哺乳动物细胞因子:白介素-B30和相关试剂制造技术

提供了编码哺乳动物细胞因子的纯化基因、与其相关的试剂，包括纯化的蛋白、特异性抗体和编码该分子的核酸。也提供了使用所述试剂的方法和诊断试剂盒。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在控制哺乳动物细胞(例如哺乳动物免疫系统细胞)生物学和生理学中起作用的蛋白质相关的组合物。具体地说，提供纯化的基因、蛋白质、抗体和相关的有用试剂，例如用以调节各种细胞类型(包括造血细胞)的活化、发育、分化和功能。
技术介绍
重组DNA技术一般是指这些技术，所述技术通过将来自供体源的遗传信息整合到载体中用于后续加工，诸如通过引入到宿主中，由此使所转移的遗传信息在该新环境中复制和/或表达。通常，该遗传信息以互补DNA(cDNA)的形式存在，所述互补DNA衍生自编码所需蛋白产物的信使RNA(mRNA)。该载体通常是一种质粒，该质粒具有将用于随后复制的cDNA加入宿主中的能力，在某些情况下，实际控制该cDNA的表达，并由此指导所编码的产物在该宿主中合成。一段时间以来，已经知道哺乳动物的免疫应答基于称为“免疫网络”的一系列复杂的细胞相互作用。最近的研究已经提供了对该网络内部运作的新的了解。尽管已经清楚许多免疫应答实际上确实围绕淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞和其它细胞的网络样相互作用运转，但免疫学家现在一般坚持这样一种观点称为淋巴因子、细胞因子或单核因子的可溶性蛋白，在控制这些细胞相互作用中起关键作用。因此，人们对细胞调节因子的分离、特征鉴定和作用机制相当感兴趣，对这些信息的了解将导致在许多医学异常(例如免疫系统失调)的诊断和治疗方面取得相当大的进展。这些因子中的某些因子是造血生长因子，例如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。参见例如Thomson(1994编辑)TheCvtokine Handbook(第2版)Academic Press，San Diego；Metcalf和Nicola(1995)The Hematopoietic Colony Stimulating Factors CambridgeUniversity Press；和Aggarwal和Gutterman(1991)Human CytokinesBlackwell Pub。淋巴因子显然以多种方式介导细胞活性。已经表明，它们支持多能造血干细胞的增殖、生长并分化为大量的祖细胞(progenitor)，所述祖细胞包括构成复杂的免疫系统的多样化的细胞谱系。细胞组分之间适当和平衡的相互作用是健康的免疫应答所必需的。当结合其它因子给予淋巴因子时，不同的细胞谱系常常以不同方式应答。对免疫应答尤其重要的细胞谱系包括两类淋巴细胞B细胞，它们可以产生和分泌免疫球蛋白(具有识别并结合外源物质以实现将其去除的能力的蛋白)；和各种亚群的T细胞，它们分泌淋巴因子，并诱导或抑制B细胞和构成免疫网络的各种其它细胞(包括其它T细胞)。这些淋巴细胞与许多其它细胞类型相互作用。另一种重要的细胞谱系是肥大细胞(在所有哺乳动物物种中尚未被明确鉴定)，这是一种含颗粒的结缔组织细胞，邻近遍布机体的毛细血管定位。发现这些细胞在肺、皮肤以及胃肠道和生殖泌尿道中的浓度尤其高。肥大细胞如下在变态反应相关的病症(特别是过敏反应)中起中心作用当选定的抗原与结合于肥大细胞表面上受体的一类免疫球蛋白交联时，该肥大细胞脱颗粒并释放引起变态反应(例如过敏反应)的介质，例如组胺、5-羟色胺、肝素和前列腺素。一般不能在体外维持免疫系统的细胞，这已经阻碍了为更好地了解和治疗各种免疫失调而进行的研究。免疫学家已经发现，通过使用T细胞和其它细胞的上清液，可以完成对这些细胞的培养，所述上清液含有各种生长因子，包括许多淋巴因子。根据以上所述，可明显看出，新的淋巴因子(例如与G-CSF和/或IL-6相关的淋巴因子)的发现和研制，应该有助于用于范围广泛的直接或间接涉及免疫系统和/或造血细胞的退行性病症或异常病症的新疗法。特别是，对于增加或增强已知淋巴因子有益活性的淋巴因子的发现和研制应该是非常有利。本专利技术提供新的白介素组合物和相关的化合物以及它们的使用方法。专利技术概述本专利技术涉及哺乳动物(例如啮齿动物、犬科动物、猫科动物、灵长类动物)的白介素-B30(IL-B30)及其生物活性。它包括编码多肽本身的核酸和它们的生产和使用方法。根据与本文包含的所克隆的互补DNA(cDNA)序列的同源性和/或应用于通常由这些核酸编码的多肽例如G-CSF(参见Nagata(1994)载于Thomson The Cvtokine Handbook第2版，Academic Press，San Diego)和/或IL-6(参见Hirano(1994)载于ThomsonThe Cvtokine Handbook第2版，Academic Press，San Diego)的生长因子样活性或细胞因子样活性的功能测定，部分特征鉴定出本专利技术的核酸。提供调节或干扰依赖于生长因子的生理学或免疫应答的控制的方法。本专利技术部分基于一种新细胞因子序列的发现，所述新细胞因子序列表现出与G-CSF和IL-6显著的序列和结构相似性。具体地说，它提供灵长类动物(例如人类)其编码的蛋白质成熟大小约168个氨基酸的基因以及猪和鼠类(例如小鼠)的序列。表现出显著序列同源性的功能相当物可得自其它哺乳动物，例如乳牛、马和大鼠以及非哺乳动物物种。在各种蛋白质实施方案中，本专利技术提供大致纯的或重组的IL-B30蛋白或肽，它在至少约12个氨基酸的长度内，表现出与SEQ ID NO2的序列同一性至少约85％；SEQ ID NO2的天然序列IL-B30；和包含IL-B30序列的融合蛋白。在某些实施方案中，所述同源性为至少约90％的同一性，而所述部分至少约9个氨基酸；所述同源性为至少约80％的同一性，而所述部分至少约17个氨基酸；或所述同源性为至少约70％的同一性，而所述部分至少约25个氨基酸。在其它实施方案中，所述IL-B30包含表1的成熟序列；或表现出与天然IL-B30不同的翻译后修饰模式；或所述蛋白或肽来自选自哺乳动物(包括灵长类动物)的温血动物包含SEQ ID NO2的至少一个多肽区段；表现出多个部分表现出同一性；为IL-B30的天然等位基因变异体；其长度至少约30个氨基酸；表现出至少两个非重叠表位为哺乳动物IL-B30特异性的；在至少约20个氨基酸的长度内，表现出与哺乳动物IL-B30的序列同一性至少约90％；为糖基化的；其天然糖基化的分子量至少约10kD；为合成多肽；连接至固体基质上；缀合于另一化学部分；为对天然序列进行5重或5重以下的置换；或为天然序列的缺失或插入变异体。优选实施方案包括的组合物包含无菌IL-B30蛋白或肽；或所述IL-B30蛋白或肽和一种载体，其中所述载体为水性化合物，包括水、盐水和/或缓冲液；和/或配制用于经口、直肠、鼻、局部或胃肠外给药。在融合蛋白实施方案中，所述蛋白可以具有表1的成熟蛋白序列；一种检测或纯化标记，包括FLAG、His6或Ig序列；和/或另一细胞因子或趋化因子的序列。试剂盒实施方案包括的试剂盒具有IL-B30蛋白或多肽，和包含所述蛋白或多肽的区室；和/或使用或处理该试剂盒中试剂的说明。在结合化合物实施方案中，所述化合物可以具有来自特异性地结合于天然IL-B30蛋白的抗体的抗原结合位点，其中所述IL-B30为哺乳动物蛋白；所述结合化合物为Fv、Fab或Fab2片段；所述结合化合物与另一化学部分缀合；或所述抗体针对表1成熟多肽的肽序列而产本文档来自技高网...

【技术保护点】
编码抗原多肽的分离的或重组的多核苷酸，包含：ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２的成熟编码部分的至少１７个连续氨基酸；ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：４的成熟编码部分的至少１７个连续氨基酸；ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５的成熟编码部分的至少１７个连续氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：JF巴赞，
申请(专利权)人：先灵公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]