一种血清β-羟丁酸试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术提供一种血清β-羟丁酸试剂盒及其检测方法，血清β-羟丁酸试剂盒，它包括R1与R2试剂，R1试剂包含如下组分：磷酸钾缓冲液100～150mmol/L，PH7～8；辅酶2～5mmol/L；黄递酶2～5KU/L；氯化硝基四氮唑兰0.5～1mmol/L；BSA0.5～1g/L；海藻糖2～5g/L；R2试剂包含如下组分：酸钾缓冲液100～150mmol/L，PH7～8；β-羟丁酸脱氢酶20～50KU/L；BSA2～5g/L。本发明专利技术的试剂盒采用氯化硝基四氮唑兰作为显色剂，具有稳定性好，线性高，抗干扰能力强和成本低的特点；本发明专利技术的血清β-羟丁酸检测方法，能有效提高减少非特异性还原物质的干扰，消除标准液的基质效应和脂浊现象，具有广泛的市场前景。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供，血清β-羟丁酸试剂盒，它包括R1与R2试剂，R1试剂包含如下组分：磷酸钾缓冲液100～150mmol/L，PH7～8；辅酶2～5mmol/L；黄递酶2～5KU/L；氯化硝基四氮唑兰0.5～1mmol/L；BSA0.5～1g/L；海藻糖2～5g/L；R2试剂包含如下组分：酸钾缓冲液100～150mmol/L，PH7～8；β-羟丁酸脱氢酶20～50KU/L；BSA2～5g/L。本专利技术的试剂盒采用氯化硝基四氮唑兰作为显色剂，具有稳定性好，线性高，抗干扰能力强和成本低的特点；本专利技术的血清β-羟丁酸检测方法，能有效提高减少非特异性还原物质的干扰，消除标准液的基质效应和脂浊现象，具有广泛的市场前景。【专利说明】
本专利技术涉及一种血清β-羟丁酸的试剂盒及其检测方法，具体的说是一种酶比色法检测血清β -羟丁酸的方法。
技术介绍
肝脏生成酮体，肝外组织能利用酮体作为能量来源，在正常情况下血中仅含少量酮体；但在某些情况下，如饥饿、糖尿病、高脂低糖膳食等由于脂肪动员增强，肝脏生成酮体量超过肝外组织利用酮体的能力，引起血中酮体的堆积，可导致酮症酸中毒，特别在糖尿病病人中酮症酸中毒非常常见。对酮症酸中毒的诊断与疗效观察常需测定血液中酮体的浓度，酮体是脂肪酸分解代谢的产物，包括三种成分:β_羟丁酸、乙酰乙酸和丙酮，其中β_羟丁酸是主要的成分，约占酮体总量的70%，因此一般以检测血清β -羟丁酸的浓度反映体内酮体的水平。血清β -羟丁酸检测方法有气相色谱法、分光光度法和酶法，酶法测定血清β -羟丁酸因具有准确、简便、快速、灵敏和特异的特点，受到临床的重视。现有常用β_羟丁酸试剂盒所用的显色剂均为ΙΝΤ，即:碘硝基氯化四氮唑蓝；使用INT作为显色剂存在抗干扰效果不好的特点，因此，如何改进现有技术的缺点与不足，为广大患者造福，是亟待解决的技术难题。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种血清β_羟丁酸试剂盒及其检测方法，采用氯化硝基四氮唑兰作为显色剂，具有稳定性好，线性高，抗干扰能力强和成本低的特点；同时检测方法解决了基质效应问题，有效提高了检测的准确度。为解决上述技术问题，本专利技术所采取的技术方案是，提供一种血清β_羟丁酸试剂盒，它包括Rl与R2试剂，所述Rl试剂包含如下组分: 磷酸钾缓冲液，100?150 mmol/L, PH7?8 ; 辅酶，2 ?5mmol/L ； 黄递酶，2?5KU/L ； 氯化硝基四氮唑兰，0.5?lmmol/L ； BSA,0.5 ?lg/L ； 海藻糖，2?5g/L ； 所述R2试剂包含如下组分: 磷酸钾缓冲液，100?150 mmol/L, PH7?8 ; β -羟丁酸脱氢酶，20?50KU/L ； BSA,2 ?5g/L。上述的血清β -羟丁酸试剂盒的检测方法，包括如下步骤: 第一步，预备: 提供标准液、血清β -羟丁酸测定试剂盒Rl与R2试剂以及待测标本；其中，标准液采用健康人血清为基质； 第二步，初步混匀: 取6ul待测标本和Rl试剂240?280ul混匀，置30_45°C孵育3?5分钟； 第三步，二次混匀: 取R2试剂40?70ul与上述混合液混匀，孵育180?240秒后，空白管调零，读取吸光度Al，90秒后读吸光度A2，其中，测区吸光度的主波长500?600nm，副波长650?750nm ；第四步，计算: 根据如下公式计算得出血清羟丁酸浓度: 血清β -羟丁酸(mmol/L) = ΔΑ测定X标准浓度/ Λ A标准。上述的血清β -羟丁酸试剂盒的检测方法,第一步,预备: 血清β -羟丁酸测定试剂盒Rl与R2试剂与待测标本的比例为:40?50: 8?12:1o上述的血清β -羟丁酸试剂盒的检测方法,第一步,预备: 标准液采用健康人血清为基质，所述标准液的制备方法为: 用健康人血清混合，反复冻融数次至上层澄清，取澄清的上层液经0.15um?0.30um滤膜的过滤器过滤后，添加0.05%?0.lwt%生物防腐剂，混匀，待用。用做标准液的基质，经二级或一级参考品和参考测量方法量值溯源定值。本专利技术具有如下优点及有益技术效果: 本专利技术的血清β-羟丁酸试剂盒设计成双试剂，Rl内含β-羟丁酸进行反应的主要成分，采用磷酸钾缓冲液，ΡΗ7?8，此PH下有利于氯化硝基四氮唑兰和其他反应物的稳定和保存。R2的ΡΗ7?8有利于酶的稳定也为反应提供适宜的环境。本专利技术的血清β-羟丁酸试剂盒检测血清β-羟丁酸的检测方法，能有效提高减少非特异性还原物质的干扰，消除标准液的基质效应和脂浊现象，解决氯化硝基四氮唑兰在贮存中的析出问题，具有广泛的市场前景。本专利技术的血清β -羟丁酸试剂盒检测血清β -羟丁酸的检测方法还提供了一种人血清基质标准液的制备方法，解决了基质效应问题，提闻检测的准确度。【具体实施方式】实施例1 本实施例的血清β -羟丁酸试剂盒，它包括Rl与R2试剂，Rl和R2均以水为溶剂。Rl试剂包含如下组分: 磷酸钾缓冲液，150 mmol/L，PH7-8 ； 辅酶，5mmol/L ； 黄递酶，5KU/L ； 氯化硝基四氮唑兰，lmmol/L ； BSA，lg/L ； 海藻糖，5g/L ； R2试剂包含如下组分: 磷酸钾缓冲液，150mmol/L，PH7-8 ； β -轻丁酸脱氢酶，50KU/L ； BSA,5g/L。本实施例的血清β -羟丁酸试剂盒的检测方法，包括如下步骤: 第一步，预备: 提供标准液、血清羟丁酸测定试剂盒Rl与R2试剂以及待测标本；血清β-羟丁酸测定试剂盒Rl与R2试剂与待测标本的比例为:40: 8:1。其中，标准液采用健康人血清为基质；所述标准液的制备方法为: 用健康人血清混合，反复冻融数次至上层澄清，取澄清的上层液经0.15um滤膜的过滤器过滤后，添加0.05%生物防腐剂，混匀，待用。用做标准液的基质，经二级或一级参考品和参考测量方法量值溯源定值。第二步，初步混匀: 取6ul待测标本和Rl试剂240ul混匀，置30_45°C孵育3分钟； 第三步，二次混匀: 取R2试剂60ul与上述混合液混匀，孵育210秒后，空白管调零，读取吸光度Al，90秒后读吸光度A2，其中，测区吸光度的主波长540nm，副波长700nm;AA= A2- Al。第四步，计算: 根据如下公式计算得出血清羟丁酸浓度: 血清β -羟丁酸(mmol/L) = ΔΑ测定X标准浓度/ Λ A标准。实施例2 本实施例的血清β -羟丁酸试剂盒，它包括Rl与R2试剂，Rl和R2均以水为溶剂。Rl试剂包含如下组分: 磷酸钾缓冲液，IOOmmo I/L，ΡΗ7-8 ； 辅酶，2mmol/L ； 黄递酶，2KU/L ； 氯化硝基四氮唑兰，0.5mmol/L ； BSA,0.5g/L ； 海藻糖，2g/L ； R2试剂包含如下组分: 磷酸钾缓冲液，IOOmmo I/L，PH7-8 ； β -羟丁酸脱氢酶，20KU/L ； BSA,2g/L。本实施例的血清β -羟丁酸试剂盒的检测方法，包括如下步骤: 第一步，预备: 提供标准液、血清羟丁酸测定试剂盒Rl与R2试剂以及待测标本；血清β-羟丁酸测定试剂盒Rl与R2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血清β?羟丁酸试剂盒，它包括R1与R2试剂，其特征在于：所述R1试剂包含如下组分：磷酸钾缓冲液，???????????????100～150?mmol/L，PH7～8；辅酶，???????????????????????2～5mmol/L；黄递酶，?????????????????????2～5KU/L；氯化硝基四氮唑兰，???????????0.5～1mmol/L；BSA，????????????????????????0.5～1g/L；海藻糖，?????????????????????2～5g/L；所述R2试剂包含如下组分：磷酸钾缓冲液，???????????????100～150mmol/L，PH7～8；β?羟丁酸脱氢酶，????????????20～50KU/L；BSA，????????????????????????2～5g/L。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李涛，温云飞，牛庆慧，
申请(专利权)人：青岛贝美生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：