本实用新型专利技术涉及一种快速检测大豆致敏蛋白β-conglycinin的胶体金免疫层析试纸，该试纸基于双抗体夹心的原理检测β-conglycinin，试纸含有支撑层、吸附层、保护层，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫，结合垫吸附有β-conglycinin的特异性抗体，纤维素膜设有用β-conglycinin兔源多克隆抗体溶液喷点的检测线以及用羊抗小鼠IgG抗体或兔抗小鼠IgG抗体溶液喷点的质控线，β-conglycinin的特异性抗体采用胶体金纳米颗粒标记的β-conglycinin鼠源单克隆抗体。本实用新型专利技术的免疫层析试纸特异性强、灵敏度高，检测简便、直观、准确，成本低，适用范围广，易于推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本技术涉及一种快速检测大豆致敏蛋白β-Conglycinin的胶体金免疫层析 试纸，该试纸基于双抗体夹心的原理检测β -conglycinin。
技术介绍
大豆中蛋白质含量丰富，氨基酸组成平衡，且富含不饱和脂肪酸，是人体和动物体 重要的植物蛋白和植物油来源。由于其种植面积广，产量大，长久以来一直被广泛应用于食 品和饲料的加工原料，然而，大豆也是联合国粮农组织认定的8种最重要的食物过敏源之 一，据不完全统计，大豆会导致大约〇. 4%的儿童产生过敏反应。这主要是因为大豆中含有 一系列过敏原，这些过敏原是大豆及其制品中能够导致人或畜禽过敏的蛋白质或糖蛋白， 过敏原数据库网站在2014年1月更新的数据信息显示，大豆中共存在38种过敏原，包括 大?疏水蛋白（Gly m 1)、大?外壳蛋白（Gly m 2)、大_&抑制蛋白（Gly m 3)、大?球蛋白 (Glycinin)、β-伴大豆球蛋白（β-conglycinin)、大豆空泡蛋白（Gly m Bd 30Κ)、胰蛋白 酶抑制因子等。其中β-conglycinin大豆中最主要的致敏蛋白之一，β-conglycinin是具 有较强热稳定性的致敏蛋白，直接加热并不能彻底破坏其过敏原活性，可以引发人体包括 皮肤、肠胃、呼吸等方面的过敏反应，并且大量的动物试验研究也表明，β -conglycinin可 以导致犊牛、仔猪和鼠等幼龄动物发生过敏反应，表现为腹泻、生长性能下降甚至死亡。 近几年，食物过敏已逐渐成为世界范围内广泛关注的食品安全问题，食品过敏原 容易在婴幼儿和幼龄动物体内引起IgE (Immunoglobulin E)抗体介导的速发型（I型） 超敏反应，从而导致肠内组胺过量释放等过敏性损伤。食物过敏问题已引起了各国食品 安全监督管理部门的重视，一些发达国家为保护食物过敏人群，专门立法规定食品包装上 要标注食物过敏原，我国在2012年实施的食品安全国家标准《预包装食品标签通则》（GB 7718-2011)中也推荐食品包装上标注致敏物质。因此，针对食品过敏原的检测技术就显得 意义重大，可为食品安全提供重要的技术依据。 大豆及其制品被广泛应用于食品和饲料加工领域，但是当其存在于婴幼儿食品以 及幼龄动物饲料中，就很可能会诱发过敏反应。免疫层析试纸检测方法具有成本低、快速、 便携且易操作等优点，可以用于大批量样品的定性与定量检测，在准确性、灵敏度和特异性 上也能够满足要求，该法分析过程简单，用作β -Conglycinin的检测有独特优势，是需要 优先发展的检测技术。但目前仍没有关于大豆致敏蛋白β-conglycinin免疫层析试纸检 测方法的报道，所以该方法将会成为未来大豆过敏原检测方法的一个发展方向。
技术实现思路
本技术要解决的技术问题：针对现有技术存在的不足，提供一种特异、灵敏、 简便、安全、快速检测β-conglycinin的免疫层析试纸。 本技术的技术方案： -种快速检测β-conglycinin的胶体金免疫层析试纸，底层为支撑层，中间层为 吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水 垫。在纤维素膜设有用β-conglycinin兔源多克隆抗体溶液喷点的检测线以及用羊抗小 鼠 IgG抗体或兔抗小鼠 IgG抗体溶液喷点的质控线；所述结合垫吸附有胶体金纳米颗粒标 记的β-conglycinin鼠源单克隆抗体。 所述支撑层用不吸水的韧性材料制成；样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙 烯膜或聚酯膜制成；结合垫用玻璃纤维棉、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成；纤维素膜用硝 酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成。纤维素膜 上的隐形检测线和隐形质控线为平行排列的" I I "直线式，或为其他类似印记。 快速检测β -conglycinin的胶体金免疫层析试纸的制备方法：包括用胶 体金纳米颗粒标记的β -conglycinin鼠源单克隆抗体(金标单抗）制备结合垫，用 β -conglycinin兔源多克隆抗体溶液喷点隐形检测线，用羊抗小鼠 IgG抗体或兔抗小鼠 IgG抗体溶液喷点隐形质控线，然后在支撑层上黏贴样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫。在 所述样品垫、结合垫及吸水垫上覆盖有保护膜，在样品垫与结合垫交界处对应的保护膜上 喷点有样品标记线，最后加上保护层。 该试纸利用了双抗体夹心检测抗原的原理，当试纸测试端插入待测样品溶液后， 待测溶液通过虹吸作用带动待测β -Conglycinin及结合垫中的金标单抗一起向纤维素 膜扩散，并最终渗入手柄端的吸水材料层。在扩散过程中，待测β-conglycinin可先与 金标单抗相结合，进而与纤维素膜上喷点的兔源多克隆抗体检测线结合，金标抗体和兔 源多克隆抗体分别与样品中被检测的β -conglycinin分子上的不同抗原决定簇结合， β -conglycinin被夹在金标单抗和兔源多克隆抗体之间，形成金标单抗-抗原-兔源多抗 复合物，即双抗体夹心模式，显示红色检测印记" I "；纤维素膜上喷点的羊或兔抗小鼠 IgG 抗体质控线也可与金标抗体结合，形成红色质控印记" I "，即两条红色印记" I I "表示为 阳性；反之样品溶液中无 β -conglycinin时，则不能与金标抗体结合，同样也不能与纤维 素膜上喷点的兔源多克隆抗体检测线结合，不显示红色检测印记，而纤维素膜上喷点的羊 或兔抗小鼠 IgG抗体质控线可与金标抗体结合，显示红色质控线印记" I "，形成一条红色 印记" I "表示为阴性。无论结果为阳性还是阴性，都会显示红色质控印记，若不显示则表 示试纸失效。 本技术的积极有益效果： (1)特异性强，灵敏度高。本技术试纸以双抗体夹心原理为基础制备而成，两 种抗体分别为胶体金纳米颗粒标记的鼠源单克隆抗体和兔源多克隆抗体。金标抗体中金颗 粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对 抗体的特异性及亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，该试纸具有较强的特异性和 较高的灵敏度，可检测lOOng/mL的微量β-conglycinin。 (2)简便、快速。使用本技术试纸，无需其他任何试剂和仪器，可现场操作。只 需将试纸插入被检样品液中，IOmin后即可判定检测结果。 (3)结果显示形象、直观、准确。本技术试纸以显示红色印记" I I "和" I " (或类似性状）作为检测的阳性和阴性标记，即在纤维素膜上显示两条红色印记" I I "（检 测线和质控线)，表示被检样品中含有β-conglycinin;显示一条红色印记" I "（质控线)， 表示被检样品中不含β -conglycinin。此结果可用肉眼直接观测，判定形象、直观、准确，简 单明了，不易出现假阳性和假阴性等人为误判。 (6)节省费用。适用于进行现场检测，费用低廉，节省大量贵重仪器及设备费用。 (7)适用范围广，便于推广应用。本技术实现了基于双抗体夹心的原理在快速 检测β -conglycinin胶体金免疫层析试纸中的应用，该试纸操作简便，能满足不同层次人 员的需要，包括海关检疫、卫生检疫、质量监测、农畜产品生本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速检测大豆致敏蛋白β‑conglycinin的胶体金免疫层析试纸，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫，其特征在于：在纤维素膜设有用β‑conglycinin兔源多克隆抗体溶液喷点的隐形检测线以及用羊抗小鼠IgG抗体或兔抗小鼠IgG抗体溶液喷点的隐形质控线；所述结合垫吸附有胶体金纳米颗粒标记的β‑conglycinin鼠源单克隆抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡骁飞，王耀，魏凤仙，王方雨，邢广旭，孙亚宁，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：新型
国别省市：河南;41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。