改善的TNF结合蛋白制造技术

提供了TNF结合蛋白和使用其治疗的方法。也提供了编码结合蛋白的核酸和制备这样的结合蛋白的重组表达载体和宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】改善的TNF结合蛋白 相关申请 本申请要求2013年3月15日提交的美国临时申请系列号U.S. 61/788, 113的优 先权，其通过引用W其整体并入本文。 该申请也涉及2013年1月22日提交的美国临时申请系列号61/755, 288,2012年 12月28日提交的美国临时申请系列号61/746, 616,和2012年12月28日提交的美国临时 申请系列号61/746, 617,其每一篇通过引用W它们的整体并入本文。 背景 治疗性组织坏死因子a(TNFa)结合蛋白的使用，比如英夫利昔单抗、阿达木单 抗、依郝西普、戈利木单抗和赛巧珠单抗已经彻底改革了许多慢性炎性疾病，包括炎性肠炎 (IBD)、强直性脊柱炎、多发性硬化、牛皮癖和风湿性关节炎（RA)的治疗。尽管它们成功改 善了患者的生命质量，但是用治疗性TNF结合蛋白的长期治疗引起强的免疫原性应答，其 使得产生抗药物抗体（ADA)。送样的ADA应答可影响治疗性TNF结合蛋白的安全性和药物 动力学，其接着可影响送些药物的用途和效力。因此，本领域需要新的TNF结合蛋白，用作 在患者中较少免疫原性的疗法。
技术实现思路
本公开提供了新的TNF结合蛋白和使用其治疗的方法。也提供了编码结合蛋白的 核酸和制备送样的结合蛋白的重组表达载体和宿主细胞。本公开至少部分基于下述发现： 二价TNF结合蛋白（例如，抗TNF单克隆抗体）可结合抗原呈递细胞的细胞表面上的TNF 并且内化。本文公开的结合蛋白一般展示单价结合细胞-表面TNFa(即，每个结合蛋白仅 能够结合抗原呈递的表面上的一个TNF分子）。 因此，在一个方面中，本公开提供特异性结合人TNF的结合蛋白，其中结合蛋白 包括抗体可变区和Fc区域，和其中和结合蛋白当结合细胞表面人TNF时展示的细胞内化的 数量小于抗人TNF参考抗体（例如，英夫利昔单抗，阿达木单抗，或戈利木单抗）展示的细 胞内化的数量。在某些实施方式中，结合蛋白单价结合抗原呈递细胞上的细胞表面人TNF。 在某些实施方式中，结合蛋白包括第一多肤链和第二多肤链， 其中第一多肤链包括VDH-狂1)n-C-Y1，其中 VDH是重链可变区， XI是连接体，条件是其不是CH1，[001引C是CH1结构域，[001引Y1是Fc区域，n是0或 1;[001引 和 其中第二多肤链包括VDka3)m-C，其中 VDL是轻链可变区， X3是连接体，条件是其不是CH1,[001引C是化1， m是 0 或 1 ; 其中X2包括抑制Y1的同源二聚化的至少一个突变。在一个具体的实施方式中， Y1包括选自表3中提出的组的氨基酸序列。在一个具体的实施方式中，XI和/或X3包括 表1中提出的氨基酸序列。在一个具体的实施方式中，VDH包括英夫利昔单抗、阿达木单 抗、培化赛巧珠单抗或戈利木单抗的重链CDR或全部的VH结构域氨基酸序列。在一个具体 的实施方式中，VDL包括英夫利昔单抗、阿达木单抗、培化赛巧珠单抗或戈利木单抗的轻链 CDR或全部的化结构域氨基酸序列。 在某些实施方式中，结合蛋白包括第一多肤链和第二多肤链，其中第一多肤链包 括VDH1-狂1)n-VD肥-X2-狂3)m-Yl，其中：V畑1是第一重链可变区；XI是连接体，条件是XI不是CH1;V畑2是第二重链可变区；X2 是CH1;X3是连接体；Y1 是Fc区域；n是0 或l，m是0 或 1;和 其中第二多肤链包括VDL1-狂4)m-VDL2-X5,其中：VDL1是第一轻链可变区；[003引X4是连接体，条件是X4不是CH1;VDL2是第二轻链可变区；X5 是化1;m是 0 或 1， 其中Y1包括抑制Y1的同源二聚化的至少一个突变。在一个具体的实施方式中， XI、X2和/或X4包括表1中提出的氨基酸序列。在一个具体的实施方式中，Y1包括表3中 提出的氨基酸序列。在一个具体的实施方式中，VDH1和/或VDH2包括英夫利昔单抗、阿达 木单抗、培化赛巧珠单抗或戈利木单抗的重链CDR或全部的VH结构域氨基酸序列。在一个 具体的实施方式中，VDL1和/或VDL2包括英夫利昔单抗、阿达木单抗、培化赛巧珠单抗或 戈利木单抗的轻链CDR或全部的化结构域氨基酸序列。 在某些实施方式中，结合蛋白包括四条多肤链， 其中所述四条多肤链的两条包括VDH-狂l)n-C-Yl，其中VDH是重链可变区，XI是连接体，条件是其不是CH1，[004引C是CH1结构域，Y1 是Fc区域， n是 0 或 1;和其中所述四条多肤链的两条包括VDk狂2)m-X3，其中VDL是轻链可变区，X2是连接体，条件是其不是CH1，[004引X3是化结构域，m是 0 或 1; 其中所述四条多肤链的至少一条包括突变，所述突变位于可变区中，其中所述突 变抑制特定的抗原和突变体结合结构域之间的祀向结合。在一个具体的实施方式中，Y1包 括增强异源二聚化的突变。在一个具体的实施方式中，Y1包括表3中提出的氨基酸序列。 在一个具体的实施方式中，XI和/或X2包括表1提出的氨基酸序列。在一个具体的实施 方式中，VDH包括英夫利昔单抗、阿达木单抗、培化赛巧珠单抗或戈利木单抗的重链CDR或 全部的VH结构域氨基酸序列。在一个具体的实施方式中，VDL包括英夫利昔单抗、阿达木 单抗、培化赛巧珠单抗或戈利木单抗的轻链CDR或全部的VL结构域氨基酸序列。 在某些实施方式中，结合蛋白包括四条多肤链， 其中所述四条多肤链的两条包括V畑1-狂l)n-VD肥-C-Y1，其中V畑1是第一重链可变区，V畑2是第二重链可变区， C是重链恒定结构域， XI是连接体，条件是其不是CH1，Y1 是Fc区域，n是 0 或 1;和 其中所述四条多肤链的两条包括VDL1-狂2)m-VDL2-X3,其中VDL1是第一轻链可变区，VDL2是第二轻链可变区，X2是连接体，条件是其不是CH1，[00财 X3是化结构域，m是 0 或 1; 其中所述四条多肤链的至少一条包括突变，所述突变位于第一可变区或第二可变 区中，其中所述突变抑制特定的抗原和突变体结合结构域之间的祀向结合。在一个具体的 实施方式中，突变位于VDH1和/或VD肥中。在一个具体的实施方式中，突变位于VDL1和 /或VDL2中。在一个具体的实施方式中，Y1包括增强异源二聚化的突变。在一个具体的实 施方式中，Y1包括表3中提出的氨基酸序列。在一个具体的实施方式中，XI和/或X2包 括和表1中提出的氨基酸序列。在一个具体的实施方式中，VDH1和/或VD肥包括英夫利 昔单抗、阿达木单抗、培化赛巧珠单抗或戈利木单抗的重链CDR或全部的VH结构域氨基酸 序列。在一个具体的实施方式中，VDL1和/或VDL2包括英夫利昔单抗、阿达木单抗、培化 赛巧珠单抗或戈利木单抗的轻链CDR或全部的VL结构域氨基酸序列。 在某些实施方式中，结合蛋白包括第一多肤链和第二多肤链，所述第一多肤链包 括VDH-狂l)n-X2-狂3)m-Yl，其中： VDH是重链可变区；XI是连接体，条件是XI不是CH1;X2是CHI;[007引X3是连接体；[007引Y1是F区域；n是0或l，m是0或1;并且所述第二多肤包括VDka4)n-X5-狂6)m-Y2,其中： VDL是轻链可变区； X4是连接体，条件是X4不是C本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性结合人TNF的结合蛋白，其中所述结合蛋白包括抗体可变区和Fc区域，并且其中所述结合蛋白当结合细胞表面人TNF时展示的细胞内化的数量小于抗人TNF参考抗体展示的细胞内化的数量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：T哈于尔，D安布罗西，AB德奥拉，S赫奇，
申请(专利权)人：艾伯维公司，
类型：发明
国别省市：美国;US