本发明专利技术公开一种用于编码绿盲蝽超气门蛋白的DNA序列。本发明专利技术还公开一种绿盲蝽超气门蛋白，用于编码绿盲蝽超气门蛋白的DNA序列的重组表达载体、转基因细胞系统或转基因重组菌，所述的重组表达载体、转基因细胞系统或转基因重组菌在生产绿盲蝽超气门蛋白中的应用及绿盲蝽超气门蛋白的制备方法。本发明专利技术利用绿盲蝽超气门蛋白基因，构建其pEGX-6P-1原核表达载体，并在大肠杆菌Rosetta?gami?B中经IPTG诱导后能产生所述蛋白的包涵体，再经变性、复性可形成所述的蛋白，并加以纯化制得。制得的蛋白分子量约为65KD，蛋白浓度为1.67mg/ml。纯化的超气门蛋白可为以蜕皮激素受体为靶标的新型杀虫剂提供前期的理论基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及农业科学
，具体涉及一种绿盲蝽超气门蛋白、其编码序列、载体、菌株。
技术介绍
绿盲蝽Apolygus lucorum(Hemiptera:Miridae)属半翅目盲蝽科，是棉花、蔬菜、果树、牧草等多种农作物上的重要害虫。近年来，由于转Bt基因棉的大面积种植和农业产业结构的调整等原因，绿盲蝽种群数量急剧上升，加之长期依赖化学农药防治，致使绿盲蝽的抗药性日渐增强，目前农业生产上的绿盲蝽防控面临严峻挑战，急待开拓减少化学农药使用的新型无公害防控手段。类固醇激素20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone，20E)是昆虫蜕皮激素的主要活性形式，在昆虫的变态发育过程中起着重要的调控作用。蜕皮激素受体(ecdysone receptors，EcR)是蜕皮激素的作用靶标，是昆虫体内重要的调控蛋白，目前已成为新型杀虫剂的重要靶标。它必须首先与超气门蛋白(ultraspiracle protein，USP)形成异源二聚体，再激活或抑制下游相关基因的表达。USP隶属于昆虫核受体，一般含有4个模块结构域：A/B域、C域、D域和E域。其中C域及D域相对保守，C域含有2个锌脂结构，E域存在一个配体结合袋，是与EcR形成异源二聚体的结合域。研究绿盲蝽ALUSP基因结构及获得其重组蛋白，可望为以蜕皮激素受体为靶标的新型杀虫剂提供前期的理论基础。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的第一个目的是提供一种用于编码绿盲蝽超气门蛋白的DNA序列，如SEQ ID NO：1所示。本专利技术的另一个目的在于提供一种用于编码绿盲蝽超气门蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本专利技术的又一个目的是提供用于编码绿盲蝽超气门蛋白的DNA序列的重组表达载体、转基因细胞系统或转基因重组菌。本专利技术的又一目的是提供一种绿盲蝽超气门蛋白的制备方法。技术方案：为了解决上述问题，本专利技术的技术方案是提供一种用于编码绿盲蝽超气门蛋白的DNA序列，其碱基序列如SEQ ID NO：1所示。一种绿盲蝽膜超气门蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。其中，含有上述的用于编码绿盲蝽超气门蛋白的DNA序列的重组表达载体、转基因细胞系统或转基因重组菌。其中，上述的重组表达载体，是将上述的DNA序列插入到大肠杆菌表达载体中得到的表达绿盲蝽超气门蛋白的重组表达载体。其中，上述大肠杆菌表达载体为pEGX-6P-1。其中，上述重组菌是将权利要求4或5所述的重组表达载体导入大肠杆菌中，筛选得到转基因重组菌。其中，上述的大肠杆菌为Rosetta gami B。一种绿盲蝽超气门蛋白的制备方法，是培养上述的转基因重组菌得到的绿盲蝽超气门蛋白。一种绿盲蝽超气门蛋白的制备方法，包括以下步骤：1）、绿盲蝽超气门蛋白基因的扩增；2）、绿盲蝽超气门蛋白基因原核表达载体构建；3）、绿盲蝽超气门蛋白的变性和复性；4）、绿盲蝽超气门蛋白的纯化。有益效果：本专利技术相对于现有技术，具有以下优点：本专利技术的利用绿盲蝽超气门蛋白基因（ALUSP），构建其pEGX-6P-1原核表达载体，并在大肠杆菌Rosetta gami B中经IPTG诱导后能产生所述蛋白的包涵体，再经变性、复性可形成所述的蛋白，并加以纯化制得。制得的蛋白分子量约为65KD，蛋白浓度为1.67mg/ml。纯化出的超气门蛋白可为以蜕皮激素受体为靶标的新型杀虫剂提供前期的研究基础。附图说明图1绿盲蝽超气门蛋白基因5'和3'端PCR扩增电泳图。泳道1：10000bp的DNA maker，泳道2：绿盲蝽超气门蛋白基因5'(A)和3'端(B)PCR片段图2绿盲蝽超气门蛋白基因全长序列的PCR扩增电泳图。泳道1：2000bp的DNA maker，泳道2：绿盲蝽超气门蛋白基因全长；图3EcoRI和XhoI双酶切T载体电泳图；图4pEGX6P1-ALUSP诱导表达的SDS-PAGE分析电泳图；图5pEGX6P1-ALUSP蛋白的GST琼脂糖亲和层析图；图6pEGX6P1-ALUSP蛋白的分子筛纯化电泳图；图7纯化的pEGX6P1-ALUSP蛋白SDS-PAGE检测电泳图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作更进一步的说明。实施例1：ALUSP基因的获得采用TRIzol法提取绿盲蝽总RNA，选择电泳图谱良好并且OD260/OD280值在1.8～2.0之间的总RNA样品合并进行mRNA的纯化，反转录合成第一链cDNA，PCR反应体系为：10μl总RNA，4.0μl5X反应缓冲液，2μl10mmol dNTP，1μl核糖核苷酸抑制剂，2μl反转录酶，加ddH2O至反应体积为20μl。PCR反应参数为：42℃温浴60min，72℃温浴10min。根据已知昆虫超气门蛋白的保守序列设计适用于PCR扩增引物ALUSP-F(5’-CATTATGGWGTYTAYAGYTGTG-3’)及ALUSP-R(5’-AGHAGTTCATTCCAVCCTGCTC-3’)，获得绿盲蝽超气门蛋白保守序列，该保守序列参见序列表中的SEQ ID：3，PCR反应体系为：12.5μl2×GC Buffer I，0.5μl ALUSP-F，0.5μlALUSP-R，4μldNTP，6.3μl ddH2O，1μl cDNA，0.5μl Taq酶；PCR反应参数为：95℃预变性3min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，72℃修复延伸7min，总循环33次；根据上述获得的保守序列设计特异性引物，利用巢式PCR进行绿盲蝽超气门蛋白5′和3′端序列的克隆。第一轮3’-RACE反应体系：12.5μl2×GC Buffer I，0.5μl ALUSP-F1(5’-AGTTACTCTTCTGAAAGCAGGTTGG-3’)，0.5μl3′outer引物(5’-GCTGTCAACGATACGCTACGTAAC-3’)，4μldNTP，6.3μl ddH2O，1μl cDNA，0.2μl Taq酶；第一轮3′-RACE反应条件：95℃预变性，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，72℃修复延伸7min，总循环数33次。第二轮3′-RACE反应体系：25μl2×GC Buffer I，1μl ALUSP-F2(5’-ATACCGTTCCGTGGGAGTCAG-3’)，0.5μl3′inner引物(5’-GCTACGTAACGGCATGACAGTG-3’)，8μl dNTP，12.5μl ddH2O，1μl cDNA，0本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于编码绿盲蝽超气门蛋白的DNA序列，其碱基序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种绿盲蝽膜超气门蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.含有权利要求1所述的用于编码绿盲蝽超气门蛋白的DNA序列的重组表达载体、
转基因细胞系统或转基因重组菌。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，将权利要求1所述的DNA序
列插入到大肠杆菌表达载体中得到的表达绿盲蝽超气门蛋白的重组表达载体。
5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述大肠杆菌表达载体为
pEGX-6P-1。
6.根据权利要求5所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭永安，肖留斌，柏立新，孙洋，赵静，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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