杂交瘤细胞株SCCA1及其分泌的单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种杂交瘤细胞株SCCA1及其分泌的单克隆抗体和应用，所述杂交瘤细胞株SCCA1的保藏编号为CCTCC No：C2016131，所述单克隆抗体是由杂交瘤细胞株SCCA1分泌产生，所述单克隆抗体可以用于制备检测宫颈癌的试剂中。本发明专利技术的单克隆抗体具有良好的特异性，以此为基础建立的检测宫颈癌的体外诊断试剂盒，检测速度快，血液标本用量少，检测结果的灵敏度高，为临床与实践的不同需要提供了建立快速，特异，敏感的检测方法，极大改善宫颈癌的监测与管理。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于临床诊断
，具体地说，本专利技术涉及一种杂交瘤细胞株SCCA1及其制备方法，杂交瘤细胞株SCCA1分泌的单克隆抗体、和单克隆抗体在检测宫颈癌的试剂盒中的应用。
技术介绍
宫颈癌是全球妇女中仅次于乳腺癌和结直肠癌的第3个常见的恶性肿瘤，在发展中国家是仅次于乳腺癌居第2位的常见恶性肿瘤，是最常见的女性生殖道恶性肿瘤。宫颈癌是指发生在宫颈阴道部或者移行带的鳞状上皮细胞及宫颈管内膜的柱状上皮细胞交界处的恶性肿瘤。经过几十年广泛开展妇科普查，宫颈癌的患病率及病死率降低了近68％，但宫颈癌的发病正呈现一种年轻化的趋势。宫颈癌发病率高，预后较差。宫颈癌中最为常见的病理类型是鳞状上皮细胞癌，约占宫颈癌总数的75％；其次为腺癌，约占宫颈癌患者的25％。鳞状细胞癌抗原(SCC)是一种特异性很好而且是最早用于诊断鳞癌的肿瘤标志物。SCCA是一组属于丝氨酸/半胱氨酸抑制物家族的糖蛋白，最初由Kato等人于鳞状细胞癌组织中分离出来，作为鳞状细胞癌的肿瘤标志物，对于宫颈癌，治疗前血清中SCCA水平可以作为早期预后指标。SCCA在正常的鳞状上皮细胞中抑制细胞调亡和参与鳞状上皮层的分化，在肿瘤细胞中参与肿瘤的生长，它有助于所有鳞状上皮细胞起源癌的诊断和监测，例如：子宫颈癌、肺癌(非小细胞肺癌)、头颈部癌、食管癌、鼻咽癌以及外阴部鳞状细胞癌等，这些肿瘤患者血清中SCC升高，其浓度随病期的加重而增加，临床上用于监测这些肿瘤的疗效、复发、和转移以及评价预后。SCCA对宫颈癌有较高的诊断价值：对原发性宫颈鳞癌敏感性为44％-69％；复发癌敏感性为67％-100％，特异性90％-96％；其血清学水平与肿瘤发展、侵犯程度及有否转移相关，在宫颈癌根治术后SCCA浓度显著下降；可及早提示复发，50％患者的SCCA浓度升高先于临床诊断复发2-5个月，它可以作为独立风险因子加以应用。此外，对宫颈癌患者进行SCCA定量检测，还可帮助监测疾病状态、反映治疗疗效并早期发现癌症复发，有重要的参考价值。多数宫颈癌SCCA和CA125会同时升高，但有些宫颈癌只出现单一肿瘤标志物的升高。因此，两者联合使用，可避免单一应用的阴性结果造成疾病复发监测的漏诊。SCCA辅助诊断肺鳞癌：肺鳞癌阳性率为46.5％，其水平与肿瘤的进展程度相关，它配合CA125、CYFRA21-1和CEA联合检测可提高肺癌患者诊断的灵敏性。SCCA对于食管鳞癌、鼻咽癌的预测：阳性率随病情发展而上升，对于晚期患者,其灵敏性可达73％，联合检测CYFRA21-1和SCCA可以提高检测的灵敏性，III期头颈部癌阳性率为40％，IV期时阳性率增至60％，研究表明腺癌患者血清SCCA阳性检出率显著低于鳞癌患者。目前，宫颈癌的诊断主要依据两种检测手段。一种是经阴道取组织检查。包括：1、宫颈刮片细胞学检查，是宫颈癌筛查的主要方法，应在宫颈转化区取材；2、宫颈碘试验，正常宫颈阴道部鳞状上皮含丰富糖原，碘溶液涂染后呈棕色或深褐色，不染色区说明该处上皮缺乏糖原，可能有病变。在碘不染色区取材活检可提高诊断率；3、阴道镜检查，宫颈刮片细胞学检查巴氏Ⅲ级及Ⅲ级以上、TBS分类为鳞状上皮内瘤变，均应在阴道镜观察下选择可疑癌变区行宫颈活组织检查；4、宫颈和宫颈管活组织检查，为确诊宫颈癌及宫颈癌前病变的可靠依据，所取组织应包括间质及邻近正常组织，宫颈刮片阳性，但宫颈光滑或宫颈活检阴性，应用小刮匙搔刮宫颈管，刮出物送病理检查；5、宫颈锥切术，适用于宫颈刮片检查多次阳性而宫颈活检阴性者；或宫颈活检为宫颈上皮内瘤变需排除浸润癌者，可采用冷刀切除、环形电切除或冷凝电刀切除，此类方法还需要经验丰富的临床技师对检测结果进行解读，且患者抗拒此类侵入性的检查。另一种常规检测方法是检测生物标志物SCCA。但是，SCCA具有特异性低和灵敏度低的特点，而且全身鳞状上皮细胞若有病变均可使血清SCCA检测为阳性。因此，亟需一种特异性高和灵敏度高的标志物，来辅助增加检测宫颈癌的准确性。
技术实现思路
基于此，为了克服上述现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株SCCA1及其制备方法、该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体、和检测宫颈癌的试剂盒及其制备方法。为了实现以上专利技术目的，本专利技术采取了以下技术方案：一种杂交瘤细胞株SCCA1，所述细胞株的保藏编号为CCTCCNo：C2016131。本专利技术还提供了上述杂交瘤细胞株SCCA1的制备方法，其是以序列号为SEQIDNO:3所示氨基酸序列的SCCA1重组蛋白作为抗原免疫小鼠获得的。本专利技术还提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株SCCA1分泌产生。本专利技术还提供了上述单克隆抗体在制备检测宫颈癌的试剂盒中的应用。本专利技术还提供了一种检测宫颈癌的试剂盒，所述试剂盒包括有上述单克隆抗体。本专利技术还提供了一种检测宫颈癌的酶联免疫试剂盒，所述试剂盒包括有包被上述单克隆抗体的微孔板。本专利技术的针对癌症诊断的单克隆抗体，是由杂交瘤细胞株SCCA1所分泌产生的，该杂交瘤细胞株SCCA1已于2016年6月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉大学内)，保藏号为CCTCCNo:C2016131。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术的杂交瘤细胞株SCCA1分泌的单克隆抗体具有良好的特异性，以此为基础建立的检测宫颈癌的体外诊断试剂盒，为临床与实践的不同需要提供了建立快速，特异，敏感的检测方法；2、本专利技术所述的定量检测宫颈癌的试剂盒不仅检测速度快，血液标本用量少，采用蛋白芯片法检测SCCA抗体与其他相似抗体的交叉反应，检测结果的灵敏度高，为临床医师提供更准确的检测结果，极大改善宫颈癌的监测与管理。附图说明图1为本专利技术实施例1中小鼠常规免疫四次后的效价图。具体实施方式以下通过具体的实施例进一步说明本专利技术的技术方案，具体实施例不代表对本专利技术保护范围的限制。其他人根据本专利技术理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本专利技术的保护范围。实施例1杂交瘤细胞株SCCA1的制备包括以下步骤：1、抗原(SCCA1重组蛋白)的制备包括以下步骤：1)、pET28a-SCCA1重组载体的构建根据Genbank中提供的人SCCA1(全长1173bp)的DNA序列(NC_000018.10)，人工合成该序列，去掉N末端信号肽，设计三对引物，由两个引物的5‘端分别引入NdeI和XhoI酶切位点，用常规PCR方法(载体pET-28a为模板)扩增得到SCCA1基因的四个片段，分别表达SCCA1蛋白的四段序列：第一段：第93位到第159位氨基酸(SEQIDNo:1)；第二段：第44位到102位氨基酸(SEQIDNo:2)；第三段：第52位到112位氨基酸(SEQIDNo:3)；第四段：全长，第1位到390位氨基酸(SEQIDNo:4)。将载体pET-28a(市售)及经过琼脂糖凝胶纯化的SCCA1基因片段，用NdeI和XhoI进行双酶切处理，用T4DNA连接酶将纯化后的酶切产物连接，得到重组质粒pET-28a-SCCA1-1，pET-28a-SCCA1-2,pET-28a-SCCA1-3，pET-28a-SCCA1-4，将连接产物转化进入大肠杆菌DH5α，在含有氨苄青霉素的LB平板上挑选克隆，小量制备质粒，通过双酶切/PCR鉴定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杂交瘤细胞株SCCA1，其特征在于，所述细胞株的保藏编号为CCTCC No：C2016131。

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株SCCA1，其特征在于，所述细胞株的保藏编号为CCTCCNo：C2016131。2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株SCCA1的制备方法，其特征在于，所述杂交瘤细胞株SCCA1是以SEQIDNO:3所示氨基酸序列的SCCA1重组蛋白作为抗原免疫小鼠而获得的。3.一种单克隆抗体，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄若磐，罗树红，方建民，张玉明，胡洋，
申请(专利权)人：广州瑞博奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44