哺乳动物细胞因子、相关试剂和方法技术

提供得自哺乳动物的编码细胞因子的纯化基因、包括纯化蛋白质在内的其相关试剂、特异性抗体和编码该分子的核酸。也提供使用所述试剂的方法和诊断试剂盒。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及与在控制哺乳动物细胞(例如哺乳动物免疫系统的细 胞)生物学和生理学方面起作用的蛋白质相关的组合物以及方法。具体 而言，本专利技术提供可用于例如调节各种细胞类型(包括造血细胞)的活 化、发育、分化和功能的純化基因、蛋白质、抗体、相关试剂和方法。
技术介绍
重组DNA技术一般是指这样的技术，所述技术通过将得自供体 源的遗传信息整合到载体中用于后续加工，诸如通过引入到宿主中， 由此使所转移的遗传信息在该新环境中复制和/或表达。通常，该遗传 信息以互补DNA (cDNA)的形式存在，所述互补DNA衍生自编码所需 蛋白产物的信使RNA(mRNA)。该载体通常是一种质粒，该质粒具有 将用于随后复制的cDNA加入宿主中的能力，在某些情况下，实际有 能力控制该cDNA的表达，并由此指导在该宿主中合成所编码的产物。一段时间以来，已经知道哺乳动物的免疫应答基于称为"免疫网 络"的一系列复杂的细胞相互作用。参见例如Paul. (1998) Fundamental Immunology (第4版)Raven Press, NY。最近的研究已经提供了对该网 络内部运作的新的了解。尽管已经清楚许多免疫应答实际上确实围绕 淋巴细胞、巨噔细胞、粒细胞和其它细胞的网络样相互作用运转，但 免疫学家现在一般坚持这样一种观点称为淋巴因子、细胞因子或单 核因子的可溶性蛋白，在控制这些细胞相互作用中起关键作用。因此， 人们对细胞调节因子的分离、特征鉴定和作用机制相当感兴趣，对这些信息的了解将导致在许多医学异常(例如免疫系统失调)的诊断和治 疗方面取得相当大的进展。这些因子中的某些因子是造血生长因子，例如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。参见例如Thomson (1998编辑)The Cytokine Handbook (第3版)Academic Press, San Diego; Mire-Sluis和 Thorpe, (1998编辑)Cytokines Academic Press, San Diego; Metcalf和 Nicola (1995) The Hematopoietic Colony Stimulating Factors Cambridge University Press;和Aggarwal和Gutterman (1991) Human Cytokines Blackwell Pub。免疫系统细胞的细胞因子表达，在免疫应答的调节中 起重要作用。大多数细胞因子是多效的，具有多种生物活性，包括抗 原呈递、活化、CD4+T细胞亚群的增殖和分化、B细胞的抗体应答和 过敏表现。另外，细胞因子可以用于范围广泛的直接或间接涉及免疫 系统和/或造血细胞的退行性病症或异常病症的诊断和治疗。淋巴因子显然以多种方式介导细胞活性。已经表明，它们支持多 能造血干细胞的增殖、生长和/或分化为大量的祖细胞(progenitor),所 述祖细胞包括构成复杂的免疫系统的多样化的细胞谱系。所述细胞组 分之间正常和平衡的相互作用是健康的免疫应答所必需的。当连同其 它因子一起给予淋巴因子时，不同的细胞谱系常常以不同方式应答。对免疫应答尤为重要的细胞谱系包括两类淋巴细胞B细胞，它 们可以产生和分泌免疫球蛋白(具有识别并结合外源物质以实现将其 去除的能力的蛋白质)；和各种亚群的T细胞，它们分泌淋巴因子，并这些淋巴细胞与许多其它细胞类型相互作用。根据以上所述，可明显看出，新的淋巴因子(例如与G-CSF和/或 IL-6相关的淋巴因子)的发现和研制，可能有助于用于范围广泛的直接 或间接涉及免疫系统和/或造血细胞的退行性病症或异常病症的新疗 法。特别是，对于增加或增强已知淋巴因于有益活性的淋巴因子的发 现和研制应该是非常有利。最初，新基因IL-B30根据其预测的结构被 鉴定为潜在的细胞因子，并且^皮分为象IL-6和G-CSF —样的长链细胞因子(国际专利申请PCT/US98/15423 (WO 99/05280)。 IL-6和相关细胞 因子如制癌蛋白M、白血病抑制因子(LIF)、睫状神经营养因子(CNTF) 和cardiothr叩hin-l对血细胞生成、血小板生成、急性期应答的诱导、 破骨细胞生成、神经元分化和存活以及心肥大具有生物活性。IL-B30 在小鼠中的转基因表达诱导出与IL-6在小鼠中过量表达后观察到的相 似表型，包括发育不良、系统性炎症、不育症和死亡。IL-B30看来是 一种参与炎症的新细胞因子。专利技术概述本专利技术部分基于IL-B30 (在本文中也称为IL-B30蛋白)的生理学 作用及其在免疫应答中作用的发现。特别是，已经阐明了 IL-B30在涉 及炎症、传染病、血细胞发育(hematopoietic development)和病毒感染的 途径中的作用。本专利技术具体涉及包含IL-12 p40亚基与白介素-B30 (EL-B30)组合的组合物及其生物活性。本专利技术包括编码两种多肽或融合 蛋白的核酸、其生产方法和应用。部分根据本专利技术的核酸与本文所公 开的互补DNA (cDNA)序列的同源性和/或根据功能分析，鉴定了本发 明的核酸。也提供多肽、抗体和使用它们的方法，包括使用核酸表达 法。提供对依赖生长因子生理学或免疫应答的控制进行调节或干涉的 方法。本专利技术部分基于这样一种发现先前例如在USSN 08/900,905和 09/122,443中描述的天然形式的IL-12的p40亚基也与IL-B30细胞因 子相关。因此，这两种多肽一起共表达，导致功能性受体结合和信号。本专利技术提供多种组合物，所述组合物包含a) —种大致纯的包含 得自IL-12 p40的多个至少7个连续氨基酸的不同区段的多肽和一种大 致纯的包含得自IL-B30的多个至少7个连续氨基酸的不同区段的多 肽；b) —种大致纯的包含得自IL-12p40的至少11个连续氨基酸的多 肽和一种大致纯的包含得自IL-B30的至少11个连续氛基酸的多肽； c) 一种大致纯的多肽，所述多肽包含IL-12 p40的多个至少7个连续氛基酸的不同区段和IL-B30的多个至少7个连续氨基酸的不同区段； 或d) —种大致纯的多肽，所述多肽包含IL-12p40的一个至少11个连 续氨基酸的区段和IL-B30的一个至少11个连续氨基酸的区段。各种 实施方案包括这样的组合物a)其中所述多个至少7个连续氨基酸的 不同区段包括一个至少9个连续氨基酸的区段；b)其中所述多个至少 7个连续氨基酸的不同区段是两个至少9个连续氩基酸的区段；c)其 中所述IL-12 p40的至少11个连续氨基酸的区段至少有15个连续氨基 酸；d)其中所述IL-B30的至少11个连续氨基酸的区段至少有15个 连续氨基酸；e)还包含一种选自水性化合物的载体，包括水、盐水和 /或緩冲液；f)配制用于经口、直肠、鼻、局部或胃肠外给药；或g)所 述组合物是无菌组合物。其它实施方案包括那些组合物a)其中所述 多肽中的至少一种i)是可检测标记的；ii)是重组产生的；iii)未经 糖基化；iv)是变性的；v)连接于固体基质；或vi)与另一化学部分 缀合；b)包含一种大致纯的IL-12 p40多肽和一种大致纯的IL-B30多 肽；c)包含一种大致纯的含与IL-B30融合的IL本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体或其抗原结合片段，其特异性结合ａ）ＩＬ－１２　ｐ４０的成熟片段和ｂ）ＩＬ－Ｂ３０的成熟片段的复合物，但不与单独的ＩＬ－１２　ｐ４０多肽或ＩＬ－Ｂ３０多肽结合。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：B奥普曼，R德瓦尔马莱菲特，DM伦尼克，RA卡斯特莱恩，MT维科夫斯基，SA利拉，SK纳鲁拉，
申请(专利权)人：先灵公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]