用于检测登革感染的方法技术

公开了用于检测登革感染的方法。本发明专利技术涉及用于在患者血液样本中检测登革感染的方法，包括以下步骤：a）执行对样本中的血液血小板的预指定参数和血液细胞的预指定类型的分析并且确定用于血小板的预指定参数和细胞的预指定类型的参数值；b）从在步骤a）中确定的值获得样本参数；以及c）关于预指定准则来评价样本参数，其中，如果满足该准则，则存在登革感染。

Method for detection of dengue infection

【技术实现步骤摘要】
用于检测登革感染的方法本专利技术涉及用于在患者血液样本中检测登革感染的方法。登革感染，诸如例如由属于黄病毒科黄病毒属的四种不同的登革病毒血清型：DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4中的一种引起的登革热，是全世界每年数千万新感染的原因。根据来自世界卫生组织（WorldHealthOrganization，WHO）的数据，每年新感染的估计数范围在从50到100百万人。登革被认为在超过100个国家流行。几乎一半的世界人口有被感染的风险。如果未被治疗，则登革感染有可能变得致命。感染是蚊媒（mosquito-borne）的。传播引起登革的病毒的主要媒介是埃及伊蚊。病毒被通过有感染性的雌性伊蚊的叮咬而传递到人身上。蚊子在被感染人员的血液上取食时获取病毒。被感染的人是病毒的主要载体和增殖者，因为他们充当了针对未感染蚊子的病毒来源。典型地，当患者发烧时，病毒在被感染人员的血液中循环2至7天。在此时间期间，感染可能经由伊蚊传播到其他人。针对疟原虫感染的诊断存在许多可用的方法。根据美国疾病预防控制中心（CentersofDiseaseControlandPrevention,CDC）用于检测登革病毒的当前方法包括聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction,PCR）和实时（realtime，RT）-PCR（（RT）-PCR），虽然对于后者而言测定在商业上不可用。PCR基于病毒基因组序列为已知的原理进行操作。将来自患者的血清样本与将要选择用于病毒的已知序列的片段的引物进行组合。如果存在病毒，则DNA的该已知片段将被放大到可检测的水平。另一已知方法是ELISA测定，其涉及针对在感染后2至5天的血液血清中出现的NS1，IgG和/或IgM抗体的存在来测试来自患者的血清样本。然而，假阳性和与其它蚊媒病毒的交叉反应可能混淆结果。进一步地，另一方法是PRNT测定，该测定是基于特定病毒血清型由于特定抗体而变成去活从而其不再能够感染细胞培养物的原理的生物学测定。这是通过斑块存在上的减小来评估的。虽然存在WHO指南，但是截至目前，执行PRNT的方法不是标准的，导致结果上的变化性。当前不存在能够作为标准血液细胞计数测试的部分而被执行的登革检测方法。用于自动使用的所谓的自动化细胞计数器正在被越来越成功地采用。这样的计数器的示例是Advia2120、SysmexXE-2100并且还有CellaVisionDM96。这些自动化设备除了它们的高产出率之外还提供许多益处，诸如例如更高的客观性（没有依赖于观察者的变化性）、通常与手动计数（对高的细胞数量进行计数）关联的统计涨落的消除、还有在手动计数期间将不可获得的众多参数的确定以及如上面提到的更高效并且更成本有效的治疗。这些设备中的一些能够每小时处理120个和150个之间的患者样本。自动单细胞计数的技术原理或者基于阻抗测量，或者基于光学系统（散射光或者吸收测量）。在阻抗方法的情况下，细胞的计数并且还有其大小的确定是在对由移动通过小开口的颗粒引起的电导率（阻抗）上的变化的检测和测量的基础上完成的。例如诸如血液细胞的颗粒虽然其本身不导电，但是悬浮在导电的稀薄介质中。如果这样的细胞悬浮液通过开口，则在单个单独细胞的通过期间，位于开口的每一侧上的两个电极之间的电路径的阻抗暂时地增加。与阻抗方法相反，光学方法包括使激光光束经稀薄的血液样本通过，在连续的流中通过激光束来检测该稀薄的血液样本。经流通池的检测区域通过的每个细胞使聚焦光散射。散射的光然后由光电检测器检测并且被转换成电脉冲。在此生成的脉冲的数量与在特定的时间段内通过检测区域的细胞的数量直接成比例。在光学方法中，在不同的角度下测量通过检测区域的各单独的细胞的光散射。通过这样来检测与细胞结构、形状和反射能力有关的信息。这些特性能够被用于在不同类型的血液细胞之间进行区分并且将所得出的参数用于血液细胞与正常情况的偏离的诊断。通过这两种测量方法获得的值被借助于鉴别诊断逻辑地链接进有意义的诊断结果中。诊断方法的灵敏度和特异性在鉴别诊断的框架内起主要角色的作用，因此正不断地开展有关改善这些特性的工作。就黄金标准而言，PCR已经示出了具有近似80-90%的真阳性率（灵敏度）的正确地标识病毒的最高的成功。因此在提供具有高灵敏度和特异性的方法（即，用于检测登革感染的方法，其还识别像这样的生病患者并且另一方面能够将健康的患者识别为健康）方面，利用常规测试方法并未实现足够程度的成功。为了测试患者样本中登革病毒的存在，用于登革病毒的检测的当前可用的方法都要求特定的测定和血液血清的分离。因此本专利技术的目标是提供一种用于在血液样本中检测登革感染的方法，该方法产生具有更高灵敏度和特异性的测试结果。本专利技术的进一步的目标是提供一种用于登革感染的检测方法，该方法通过使用一些独立参数而允许无关于患者的其它感染或者不同的健康状态的针对登革的高特异性和灵敏度。本专利技术的又一目标是提供如下这样的方法：其能够借助于自动化血液分析设备来执行。该目标是通过具有在权利要求1中要求保护的特征的方法来创新地实现的。本专利技术创建了用于在患者血液样本中检测登革感染的方法，包括以下步骤：a)执行对样本中的血液血小板的预指定参数和血液细胞的预指定类型的分析并且确定用于血小板的预指定参数和细胞的预指定类型的参数值。b)从在步骤a）中确定的值获得样本参数；以及c)关于预指定准则来评价样本参数，其中，如果满足该准则，则存在登革感染。根据本专利技术作为规则而检查的患者血液样本涉及人类血液样本，然而还可能检查哺乳动物的血液样本。全血细胞计数（CompleteBloodCount，CBC）仪器通过计数存在于全血中的细胞的类型以及血液血小板来操作，因而不需要隔离血清以执行根据本专利技术的方法。用于检测登革感染的方法是基于特定类型的细胞和血小板的数量的升高或者降低的水平而执行的。因为一旦执行计数这些细胞和血小板的计数就立即可用，所以然后可以采用根据本专利技术的样本参数的自动化评价来检测登革病毒的存在，几乎没有额外的时间、成本或者费用。从在步骤a）中获得的测量结果获得样本参数并且关于先前限定的准则来评估样本参数，其中如果满足该准则，则存在登革感染。在尤其基于细胞体积参数、细胞数量参数和细胞密度参数以及血小板数量的本专利技术的情况中，如在此使用的术语“预指定准则”涉及在一个或多个样本参数的基础上建立的准则。在感染的血液样本和正常的血液样本的对应的值之间进行的比较的基础上确定准则，例如，针对本专利技术所基于的实验调查，执行许多登革感染的血液样本与许多正常的血液样本的对应的值的比较。在总共1585个患者中采用样本以确定预指定准则。在创新方法的优选的实施例中，用于在患者血液样本中检测登革感染的方法包括以下步骤：a)执行有效过氧化物酶细胞分析，包括确定被检测为经流路池从过氧化物酶通道（有效过氧化物酶细胞）通过的细胞的数量；b)执行红细胞分析，包括确定红细胞计数（RedBloodCount，RBC）；c)在样本中执行血小板分布分析，包括确定血小板分布、其标准差和其百分比平均值，以及通过将标准差除以百分比平均值来确定血小板分布宽度（PlateletDistributionWidth,PDW）。d)执行中性粒细胞簇分析，包括确定中性粒细胞簇在x本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于在患者血液样本中检测登革感染的方法，包括以下步骤：a) 执行对样本中的血液血小板的预指定参数和血液细胞的预指定类型的分析并且确定用于血小板的预指定参数和细胞的预指定类型的参数值；b) 从在步骤a）中确定的值获得样本参数；以及c) 关于预指定准则来评价样本参数，其中，如果满足该准则，则存在登革感染。

【技术特征摘要】
2018.03.09 EP 18160915.71.一种用于在患者血液样本中检测登革感染的方法，包括以下步骤：a)执行对样本中的血液血小板的预指定参数和血液细胞的预指定类型的分析并且确定用于血小板的预指定参数和细胞的预指定类型的参数值；b)从在步骤a）中确定的值获得样本参数；以及c)关于预指定准则来评价样本参数，其中，如果满足该准则，则存在登革感染。2.根据权利要求1所述的用于在患者血液样本中检测登革感染的方法，包括以下步骤：a)执行有效过氧化物酶细胞分析，包括确定被检测为经流路池从过氧化物酶通道（有效过氧化物酶细胞）通过的细胞的数量；b)执行红细胞分析，包括确定红细胞计数RBC；c)在样本中执行血小板分布分析，包括确定血小板分布、其标准差和其百分比平均值，以及通过将标准差除以百分比平均值来确定血小板分布宽度PDW；d)执行中性粒细胞簇分析，包括确定中性粒细胞簇在x轴上的定位平均值和确定中性粒细胞簇在y轴上的定位平均值；e)执行原始红细胞分析，包括确定在红细胞RBC通道上的原始红细胞计数；f)确定具有小于60fL的体积的红细胞RBC的百分比；g)从在步骤a)至步骤f）中确定的值获得样本参数；以及h)关于预指定准则来评价样本参数，其中，如果满足该准则，则存在登革感染。3.如权利要求2中要求保护的方法，其中在权利要求2的c）中确定的参数的更低值、和/或在权利要求的d）中确定的在y轴上的参数的更低值、和/或在权利要求2的f）中确定的参数的更高值是针对存在登革感染的预测。4.如权利要求2或权利要求3中的一个或多个中要求保护的方法，在权利要求2的a）中确定的参数值小于3723.5的细胞计数、以及在权利要求2的b）中确定的参数值大于每μL3.77389×106个细胞、以及在权利要求2的c）中确定的参数值小于64.1605的百分比是针对存在登革感染的预测，以及/或者在权利要求2的a）中确定的参数值大于3723.5的细胞计数、以及在权利要求2的d）中确定的在x轴上的参数值如果标度为0到99则小于63.8149、以及在权利要求2的e）中确定的参数值小于75的细胞计数、以及在权利要求2的b）中确定的参数值大于每μL3.94312×106个细胞、以及在权利要求2的d）中确定的在y轴上的参数值如果标度为0到99则小于78.6959是针对存在登革感染的预测，以及/或者在权利要求2的a）中确定的参数值大于3723.5的细胞计数、以及在权利要求2的d）中确定的在x轴上的参数值如果标度为0到99则大于6...

【专利技术属性】
技术研发人员：K奥多诺格，R索博列夫斯基，
申请(专利权)人：西门子医疗保健诊断公司，
类型：发明
国别省市：美国,US