新的类微管蛋白及其编码序列制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－类微管蛋白２３（ｔｕｂｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ２３，简称为“ＴＬＰ２３”），编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤、免疫性疾病和胚胎发育混乱等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新类微管蛋白２３的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——类微管蛋白23(tubulin-like protein 23，简称为“TLP23”)，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。微管蛋白(tubulin)主要以α和β微管蛋白两种单体存在，每一种的分子量大约50kDa，装配成微管的天然亚单位—异二聚体。对来自棘皮动物和脊椎动物的α和β微管蛋白进行的氨基酸序列分析表明，这些蛋白质虽然在α和β链之间存在着重大的差异，但是每一种在进化中是高度保守的。在多数真核生物中，微管是由几个大同小异的基因编码的，它们的产物常常是分别组成细胞里各种特定的微管细胞器，如有丝分裂器、纤毛、细胞质骨架等，参与细胞分裂、纤毛鞭毛运动、细胞内运输、染色体运动等活动以及维持细胞形态结构等(Mandelkow，E.M.等人(1992)Cell Motility and the Cytoskeleton 22，235-244)。目前已知微管和许多细胞信号因子相作用，从而调节微管的功能及装配。例如，酪氨酸激酶如胰岛素和c-Src，第二信使应答激酶如依赖cAMP的激酶和依赖Ca2+/钙调蛋白激酶通过磷酸化作用调节微管功能或装配(MacRae，T.H.(1997)Eur.J.Biochem.244，265-278)。一系列研究表明，微管蛋白和Gα和Gβγ亚单位有直接结合相互作用，暗示这是微管装配的另一种调节模式(Roychowdhury，S.等人(1997)J.Biol.Chem.272，31576-31581)。同时微管蛋白也能调节信号分子(如A1腺苷和氨基丁酸受体、磷脂酶C-1、Ki-Ras等)的活性和定位(Christopher V.Carman(1998)J Biol Chem.273，20308-20316)。在真核生物中，还存在第三种微管蛋白即γ微管蛋白，分子量亦为50kDa，其含量不足微管蛋白1％，这种微管蛋白不参与微管的装配，但是γ微管蛋白与微管组织中心与微管的启动组装有密切关系(Silflow CD等人Cell Motil Cytoskeleton1999；42(4)285-97)。由于微管蛋白在调节细胞分裂分化、细胞内运输、信号转递、胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的微管蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。然而，在本申请之前尚未公开过本专利技术所涉及的人TLP23蛋白或其编码序列。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——类微管蛋白23(tubulin-likeprotein 23，简称为“TLP23”)以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码TLP23的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码TLP23的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产TLP23的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——TLP23的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——TLP23的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断和治疗与TLP23异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中69-692位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1623位的序列。本专利技术还涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选模拟、激活、拮抗或抑制TLP23蛋白活性的化合物的筛选方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与TLP23蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于TLP23表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指蛋白质具有天然分子的结构、调控或生物化学功能。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与TLP23结合时，可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合TLP23的分子。“拮抗剂”或“抑制物”是指当与TLP23结合时，可封闭或调节TLP23的生物学活性或免疫学活性的分子。拮抗剂和抑制物包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合TLP23的分子。“调节”是指TLP23的功能发生改变，包括蛋白质活性的升高或降低、结合特性的改变及TLP23的任何其它生物学性质、功能或免疫性质的改变。″基本上纯″是指基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化TLP23。基本上纯的TLP23在非还本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－ＴＬＰ２３，其特征在于，它包括：具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或该多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海生元基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]