 TNF-α与受体系统的结合，平衡TNF-α和受体系统的关 系，起到治疗疾病的目的。图7示出了此类抗体药与细胞膜表面TNF-α结合后产生的一系 列生物学反应。 (三）治疗性抗TNF抗体药 TNF是机体免疫系统的一个关键性的细胞因子，多种自身免疫性疾病中发现TNF 过表达。目前，使用抗TNF抗体药可以治疗类风湿性关节炎、银屑病关节炎、强制性关节 炎、银屑病、克罗恩病和炎性肠炎等。有5种TNF-α拮抗剂可用于临床，包括Etanerc印t、 Infliximab、Adalimumab、Golimumab 和 Certolizumab pegoL· 因为肿瘤坏死因子在免疫调节上起关键作用，TNF抗体药的可能临床适应症多 达20余种。目前欧美尚有几十个临床实验扩展TNF抗体药的适应症。这些适应症包括： 寻常性银屑病（Psoriasis Vulgaris)、急性移植物抗宿主病（Acute Graft Versus Host Disease)、白血病、皮肤粘膜淋巴结综合征（Mucocutaneous Lymph Node Syndrome)、川崎 病（Kawasaki Disease)、盘状红斑狼疮（DLE)、移植物抗宿主病、HIV感染、Moderate to Severe Active Axial脊椎关节炎、扁平苔藓（Lichen Planus)、肺炎、特发性肺炎综合征 (Idiopathic Pneumonia Syndrome)、肺癌、前列腺癌、肿瘤转移、Bone Cancer Stomatitis、 包涵体肌炎（Inclusion Body Myositis)、风湿性多肌痛（Polymyalgia Rheumatica)、 急性非感染性肺功能障碍（Acute Non-Infectious Pulmonary Dysfunction)、I 型糖尿 病、皮肌炎（Dermatomyositis)、代谢综合征、肥胖症、高血压、高血脂、狼疮性肾炎（Lupus Nephritis)、腰骶神经根病（Lumbosacral Radiculopathy)、慢性梗阻性肺疾病恶化（C0PD Exacerbation)、支气管炎、克罗恩氏病、结肠炎。 1) ·抗 TNF α 抗体：Humira I"3 年英国 Cambridge Antibody Technology 与美国 BASF Bioresearch Corporation的联合研究中心通过噬菌体展示技术发现了全人源抗TNF单克隆抗体的潜在 临床价值。1999年全人源抗TNF单克隆抗体药（Humira)早期临床试验取得了较好的初步 结果，为全面深入的开展临床试验奠定了基础。2001年271例类风湿关节炎的临床试验结 果证明，50%的病人联合使用Humira和甲氨蝶呤取得了至少50%以上的病情改善。2002 年Abbott公司建设了一个先进的生物制品车间生产Humira。2002年12月31号，美国FDA 正式批准Humira用于治疗类风湿性关节炎。2003年Humira上市销售，用于治疗类风湿性 关节炎，同时开展其他适应症的临床试验。2005年美国FDA批准Humira用于治疗银屑病关 节炎，当年首次取得了 10亿美元的销售额。2005年12月10日，在日本申请了类风湿性关 节炎的新药证书。2006年申请了克罗恩本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种全人源抗体，其特征在于：所述抗体的重链可变区的CDR1的氨基酸序列为GFTFSSYDMH，CDR2的氨基酸序列为VIWSDGSIKYYADSVKG，CDR3的氨基酸序列为EVESAMGGFYYNGMDV；并且所述抗体的轻链可变区的互补决定区选自以下1)、2)和/或3)：1)CDR1为RASQDIGFDLG，CDR2为AASSLQS，且CDR3为LQHKSYPLT；2)CDR1为RASQSIGFDLG，CDR2为AASSSQS，且CDR3为LQHRSYPLT；3)CDR1为RASQDIGFDLG，CDR2为AASTLPR，且CDR3为LQHKSYPLT。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：冯晓，张洁涵，李福军，王涛，李新灵，
申请(专利权)人：北京安保康生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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