本发明专利技术涉及基因工程技术领域，具体涉及一种分泌抗人IL‑37单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗人IL‑37单克隆抗体及其应用，其中抗人IL‑37单克隆抗体是由保藏号为CCTCCNO：C20168的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生的。本发明专利技术的抗人IL‑37单克隆抗体具有特异性高以及亲和力高的特点，能够识别人IL‑37的原核表达产物、人IL‑37的真核表达产物及天然表达的人IL‑37蛋白，利用该单克隆抗体可以通过IHC、WB、ELISA、FCM等免疫学方法简便、快速、准确地检测出人IL‑37蛋白的表达水平。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种分泌抗人IL-37单克隆抗体的杂交瘤细胞株、抗人IL-37单克隆抗体及其应用。
技术介绍
IL-37属于白细胞介素-1（inteleukin-1, IL-1）家族成员。IL-1家族共有11个成员，都具有β-三叶草结构， 可以与免疫球蛋白样受体结合, 家族中的大多数因子为促炎细胞因子，少部分属于受体拮抗剂，可以通过阻断受体与配体结合减轻炎性反应。2000年，Kumar等发现一种未成熟的前体肽IL-1H4，于2001年被Eleanor发现其为IL-1家族的第7个细胞因子，命名其为IL-1F7，至2010被正式更名为IL-37。人类IL-37基因存在于2号染色体上，其分子量是17～24kD，结构与IL-1家族其它成员相似，由12条管状线组成，分为五个亚型IL-37a、IL-37b、IL-37c、IL-37d、IL-37e，其中IL-37b是占主导的亚型。IL-37b由218个氨基酸组成，在N端存在一个前导序列，并含有一个caspase-1切割位点，其前体分子被casepase-1酶切后产生成熟的IL-37b。IL-37b在人类的多种组织中都有表达，如淋巴结、肝脏、皮下脂肪、胸腺、骨髓、胎盘、肺、睾丸、子宫、结肠肿瘤。在一些细胞系中也发现了IL-37b的表达，如THP-1、U937、A431、IMTLHKG-1、HL60、HPBMC、HPT-4、NHDC等。IL-37b主要具有抗炎和免疫抑制作用，主要通过与细胞核内的Samd3结合形成复合体调节基因的转录来抑制炎症因子的释放，也能与IL-18受体结合抑制IFN-γ的合成，并对TLR后信号传导和DC细胞活性产生抑制作用，参与多种炎症性疾病的发生发展，如：肝炎、肿瘤、结核、系统性红斑狼疮、银屑病、结肠炎、肥胖症等。目前认为IL-37不但可以在胞内发挥其生物学功能，也可以分泌至细胞外作用于其他细胞或细胞因子而发挥作用。但是其对于免疫性疾病和感染性疾病的具体调节机制仍不十分清楚，因此，进一步阐明IL-37与炎症相关性疾病的发病机制，可以为疾病的治疗提供新思路和新靶点，高亲和力、高特异性的单抗无疑是研究IL-37功能的重要工具。免疫分析作为一种特殊的检测技术已经广泛应用于人类和动物。在免疫分析测定中，抗体是一个核心试剂，决定了测定的特异性和敏感性。尽管近些年来一些小分子物质开始用于临床诊断及治疗，如单链可变区片段、核酸适配体、肽配体等，然而，单克隆抗体仍是最佳选择，且与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有特异性高、重现性好等优点。这也使其成为诊断试剂的最好选择。ELISA法作为免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作，检测成本较低等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且一天之内可以检查几百甚至上千份标本。因此，也适合于血清流行病学调查。目前市面上有两家公司出售IL-37单克隆抗体，LSBio与Abcam各有一株，主要应用于免疫组织化学（immunohistochemical, IHC）、Western Blot（WB）、酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）、和免疫荧光流式细胞术（Flow cytometer Analysis, FCM）等，如在肝癌患者中，通过IHC检测到肝癌组织IL-37表达显著的升高，且表达水平与肿瘤大小呈负相关。同样的，可以通过WB来评估IL-37在细胞以及组织中表达的变化。ELISA主要用于检测血清、体液中的可溶性IL-37表达水平，这对于疾病筛查排除诊断是十分重要的。迄今商品IL-37单抗较少应用到FCM检测，因为没有流式标记抗体，需要先孵育IL-37单抗，再孵育相应二抗才能进行检测。可见，目前IL-37的单克隆抗体种类较少，应用范围有限，不足以满足实验研究的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种特异性高、亲和力高的抗人IL-37单克隆抗体、能分泌产生该抗体的杂交瘤细胞株以及该抗体在免疫检测领域和临床药物中的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：提供一种分泌抗人IL-37单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCCNO：C201683。本专利技术还提供一种抗人IL-37单克隆抗体，其所述抗人IL-37单克隆抗体是由上述杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生的。本专利技术还提供一种人IL-37的双抗体夹心ELISA检测试剂盒，所述试剂盒包括：a）重组人IL-37蛋白标准品；b）鼠抗人IL-37单克隆抗体；c）兔抗人IL-37多克隆抗体；d）HRP标记的羊抗兔IgG；e）酶标板；所述鼠抗人IL-37单克隆抗体是由保藏号为CCTCCNO：C201683的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生的。优选的，所述的一种人IL-37的双抗体夹心ELISA 检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括以下试剂：f）TMB显色液；g）终止液；h）包被缓冲液；i）洗涤液；j）封闭液；k）稀释液。优选的，所述包被缓冲液为pH9.6、浓度为0.05 mol/L的碳酸盐缓冲液。优选的，所述洗涤液为PBST洗涤液，所述封闭液为含有体积百分比为5%的脱脂奶粉的PBST溶液，所述稀释液为含有体积百分比为3%的脱脂奶粉的PBST溶液.本专利技术的抗人IL-37单克隆抗体在制备用于治疗由人IL-37介导的自身免疫系统疾病的药物中的应用。所述自身免疫系统疾病选自胰腺炎、炎性肌病、显微镜下多血管炎、自身免疫性再生障碍性贫血、自身免疫性甲状腺炎、自身免疫性肝炎、韦格纳氏综合征、肠憩室病、强直性脊柱炎、硬皮病、系统性硬化症、银屑病关节炎、骨关节炎、异位性皮炎、白癜风、移植物抗宿主病、皮肤T 细胞淋巴瘤、肾小球性肾炎、IgA 肾病、高敏移植患者、抗磷脂综合征、葡萄膜炎和哮喘、I 型糖尿病炎性肠病、类风湿型关节炎、系统性红斑狼疮或银屑病。本专利技术的抗人IL-37单克隆抗体在制备用于治疗炎症性疾病的药物中的应用。所述炎症性疾病为登革热病、结核病或炎症性肠病。本专利技术的有益效果是：（1）本专利技术的杂交瘤细胞株能够分泌产生一种特异性高、亲和力高的抗人IL-37单克隆抗体，该抗体能够识别人IL-37的原核表达产物，人IL-37的真核表达产物，及天然表达的人IL-37蛋白。因此，利用该单克隆抗体可以通过IHC、WB、ELISA、FCM等免疫学方法简便、快速、准确地检测出人IL-37蛋白的表达水平；（2）本专利技术的杂交瘤细胞株具有良好的传代能力并能大量扩增培养，能稳定在体外分泌抗体，并且分泌抗体的能力随着培养代次增加没有下降，诱生腹水的能力也不随传代次数的增加而改变；（3）本专利技术的抗人IL-37单克隆抗体与市面出售的抗体具有不同的结合位点，增加了抗体的种类；（4）本专利技术的抗人IL-37单克隆抗体可用于制备双抗体夹心ELISA 检测试剂盒，并通过双抗夹心ELISA检测方法，能够简单、快速、准确地检测出人血清中IL-37蛋白的表达水平，因此可用于临床样本检测，为疾病辅助诊断提供依据；（本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分泌抗人IL‑37单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCCNO：C201683。
【技术特征摘要】
1.一种分泌抗人IL-37单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCCNO：C201683。2.一种抗人IL-37单克隆抗体，其特征在于：所述抗人IL-37单克隆抗体是由权利要求1 所述的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生的。3.一种人IL-37的双抗体夹心ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：a）重组人IL-37蛋白标准品；b）鼠抗人IL-37单克隆抗体；c）兔抗人IL-37多克隆抗体；d）HRP标记的羊抗兔IgG；e）酶标板；所述鼠抗人IL-37单克隆抗体是由保藏号为CCTCCNO：C201683的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生的。4.如权利要求3所述的一种人IL-37的双抗体夹心ELISA 检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括以下试剂：f）TMB显色液；g）终止液；h）包被缓冲液；i）洗涤液；j）封闭液；k）稀释液。5.如权利要求4所述的一种人IL-37的双抗体夹心ELISA 检测试剂盒，其特征在于：所述包被缓冲液为pH9.6、浓度为0.05 m...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐军发，高宇驰，贾岩，王鑫，张俊爱，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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