本发明专利技术涉及生物医药工程技术领域。HIV-1型转录反式激活因子(trans-activator?of?transcription，Tat)是HIV-1感染早期产生的重要调控蛋白。本发明专利技术的目的在于筛选到分子构象相对稳定且能引起较强免疫反应的HIV-1型Tat蛋白突变体序列。本发明专利技术提供的HIV-1Tat蛋白突变体其氨基酸序列如SEQID?NO：2、4或6所示。本发明专利技术的三种Tat突变体蛋白的兔抗血清均与HIV-1全长Tat蛋白呈特异性反应，且反应性更强，因此可用于制备抗HIV感染多肽药物的组成成分或作为制备HIV?Tat疫苗的候选抗原。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药工程
，具体涉及人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列，及其在制备HIV免疫原中的应用，在制备预防和治疗性HIV疫苗中的应用，在制备HIV检测试剂盒中的应用。
技术介绍
人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)主要经血液、性接触及母婴垂直途径等传播，可引起获得性免疫缺陷综合征(AIDQ，即艾滋病。据联合国艾滋病规划署2009年底新的统计，目前全球HIV感染者约6000万，2500万人死于艾滋病相关疾病。 我国现存HIV感染者和艾滋病病人约70多万，其中70%以上为性接触传播，艾滋病已经成为我国及全球所面临的重大公共卫生问题。目前采用高效抗逆转录病毒疗法(HAART)虽能延缓艾滋病病情的发展，但不能完全清除病毒；行为干预也仅减缓HIV感染传播速度而无法终止其流行。因此，迫切需要开发研制新的有效的药物以控制HIV的传播和感染。感染人类的HIV有HIV-I和HIV-2两型，两者核苷酸序列相差可超过40%。世界各地主要流行的是HIV-I，HIV-2则主要流行在非洲西部地区。HIV-I(trans-activator of transcription, Tat) ^ HIV-I 感染早期产生的重要调控蛋白。根据HIV-I毒株的不同，Tat蛋白由86-101个氨基酸残基组成，由两个独立的外显子编码第1个外显子编码1-72位氨基酸(aa)，具有完全的转录激活活性；第2外显子编码Tat C末端区(73-lOlaa)。试验证实Tat在HIV-I复制、扩散及致病中起重要作用。研究表明，在感染细胞内，Tat可反式激活HIV基因组转录的起始和延长，从而启动和促进病毒的复制；而分泌和释放至细胞外的Tat还具有多样的胞外活性， 如参与免疫抑制、神经系统损伤及Kaposi肉瘤形成等致病过程，被称为“病毒毒素”(参见文献:Silvers JM, Aksenova MV, Aksenov MY, Mactutus CF, Booze RM. Neurotoxicity of HIV-ITatprotein :involvement of Dl dopamine receptor. Neurotoxicology. 2007 ； 28(6) :1184-1190. )。Tat上述生物学特性及致病效应已使其成为HIV预防性及治疗性疫苗的候选抗原之一。HIV-ITat分子为天然非折叠蛋白，属于无规卷曲类型的分子。虽然Tat序列在 HIV-I不同亚型间具有高度保守性，但其缺乏稳定二级结构和高级结构，使其分子构象极不稳定，处于快速动态的变化之中。上述HIV-I Tat分子本身的序列及结构特征，使得天然 Tat作为HIV疫苗的候选抗原尚存在诱发免疫保护性抗体滴度低、交叉反应性差等不足。因此通过分子生物学手段，对HIV-I天然Tat分子结构进行改造，是获得分子构象相对稳定的新型Tat免疫原的一条有效途径，具有潜在的HIV疫苗开发价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于制备构象相对稳定并能诱导产生更强免疫反应的新型HIV Tat 免疫原。本专利技术通过对人类免疫缺陷病毒I型(HIV-I) HXB2株天然Tat (参见文献0pi S, Peloponese JM Jr, Esquieu D, Campbell G, de Mareuil J, Walburger A, Solomiac Μ, Gregoire C, Bouveret Ε, Yirrell DL, Loret EP. Tat HIV-I primary andtertiary structures critical to immune response against non-homologous variants. JBiol Chem. 2002 ；277 (39) :35915-35919.)分子不同区段进行合理截取，即取 Tatl-37、Tat 1-61 和Tat22-101区段分别构建原核表达质粒，经过转化大肠杆菌(E. coli)BL21 (DE3)，用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl^-D-l-thiogalactopyranoside，IPTG)诱导表达，以及经SDS-PAGE凝胶电泳分析和Western blot鉴定，筛选获得三种构象相对稳定并能诱导产生更强免疫反应的新型HIV-ITat免疫原，本专利技术制备获得的HIV-ITat免疫原在国内外未见报道。本专利技术提供了以下三种人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列一、Tat突变体抗原1 (Tatl-37)由37个氨基酸组成，其氨基酸序列为H2N-MEPVD PRLEPWKHPGSQPKTACTNCYCKKCCFHCQVC-COOH(如 SEQ ID NO :2 所示)；编码Tatl-37突变体的核苷酸序列为5 ‘ -ATGGAACCGGTTGACCCGCGTCTGGAACCGTGGAAACACCCGGGTTCTCAGCCGAAAACCGCTTG CACCAACTGCTACTGCAAAAAATGCTGCTTCCACTGCCAGGTTTGC-3 ‘(如 SEQ ID NO 1 所示)。二、Tat突变体抗原2 (Tat 1-61)由61个氨基酸组成，其氨基酸序列为H2N-MEPVD PRLEPWKHPGSQPKTACTNCYCKKCCFHCQVCFITKALGISYGRKKRRQRRRAHQN-COOH(如 SEQ ID NO :4所示)；编码Tatl-61突变体的核苷酸序列为5 ‘ -ATGGAACCGGTTGACCCGCGTCTGGAACCGTGGAAACACCCGGGTTCTCAGCCGAAAACCGCTT GCACCAACTGCTACTGCAAAAAATGCTGCTTCCACTGCCAGGTTTGCTTCATCACCAAAGCTCTGGGTATCTCTTAC GGTCGTAAAAAACGTCGTCAGCGTCGTCGTGCT CACCAGAAC-3‘(如 SEQ ID NO 3 所示)。三、Tat突变体抗原3(Tat22_101)由80个氨基酸组成，其氨基酸序列为H2N-CTN CYCKKCCFHCQVCFITKALGISYGRKKRRQRRRAHQNSQTHQASLSKQPASQPRGDPTGPKESKKKVERETETDPVD-C00H(如 SEQ ID NO 6 所示)；编码Tat22_101突变体的核苷酸序列为5 ‘ -CCGAAAGAATCTAAAAAAAAAGTTGAACGTGAAACCGAAACCGACCCGGTTGACTCTGGGTATC TCTTACGGTCGTAAAAAACGTCGTCAGCGTCGTCGTGCTCACCAGAACTCTCAGACCCACCAGGCTTCTCTGTCTAA ACAGCCGGCTTCTCAGCCGCGTGGTGACCCGACCGGTTGCACCAACTGCTACTGCAAAAAATGCTGCTTCCACTGCC AGGTTTGCTTCATCACCAAAGC-3‘(如 SEQID NO 5 所示)。本专利技术还提供了上述人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其编码基因在制备HIV免本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．人类免疫缺陷病毒Ｉ型Ｔａｔ蛋白突变体，其氨基酸序列如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、４或６所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曹洁，潘卫，张华群，陈秋莉，王锦红，廖文婷，葛宜兵，祁培培，刘超，章萍萍，杨界，何婷，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31
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