本发明专利技术提供了分泌抗牛干扰素诱导蛋白‑10(IP‑10)单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D5，以及其分泌的单克隆抗体MAb 2D5。该单克隆抗体MAb 2D5具有效价高、特异性好、与天然牛IP‑10抗原亲和力强的优势，基于此建立的阻断ELISA检测试剂盒、Western‑Blot检测试剂盒、间接免疫荧光(IFA)检测试剂盒和流式细胞术(FCM)检测试剂盒，具有较好的灵敏度和特异性，可以用作重组表达牛IP‑10的检测、对离体组织进行检测、表位鉴定等非诊断目的研究。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种杂交瘤细胞株，特别是涉及分泌抗牛干扰素诱导蛋白-10(IP-10)单抗的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体及应用。
技术介绍
干扰素诱导蛋白10(interferon-inducibleprotein-10，IP-10)是抗原提呈细胞经细胞因子刺激后分泌的趋化因子，属于CXC趋化因子家族。IP-10是Luster等在1985年从活化U937细胞株的基因表达谱中筛选出来的一种细胞因子。IP-10在感染性疾病、自身免疫性疾病、同种异体移植排斥反应、肿瘤、慢性炎症等疾病中可选择性地募集T淋巴细胞、自然杀伤细胞和单核细胞到损伤部位，发挥重要的宿主免疫防护作用。新近的研究显示IP-10表达水平的改变与感染性疾病，包括炎症性疾病、免疫功能异常与肿瘤的发展等相关。IP-10在牛结核等感染性疾病的诊断中作为重要的生物标志物，其效果也常与γ-干扰素释放试验(interferongammareleaseassay，IGRA)相比较。有研究表明联合检测IFN-γ和IP-10能提高牛结核诊断的敏感性。IP-10的免疫学检测是在特异性抗IP-10单克隆抗体(MAb)的基础上建立的用于对样本中的IP-10进行定性定量分析的实验方法。应用不同的单抗标记物和检测技术，可建立多种检测方法，如酶免疫分析法(EIA)，酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay，简称ELISA)，酶联免疫斑点法(Enzyme-linkedImmunospot，简称ELISPOT)，流式细胞术(FlowCytometry，简称FCM)分析法等。IP-10的FCM具有高度的敏感性和应用广泛性。作为细胞免疫状态的重要指标之一，IP-10的FCM检测方法将被广泛地用于研究基础和临床医学、疫苗免疫效果评估、器官移植、过敏反应以及多种病原感染的诊断等。但是，现有技术中制备的抗牛IP-10(BoIP-10)抗体，在应用于上述检测方法时往往遇到很大问题，特别是当用于检测天然牛IP-10时效果不佳。因此，获得一种可用于临床检测的，效价高、特异性好、与天然牛IP-10有抗原亲和力的牛IP-10单抗，对牛机体免疫状态的评价及感染性疾病诊断相关的研究具有重要的意义。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种分泌牛IP-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，以及该杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体在免疫检测领域的应用。所述杂交瘤细胞株分泌的抗牛IP-10的单克隆抗体效价高，其能与牛IP-10的高亲合力地特异结合，其作为诊断试剂检测牛IP-10，具有相当的灵敏度和特异性。本专利技术第一方面涉及一种分泌牛IP-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株2D5或其传代细胞株。本专利技术第二方面涉及一种牛IP-10单克隆抗体MAb2D5，其由所述上述杂交瘤细胞株2D5或其传代细胞株分泌产生。本专利技术第三方面涉及一种天然牛IP-10的阻断ELISA检测试剂盒，所述阻断ELISA检测试剂盒包括支持介质、抗原和检测抗体，其中，所述抗原为牛IP10蛋白，所述检测抗体为辣根过氧化物酶(HRP)标记的所述牛IP-10单克隆抗体MAb2D5；所述抗原包被在支持介质中或所述抗原与支持介质分别放置。本专利技术第四方面涉及提供了一种牛IP-10的Western-Blot检测试剂盒，所述Western-Blot检测试剂盒包括检测抗体、酶标二抗，其中，所述检测抗体为所述牛IP-10单克隆抗体MAb2D5。本专利技术第五方面涉及一种牛IP-10的间接免疫荧光(IFA)检测试剂盒，所述间接免疫荧光(IFA)检测试剂盒包括检测抗体、荧光二抗，其中，所述检测抗体为所述牛IP-10单克隆抗体MAb2D5。本专利技术第六方面涉及一种牛IP-10的FCM检测试剂盒，所述FCM检测试剂盒包括标记抗体、检测抗体，其中，所述检测抗体为异硫氰酸荧光素标记的所述牛IP-10单克隆抗体MAb2D5。本专利技术第七方面涉及所述杂交瘤细胞株2D5或其传代细胞株、所述牛IP-10单克隆抗体MAb2D5、所述含有牛IP-10单克隆抗体MAb2D5的试剂盒在用于非诊断目的的检测牛IP-10中的应用，所述非诊断目的检测包括重组表达牛IP-10的检测、对离体组织进行检测、表位鉴定研究、进出口检疫检验、流行病学研究。本专利技术的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有效价很高、特异性好、与天然抗原结合的亲和力强的优势，可用于检测天然牛IP-10。基于此建立的阻断ELISA检测试剂盒，可以有效检测牛外周血单核细胞样品和牛抗凝血浆中分泌天然牛IP-10，具有较好的灵敏度和特异性。基于此建立的Western-Blot检测试剂盒，可以有效检测大肠杆菌表达系统表达的牛IP-10蛋白和牛外周血单核细胞分泌的天然牛IP-10蛋白，具有较好的灵敏度和特异性。基于此建立的间接免疫荧光(IFA)检测试剂盒，可以有效检测牛外周血单核细胞样品和真核质粒表达分泌牛IP-10，具有较好的灵敏度和特异性。同时，基于此建立的牛IP-10FCM检测试剂盒，在检测牛外周血单核细胞样品时，可以检测出较高水平的分泌牛IP-10的T淋巴细胞，具有较好的灵敏度和特异性。采用本专利技术的试剂盒操作简便，极大缩短了检测时间，可以广泛应用于免疫学研究，用作牛机体免疫状态的评价及感染性疾病诊断相关的研究、以及非诊断目的的牛IP-10的检测。附图说明图1为单克隆抗体阻断ELISA抑制率曲线图。图2为本专利技术Western-Blot方法的牛IP-10蛋白检测结果图：A.重组GST-BoIP10蛋白检测结果，B.重组His-BoIP10蛋白检测结果。图3为本专利技术间接免疫荧光(IFA)方法的牛外周血单核细胞样品检测结果图：A.未刺激牛外周血单核细胞检测结果，B.ConA刺激牛外周血单核细胞检测结果。图4为本专利技术FCM试剂盒的牛外周血单核细胞样品检测结果图：A.未刺激牛外周血单核细胞检测结果，B.ConA刺激牛外周血单核细胞检测结果。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。本专利技术的目的是提供一种分泌牛IP-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，以及该杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体在免疫检测领域的应用。本专利技术一方面涉及一种分泌牛IP-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株2D5或其传代细胞株，所述杂交瘤细胞株2D5保藏号为CCTCCNO:C2016122；保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2016年6月7日。本专利技术第二方面涉及一种本专利技术所述的杂交瘤细胞株2D5或其传代细胞株分泌产生的牛IP-10单克隆抗体MAb2D5。本专利技术的牛IP-10单克隆抗体MAb2D5具有很高的效价，效价达1：6553600。本专利技术第三方面涉及一种天然牛IP-10的阻断ELISA检测试剂盒，所述牛IP-10的阻断ELISA检测试阻断ELISA方法包括支持介质、抗原和检测抗体，其中，所述抗原为牛IP10蛋白，所述检测抗体为辣根过氧化物酶标记的牛IP-10单克隆抗体MAb2D5；所述抗原包被在支持介质中或所述抗原与支持介质分别放置。所述牛IP10蛋白为重组牛IP10蛋白本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分泌牛IP‑10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株2D5或其传代细胞株，所述杂交瘤细胞株2D5保藏号为CCTCC NO:C2016122。
【技术特征摘要】
1.一种分泌牛IP-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株2D5或其传代细胞株，所述杂交瘤细胞株2D5保藏号为CCTCCNO:C2016122。2.一种牛IP-10单克隆抗体MAb2D5，其由根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。3.一种检测牛IP-10的阻断ELISA检测试剂盒，所述阻断ELISA检测试剂盒包括支持介质、抗原和检测抗体，其中，所述抗原为重组牛IP-10蛋白，所述检测抗体为辣根过氧化物酶标记的根据权利要求2所述的牛IP-10单克隆抗体MAb2D5；所述抗原包被在支持介质中或所述抗原与支持介质分别放置；优选地，所述试剂盒还包括下列试剂的一种或多种：1)底物液；2)洗涤液。4.一种检测牛IP-10的阻断Western-Blot检测试剂盒，所述Western-Blot检测试剂盒包括检测抗体、酶标二抗，其中，所述检测抗体为根据权利要求2所述的牛IP-10单克隆抗体MAb2D5，优选地，酶标二抗为HRP标记羊抗鼠IgG；更优选地，所述试剂盒还包括下列试剂的一种或多种：1)封闭液；2)底物液；3)洗涤液。5.一种检测牛IP-10的间接免疫荧光(IFA...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦新安，陈祥，徐正中，孟闯，沈轩云，夏爱鸿，闵晶晶，李昕，沈也驰，潘志明，孙林，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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