本发明专利技术公开了一种利用噬菌体抗体库技术筛选并利用基因工程方法制备的新型抗人IL-17的单克隆抗体或其片段，其特征在于对人IL-17具有高亲和力。本发明专利技术抗体可以是全长抗体、基本上完整的抗体、Fab片段、F(ab')2片段或单链Fv片段。该单克隆抗体或其片段用于治疗由人IL-17介导的自身免疫系统疾病中的用途，所述的自身免疫系统疾病包括但不局限于银屑病、类风湿性关节炎或强直性脊柱炎。本发明专利技术并且公开了包含编码该单克隆抗体或其片段的核苷酸载体、宿主细胞、制备和纯化方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术为基因工程抗体药物领域，特别是抗人IL-17的单克隆抗体领域。本专利技术 涉及人源性功能性抗人IL-17单克隆抗体，以及这类抗体在治疗人IL-17介导的疾病中的 用途。
技术介绍
白细胞介素 17 (IL-17)家族目前包括 IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E 和IL-17F六种细胞因子。IL-17家族的成员与任何其它已知的细胞因子没有序列相似 性，而且家族成员之间的序列相似性也比较低（Gaffen SL, Nat. Rev. Immunol. 2009 Aug;9(8):556-67)。IL-17家族成员的功能主要是参与免疫应答的调节。白细胞介素 IL-17A(以下简称IL-17)是20-30kD的同源二聚体糖蛋白，其主要由活化的⑶4+T细胞产 生并作为促炎细胞因子起作用。IL-17由活化的Τ细胞在炎性位点分泌，而不在体循环中 分泌。IL17具有多种生物学特性，包括上调黏附分子并在多种细胞类型包括滑膜细胞、软 骨细胞、成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞、角质形成细胞和巨噬细胞中诱导产生大量炎性 细胞因子和趋化因子。同样，IL-17通过诱导趋化因子的释放诱导嗜中性粒细胞聚集到炎 性位点上，刺激前列腺素和金属蛋白酶的产生，并抑制蛋聚糖的合成。此外，IL-17在造 血祖细胞的成熟中起重要作用。IL-17在不同的器宫和组织包括肺、关节软骨、骨、脑、造血 细胞、肾、皮肤和肠中具有信号转导功能。因此，由IL_17A/Thl7介导的免疫反应是全身性 的，由此引发的炎症反应主要表现为中性粒细胞浸润。 大量的研究已经证实IL-17的增加与多种疾病有关，包括呼吸道炎症、类风湿性 关节炎（RA)、骨关节炎、骨侵蚀、腹膜内脓肿与粘连炎症（IBD)、同种异体移植排斥、牛皮 癣、某些类型的癌、血管发生、动脉粥样硬化和多发性硬化（MS)等（Witkowski等人，Cell. Mol. Life Sci. 61:567-579, 2004)。而且，IL-17在胶原基质分解、炎症及关节损伤等方面 与IL-lb具有相对独立的效应，而且IL-17具有与TNF-a协同扩大炎症的生物学效应。进 一步的研究证实，通过结合IL-17的特异性抗体或可溶性IL17受体阻断IL-17的体内生物 学活性时，可以有效减少了多种动物关节炎模型中的炎症和骨侵蚀。因此，IL-17成为治疗 RA和其它自身免疫性疾病的新靶标，而且由于IL17主要集中于炎症部位，因而靶向IL17的 药物可能较靶向其它参与体循环的促炎细胞因子(如TNF)等具有潜在的更高安全性。 目前欧盟和美国FDA都已经批准用Novartis公司的Cosentyx治疗中重度斑块状 银屑病成人患者，而Cosentyx的活性成份是secukinumab，是一种IL-17的单抗。但是本领 域仍然需要更多适于治疗患者的改善的抗IL-17抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新型抗人IL-17的单克隆抗体或其片段，编码该单克 隆抗体或其片段的多核苷酸的载体、宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及临床应用。由 本专利技术涉及的抗体基因可变区的序列，可构建全长的抗体分子作为药物用于临床上由人 IL-17介导的自身免疫系统疾病使用。这些适应症包括但不局限于下列：银屑病、类风湿性 关节炎或强直性脊柱炎。 本专利技术构建了大容量的天然人源噬菌体抗体库，从中筛选得到了全人源抗IL-17 单克隆抗体。 本专利技术的抗体为全人源的单克隆抗体，拮抗至少一种与IL-17或其部分相关的体 外或体内生物活性。 在一个实施例中，本专利技术抗体的特征在于对人IL-17具有强结合亲和力。 在另一实施例中，本专利技术的抗体特征在于以高于背景的水平特异性结合人IL-17、 猕猴IL-17和食蟹猴IL-17,而不结合小鼠 IL-17。 在一个实施例中，本专利技术抗IL-17单克隆抗体含有重链可变区多肽，该多肽含有 3个HCDR，其特征在于：所述HCDR1序列为GXiX2X3X4X 5Y ;所述HCDR2序列为NQDGX6E ;所述 HCDR3 序列为 DYYDX7ISDYYIHYWYFDL。其中 XiX2X3X4X5序列为 FTIDN，MSMSD 或者 ITMDD ;乂6为 N或者D;X7SV或者L。而且其中HCDRs序列根据Chothia定义。优选地，本专利技术抗IL-17 单克隆抗体包含重链可变区多肽，该多肽具有选自SEQ ID NO :24-26的氨基酸序列。 在另一个实施例中，本专利技术抗IL-17单克隆抗体含有轻链可变区多肽，该多肽含 有3个LCDR序列，其特征在于：所述轻链可变区LCDR1序列为RASQNVHNRLT ;所述轻链可变 区IXDR2序列为GASNLES ;所述轻链可变区IXDR3序列为QQYNGSPTT。而且其中IXDRs定义 根据Chothia定义。优选地，本专利技术抗IL-17单克隆抗体包含轻链可变区多肽，该多肽具有 选自SEQ ID N0:21的氨基酸序列。 在优选的实施例中，本专利技术抗IL-17单克隆抗体含有（i):含HCDRUHCDR2、和 HCDR3序列的重链可变区，其特征在于：所述HCDR1序列为GXiX2X3X4X 5Y ;所述HCDR2序列为 NQDGX6E ;所述 HCDR3 序列为 DYYDX71SDYYIHYWYFDL。而且其中 HCDRs 序列根据 Chothia 定义。 :含IXDR1、IXDR2、和IXDR3序列的轻链可变区，其特征在于：所述轻链可变区IXDR1序 列为RASQNVHNRLT ;所述轻链可变区IXDR2序列为GASNLES ;所述轻链可变区IXDR3序列为 QQYNGSPTT。而且其中IXDRs定义根据Chothia定义。 在更优选的实施例中，本专利技术抗IL-17单克隆抗体的重链可变区序列为SEQ ID NO :24,轻链可变区序列为SEQ ID NO :21 ;或重链可变区序列为SEQ ID NO :25,轻链可变区 序列为SEQ ID N0:21 ;或重链可变区序列为SEQ ID N0:26,轻链可变区序列为SEQ ID N0: 21。 本专利技术抗IL-17单克隆抗体可包含或由完整的抗体（即全长)、基本上完整的抗体 或其抗原结合部分，例如Fab片段、F (ab'）2片段或单链Fv片段组成。 本专利技术抗IL-17单克隆抗体包括可变区和恒定区，其中抗体重链恒定区可以是 IgGl亚型（Seq ID 29)或者IgG4亚型（SeqID30)，轻链恒定区可以是kappa亚型（Seq ID 31)或者 Lambda 亚型（seqID32)。 本专利技术所述的单克隆抗体或其片段是全人源的。 本专利技术提供了转染上述载体的宿主细胞，所述的宿主细胞为CH0细胞或HEK293细 胞。 本专利技术抗体的药理学活性可以在标准测试方法，例如以下文献中公开的方法中进 行证明： Hwang SY, Kim JY, Kim Kff, Park MK, Moon Y, Kim WU, Kim HY: IL-17 induces production of IL_6 and IL_8 in rheumatoid arthritis synovial fibroblasts via NF-kapp本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种特异性结合人IL‑17A的单克隆抗体，其包含含HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列的重链可变区，其特征在于：所述HCDR1序列为GX1X2X3X4X5Y；所述HCDR2序列为NQDGX6E；所述HCDR3序列为DYYDX7ISDYYIHYWYFDL；其中X1X2X3X4X5序列为FTIDN，MSMSD或者ITMDD；X6为N或者D；X7为V或者L；而且其中HCDRs序列根据Chothia定义。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘志刚，沈世杰，刘玉兰，郭晶晶，郝小勃，
申请(专利权)人：北京百特美博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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