提供了遗传修饰的非人动物和用于产生和使用它们的方法和组合物，其中所述遗传修饰包括内源低亲和力FcγR基因座的缺失，并且其中小鼠能够表达功能性FcRγ链。描述了遗传修饰的小鼠，包括从内源FcγR基因座表达低亲和力人FcγR基因的小鼠，并且其中所述小鼠包含功能性FcRγ链。提供了在宿主免疫系统的辅助细胞上表达至多5个低亲和力人FcγR基因的遗传修饰的小鼠。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利
是缺失内源鼠Fe YR基因的遗传修饰的非人动物，包括内源Fe YR基因被人Fe Y R基因替代的遗传修饰的动物，包括能够表达至少2、3、4或5种功能性人低亲和力Fe Y R基因的小鼠，以及包括包含不表达内源低亲和力Fe Y R基因的免疫细胞的遗传修饰的小鼠。背景Fe受体(FcR)是在哺乳动物的进行免疫系统的多种功能的免疫系统的细胞的表面上发现的蛋白质。FcR以多种类型存在于多种细胞上，并且介导多种免疫功能，例如结合附着至被感染的细胞或侵袭性病原体的抗体、刺激吞噬细胞或细胞毒性细胞以通过抗体介导的吞噬作用或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)破坏微生物或感染的细胞。 ADCC是这样的过程免疫系统的效应细胞裂解被抗体结合的靶细胞。该过程依赖于对外源抗原或细胞的先行接触，从而产生抗体应答。ADCC可通过效应细胞例如天然杀伤(NK)细胞，通过效应细胞表面上表达的FcR对本身结合至外源抗原或细胞的抗体的Fe部分的结合来介导。由于FcR在免疫应答中起着中心作用，因此需要有共表达多种人FcR的有用的非人动物，包括共表达多种人低亲和力FcR的非人动物。存在对用于研究和阐明人疾病治疗(特别是抗肿瘤治疗和用于治疗自身免疫疾病的治疗)和药物开发(特别是在人抗体药剂的开发、设计和测试中)的人FcR功能和人的ADCC过程的非人动物模型。附图概述图I是小鼠的野生型低未和力Fe Y R基因座的不意图，显不了小鼠Fe Y RIIB，Fe Y RIV和Fe Y RIII基因以及用于这些基因的靶向缺失的小鼠Fe Y R靶向载体，其包括侧翼连接有位点特异性重组位点的新霉素盒。图2显示了就B细胞(抗-⑶19)，NK细胞(抗_NKp46)和巨噬细胞(抗-F4/80)门控的脾细胞的直方图，包括野生型和低亲和力FcYRa链基因缺陷型小鼠(mFcYR K0)的内源mFc YRII和mFc YRIII基因的表达。图3A-3D显示了在人源化⑶20小鼠(h⑶20)和培育成Fe Y R敲除小鼠的人源化0)20小鼠(hQ)20/Fc Y R K0)中在几个淋巴细胞区室(lymphocyte compartment):骨髓(图3A)、血液(图3B)、淋巴结(图3C)和脾(图3D)中利用具有小鼠Fe (Ab 168)或人Fe (Ab735)的人抗-人CD20抗体对B细胞进行的体内耗尽。对于每一个图，y_轴显示门控的B细胞(B220+/IgM+或B220+/CD19+)的百分比，x_轴显示每一个动物组的抗体剂量10mg/kg对照抗体(C), 2mg/kg人抗-人0)20抗体(2Ab和10mg/kg人抗-人0)20抗体(IOAb)。图4是低亲和力小鼠Fe Y R基因座的新霉素靶向缺失和用于将两个人低亲和力Fe Y R基因插入缺失的小鼠基因座的第二靶向载体的示意性描述，所述第二靶向载体包括侧翼连接有位点特异性重组位点的潮霉素盒。为了在血小板上表达hFc Y RIIA,使用了可操作地连接于人Fe Y RIIIA-IIA靶向载体的hFc Y RIIA基因的延长的启动子区域；为了阻止在血小板上表达hFc Y RIIA，删除或实质上删除所述启动子区域。图5A显示针对NK细胞(抗-NKp46和巨噬细胞(抗-F4/80)的门控的脾细胞的直方图，包括野生型和人Fe Y RIIIA-IIA纯合子小鼠(人FcyRIIIA/FcyRIIA HO)的人FcyRIIIA的表达。图5B显示针对嗜中性粒细胞(抗_Ly6G)和巨噬细胞(抗-F4/80)的门控的脾细胞的直方图，包括野生型和人Fe Y RIIIA-IIA纯合子小鼠(人Fe yRIIIA/Fc YRIIA HO)的AFcyRIIA的表达。图6为包括两个低亲和力人Fe Y R基因(hFc Y RIIIA和hFc Y RIIA)的插入的低亲和力小鼠Fe Y R基因座的潮霉素靶向缺失以及用于插入3个额外的低亲和力人Fe Y R基因(hFc Y RIIB、hFc Y RIIIB和hFc y RIIC)的第三靶向载体和侧翼连接有位点特异性重组位点的新霉素盒的不意图。图7显示针对B细胞(抗-CD19)和嗜中性粒细胞(抗_Ly6G)的门控的脾细胞的直方图，包括野生型和人Fe Y RmA-IIlB-IIA-IIB-IIC纯合子小鼠(人Fe Y RIIIA/Fe Y RIIIB/Fc y RIIA/Fc y RIIB/Fc y RIIC HO)的人 Fe y RIIB 和人 Fe y RIIIB 的表达。 概述提供了遗传修饰的细胞、非人胚胎、非人动物以及用于产生和使用它们的方法和组合物。在不同的方面，非人动物包含人Fe Y R受体、内源低亲和力Fe Y R受体的缺失和/或人Fe Y R受体在内源小鼠低亲和力Fe Y R基因座上对内源Fe Y R受体的替代。在一个方面，提供了包含功能性FcR Y链的遗传修饰的细胞、非人胚胎和非人动物，其中所述细胞、胚胎和动物包含进一步修饰，包括用一个或多个低亲和力人Fe Y R基因序列(例如，选 S Fcy RIIA, Fe y RIIB、Fe y RIIC、Fe y RIIIA、Fe y RIIIB 及其组合)对低亲和力内源非人Fe Y R基因序列(例如，Fe Y RIIB、Fe Y RIV和FcyRIII)的替代。在一个实施方案中，细胞、非人胚胎和非人动物为鼠。在一个实施方案中，功能性FcRy链为小鼠FcRy链。在一个实施方案中，小鼠FcR Y链为对于小鼠、细胞或胚胎而言是内源性的FcR Y链。在一个实施方案中，细胞、胚胎和动物为小鼠，并且小鼠表达人低亲和力Fe YR受体的功能性α链和功能性内源小鼠Y链。在一个方面，提供了遗传修饰的小鼠，其中小鼠不表达选自Fe YRIIBa链、FcyRIVa链、FcYRIIIa链及其组合的内源α链；其中小鼠表达功能性内源小鼠Y链。在具体的实施方案中，小鼠不表达功能性Fe Y RIIB α链，不表达功能性FcyRIVa链，并且不表达功能性Fe Y RIII α链。在一个实施方案中，小鼠基因组包含内源FcYRIIBa链的缺失、内源Fe Y RIV a链的缺失和内源Fe Y RIII α链的缺失。在一个实施方案中，小鼠包括内源Fe YRIIBa链的缺失、内源Fe Y RIV α链的缺失和内源Fe YRIII α链的缺失，并且还包括与野生型小鼠对于相同抗原的能力相比较减小的对抗原产生免疫应答的能力。在一个实施方案中，减小的免疫应答包括减小的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。在一个实施方案中，减小的免疫应答包括在细胞杀伤测定中减小的实现抗体依赖性NK细胞杀伤的能力。在具体的实施方案中，ADCC或抗体依赖性NK细胞杀伤的减小为至少50%，在一个实施方案中是至少75%，在一个实施方案中是至少90%。在一个实施方案中，小鼠包含内源Fe Y RIIBa链的缺失、内源Fe Y RIV α链的缺失和内源Fe Y RIII α链的缺失，以及还包括在用抗原免疫后与野生型小鼠例如不包含缺失的相同或相似品系的小鼠相比较，增强的体液抗体应答。在一个实施方案中，增强的体液抗体应答为野生型小鼠的2倍。在一个实施方案中，增强的体液抗体应答为野生型小鼠的3倍。在一个实施方案中，增本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.12.21 US 61/288,5621.包含遗传修饰的小鼠，其中所述遗传修饰包括以置于内源小鼠低亲和力FeY R基因基因座上的至少两个低亲和力人Fe Y R基因替代内源低亲和力Fe Y R基因，并且其中所述小鼠包含功能性FcR Y链。2.权利要求I所述的小鼠，其中至少两个低亲和力人FeYR基因选自FcyRIIA、Fe Y RIIB、Fe Y RIIC、Fe y RIIIA 和 Fe y RIIIBo3.权利要求I所述的小鼠，其中至少两个低亲和力人FeY R基因为Fe Y RIIA和Fe Y RIIIAo4.权利要求3所述的小鼠，其中人FeY RIIIA在小鼠的NK细胞上表达。5.权利要求I所述的小鼠，其中所述至少两个低亲和力人FeY R基因为FcyRIIB、Fe Y RIIC 和 Fe Y RIIIBo6.权利要求3所述的小鼠，其中所述FeY RIIA和Fe Y RIIIA基因包含等位基因变体或多态性。7.权利要求5所述的小鼠，其中所述小鼠包含人低亲和力FeY R等位基因变体，并且所述等位基因变体选自(a)Fe Y RIIA等位基因变体131H，(b)Fe Y RIIIA等位基因变体158V，(c)Fc Y RIIB等位基因变体2321，(d)特征在于嗜中性粒细胞抗原2 (NA2)等位基因的Fe Y RIIIB等位基因变体，及(e)它们的组合。8.遗传修饰的小鼠，其中所述遗传修饰包括以编码人FeY RIIIA α -亚基的基因替代编码FcyRIIB、FcyRIII和Fe Y RIV α -亚基的内源小鼠基因，其中所述小鼠表达与内源小鼠FcR Y -亚基结合的人Fe Y RIIIA蛋白，其中人Fe Y RIIIA蛋白在小鼠NK细胞的表面上表达。9.权利要求8的遗传修饰的小鼠，其中小鼠NK细胞是小鼠血液中的循环NK细胞，并且在小鼠NK细胞表面上表达的Fe Y RIIIA蛋白结合包含人Fe或修饰的人Fe的免疫粘附素或抗体，其中免疫粘附素或抗体...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·麦克唐纳，涂纳新，C·古尔，S·史蒂文斯，A·J·墨菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：
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