新的人转运蛋白20KD及其编码序列制造技术

本发明专利技术公开了一种新的人转运蛋白２０ＫＤ（Ｎｏｖｅｌ Ｈｕｍａｎ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ ２０ＫＤａ，简称“ＢｉｏＴＲＰ２０”），编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了将此多肽和多核苷酸用于治疗老年痴呆症、癫痫症、神经系统信号传导紊乱、免疫紊乱、癌症等疾病的方法。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了基于鉴别此核酸序列中的突变和此多肽表达水平改变的诊断测定方法。本发明专利技术还公开了编码这种新的ＢｉｏＴＲＰ２０的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
和遗传工程领域，具体地说，本专利技术涉及了一种新的多肽——人转运蛋白20KD(Novel Human Transporter Protein 20KDa，简称“BioTRP20”)，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。一些跨膜转运方式需跨膜转运蛋白的介导，跨膜转运蛋白的多肽链通常多次连续跨越膜磷脂双层，使特异的亲水性物质在穿越膜时可以不直接和膜亲水性磷脂双层内部相接触。膜转运蛋白主要分为两种类型一是通道蛋白，它和被转运物质并不结合，而是形成跨膜磷脂双层的亲水性孔道，可允许特异的无机离子或极性小分子通过，如无机离子Na+、Ka+、Ca2+、Cl-等，神经细胞也可利用通道蛋白来传递和接送信号。此运送方式效率高，不耗能量，并且可以调节离子的流量。二是载体蛋白，是与被转运的物质结合，通过一系列可逆的构象变化实现跨膜转运。如ATP驱动泵、ABC转运蛋白超家族、葡萄糖转运蛋白、人红细胞膜上的带3蛋白等。有些载体蛋白可简单地把物质从膜的一侧转运到另一侧，有些载体蛋白转运某一物质则依赖于同时或先后转运另外一种物质，两者同向或异向转运。在蛋白的生物合成中，某些氨基酸和某些氨基酸衍生物，如谷氨酸、甘氨酸、GABA、肾上腺素、去甲肾上腺素等，均作为信号分子。特定的跨膜转运蛋白也与各器官组织摄取胞外氨基酸有关。在脊椎动物大脑和外周感觉器官各组织中，转运蛋白在摄取胞外氨基酸的过程中起了重要的作用。起神经递质作用的氨基酸被摄取后，形成神经元细胞之间的突触间隙以保持持续的重复的突触传递。某些氨基酸(如谷氨酸、胱氨酸)的胞外高浓度会引起神经细胞的死亡。胞外氨基酸的高浓度与一些病理状态有关，如低血糖、癫痫症、帕金森氏症等。研究发现，人转运蛋白20KD及其编码的多核苷酸与老年痴呆症、低血糖、癫痫症、帕金森氏症、神经系统信号传导紊乱、免疫紊乱、肿瘤等疾病有关。因此，为治疗目的研究和开发人转运蛋白有重要意义。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人转运蛋白20KD(简称为“BioTRP20”)以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该BioTRP20多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码BioTRP20的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码BioTRP20的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产BioTRP20的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的BioTRP20多肽的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术BioTRP20多肽的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断和治疗与BioTRP20异常相关的疾病的方法。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的人转运蛋白20KD(BioTRP20)，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽或其氨基酸变异不超过5％的衍生物。在本专利技术的第二方面，提供分离的编码这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性(a)编码上述BioTRP20的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中376-921位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2085位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。下列附图用于说明本专利技术的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本附图说明图1是本专利技术的人转运蛋白20KD(BioTRP20)和Homo sapiens的转运蛋白(U49082)的氨基酸序列同源性比较图。相同氨基酸在两个序列间用单字符氨基酸表示，相似氨基酸用“+”表示。图2为分离的人转运蛋白20KD(BioTRP20)的聚丙烯酰胺凝胶电泳图(SDS-PAGE)。20kDa为蛋白质的分子量，箭头所指为分离出的蛋白条带。如本专利技术所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。例如，活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的BioTRP20蛋白或多肽”是指BioTRP20基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化BioTRP20。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。BioTRP20多肽的纯度能用氨基酸分析确定。本专利技术提供了一种新的多肽——BioTRP20多肽，其基本上是由SEQ ID NO2所示的氨基酸序列组成的。本专利技术的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本专利技术的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本专利技术的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本专利技术的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。本专利技术还包括BioTRP20的片段、衍生物和类似物。如本专利技术所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本专利技术天然的BioTRP20相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术多肽的片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围之内。本专利技术还提供了分离的核酸(多核苷酸)，该多核苷酸基本由编码具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽的多核苷酸组成。较佳地，本专利技术的多核苷酸序列具有SEQ ID NO1的核苷酸序列。本专利技术的多核苷酸可以是DNA形式或是RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO1所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本专利技术所用，“简并的变异体”在本专利技术中是指编码具有SEQ ID NO2的蛋白质或多肽，但与SEQ ID NO1所示的编码区序列有差别的核酸序列。编码SEQ ID NO2的成熟多肽的多核苷酸包括只有成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人ＢｉｏＴＲＰ２０多肽，其特征在于，它包括：具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海生元基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]