具有人源化程序性细胞死亡1基因的非人动物制造技术

本发明专利技术提供了非人动物以及用于制备所述非人动物的组合物和方法，其中所述非人动物包含人源化的程序性细胞死亡1(Pdcd1)基因。在一些实施方案中，所述非人动物可被描述为具有对内源Pdcd1基因的遗传修饰，使得所述非人动物表达包含人部分和内源部分(例如非人部分)的PD‑1多肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关专利申请的交叉引用本申请要求2014年6月19日提交的美国临时申请No.62/014,181、2014年12月2日提交的No.62/086,518的权益和2015年3月25提交的No.62/138,221的优先权权益，这些申请的全部内容以引用方式并入本文中。序列表以引用方式并入序列表为2015年6月4日创建的名称为31969_SEQ.txt、大小为23KB的ASCII文本文件，其经由EFS-Web提交给美国专利及商标局，并且以引用方式并入本文中。
技术介绍
尽管医学研究和开发的重点一直致力于癌症免疫疗法并且已获得重大改进，但癌症仍然是全球卫生保健行业中的一个重大挑战。这一重大挑战部分是由于癌细胞能够避开免疫系统的监测机制，这在一定程度上导致抗肿瘤免疫性的抑制和/或下调。仍然缺乏对这样的体内系统的开发，所述体内系统用于任选地确定被设计来激活和/或促进抗肿瘤免疫性的新癌症疗法的治疗潜力以及确定癌细胞如何向免疫细胞(例如T细胞)提供抑制信号的分子层面。此类系统提供用于评估促进体内抗肿瘤环境的候选药剂的治疗功效的测定源。
技术实现思路
本专利技术涵盖以下认知，即，期望对非人动物进行工程化以允许改进的系统，所述改进的系统用于鉴定和开发可用于治疗癌症的新治疗剂。本专利技术还涵盖以下认知，即，期望对非人动物进行工程化以允许改进的系统，所述改进的系统用于鉴定和开发可用于治疗自体免疫(或炎性)疾病、障碍或病症的新治疗剂。另外，本专利技术还涵盖以下认知，即，期望将具有人源化Pdcd1基因和/或以其他方式表达、包含或产生人或人源化PD-1多肽的非人动物例如用于鉴定和开发上调抗肿瘤免疫性的癌症治疗剂。在一些实施方案中，本专利技术的非人动物提供改进的体内系统，所述改进的体内系统用于鉴定和开发包括靶向PD-1的联合疗法。在一些实施方案中，本专利技术提供具有包含Pdcd1基因的基因组的非人动物，所述Pdcd1基因包含来自两种不同物种(例如人和非人)的遗传物质。在一些实施方案中，如本文所述的非人动物的Pdcd1基因编码包含人和非人部分的PD-1多肽，其中所述人和非人部分连接在一起并且形成功能性PD-1多肽。在一些实施方案中，如本文所述的非人动物的Pdcd1基因编码PD-1多肽，所述PD-1多肽包含人PD-1多肽的全部或部分的胞外结构域。在一些实施方案中，本专利技术提供表达PD-1多肽的非人动物，所述PD-1多肽包含人部分和内源部分。在一些实施方案中，本专利技术的PD-1多肽在非人动物的细胞中由非人信号肽翻译；在某些实施方案中，由啮齿动物信号肽翻译。在一些实施方案中，内源部分包含内源PD-1多肽的胞内部分。在一些实施方案中，内源部分还包含内源PD-1多肽的跨膜部分。在一些实施方案中，内源部分具有与图8中呈现的小鼠PD-1多肽的相应氨基酸序列至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，内源部分具有与图8中呈现的小鼠PD-1多肽的相应氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，内源部分具有与图8中呈现的小鼠PD-1多肽的相应氨基酸序列相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，人部分包含人PD-1多肽的氨基酸35-145、27-145、27-169、26-169或21-170。在一些实施方案中，人部分包含与图8中呈现的人PD-1多肽的相应氨基酸序列至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，人部分包含与图8中呈现的人PD-1多肽的相应氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，人部分包含与图8中呈现的人PD-1多肽的相应氨基酸序列相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，包含人部分和内源部分的PD-1多肽由内源Pdcd1基因编码。在某些实施方案中，内源Pdcd1基因包含内源Pdcd1外显子1、4和5。在某些实施方案中，内源Pdcd1基因还包含全部或部分的内源Pdcd1外显子3。在某些实施方案中，内源Pdcd1基因包含SEQIDNO:21。在某些实施方案中，内源Pdcd1基因包含SEQIDNO:22。在某些实施方案中，内源Pdcd1基因包含SEQIDNO:21和SEQIDNO:22。在一些实施方案中，如本文所述的非人动物所表达的PD-1多肽具有与SEQIDNO:6至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，如本文所述的非人动物所表达的PD-1多肽具有与SEQIDNO:6基本上相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，如本文所述的非人动物所表达的PD-1多肽具有与SEQIDNO:6相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本专利技术提供包含非人Pdcd1基因的一个或多个外显子的人源化Pdcd1基因座，所述非人Pdcd1基因的一个或多个外显子有效连接至人Pdcd1基因的全部或部分的一个或多个外显子。在一些实施方案中，人源化Pdcd1基因座还包含侧接人Pdcd1基因的一个或多个外显子的5’和3’非人Pdcd1非翻译区(UTR)。在一些实施方案中，人源化Pdcd1基因座受啮齿动物启动子控制；在某些实施方案中，受内源啮齿动物启动子控制。在一些实施方案中，人源化Pdcd1基因座包含非人Pdcd1外显子1、3、4和5，所述非人Pdcd1外显子1、3、4和5有效连接至人Pdcd1外显子2。在一些实施方案中，人源化Pdcd1基因座包含非人Pdcd1外显子1、4和5、人Pdcd1外显子2并且还包含Pdcd1外显子3，所述Pdcd1外显子3包含人部分和非人部分，并且其中所述非人和人外显子有效连接。在一些实施方案中，Pdcd1外显子3的人部分包含核苷酸编码PD-1柄序列。在一些实施方案中，Pdcd1外显子3的人部分包含约71bp的人Pdcd1外显子3。在一些实施方案中，Pdcd1外显子3的非人部分包含编码跨膜序列的核苷酸。在一些实施方案中，Pdcd1外显子3的非人部分包含约91bp的啮齿动物Pdcd1外显子3。在一些实施方案中，本专利技术提供非人动物包含含有内源部分和人部分的Pdcd1基因，其中所述内源部分和人部分有效连接至啮齿动物Pdcd1启动子。在一些实施方案中，啮齿动物Pdcd1启动子为内源啮齿动物Pdcd1启动子。在一些实施方案中，内源部分包含内源Pdcd1外显子1、4和5。在一些实施方案中，内源部分还包含全部或部分的内源Pdcd1外显子3。在一些实施方案中，内源Pdcd1基因的外显子1、全部或部分的外显子3、外显子4和5与图8中呈现的内源Pdcd1基因的相应外显子1、全部或部分的相应外显子3、相应外显子4和5至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同。在一些实施方案中，内源Pdcd1基因的外显子1、全部或部分的外显子3、外显子4和5与图8中呈现的内源Pdcd1基因的相应外显子1、全部或部分的相应外显子3、相应外显子4和5基本上相同。在一些实施方案中，内源Pdcd1基因的外显子1、全部或部分的外显子3、外显子4和5与图8中呈现的内源Pdcd1基因的相应外显子1、全部或部分的相应外显子3、相应外显子4和5相同。在一些实施方案中，人部分编码人PD-1多肽的氨基酸21-17本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达PD‑1多肽的啮齿动物，所述PD‑1多肽包含人部分和内源部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.19 US 62/014,181;2014.12.02 US 62/086,518;1.一种表达PD-1多肽的啮齿动物，所述PD-1多肽包含人部分和内源部分。2.如权利要求1所述的啮齿动物，其中所述PD-1多肽在所述啮齿动物的细胞中由啮齿动物信号肽翻译。3.如权利要求1或权利要求2所述的啮齿动物，其中所述内源部分包含内源PD-1多肽的胞内部分。4.如权利要求3所述的啮齿动物，其中所述内源部分还包含内源PD-1多肽的跨膜部分。5.如权利要求4所述的啮齿动物，其中所述内源部分具有与图8中呈现的小鼠PD-1多肽的相应氨基酸序列至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列。6.如权利要求4所述的啮齿动物，其中所述内源部分具有与图8中呈现的小鼠PD-1多肽的相应氨基酸序列相同的氨基酸序列。7.如权利要求1-6中任一项所述的啮齿动物，其中所述人部分包含人PD-1多肽的氨基酸35-145。8.如权利要求1-6中任一项所述的啮齿动物，其中所述人部分包含人PD-1多肽的氨基酸27-145。9.如权利要求1-6中任一项所述的啮齿动物，其中所述人部分包含人PD-1多肽的氨基酸26-169。10.如权利要求1-6中任一项所述的啮齿动物，其中所述人部分包含与图8中呈现的人PD-1多肽的相应氨基酸序列至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列。11.如权利要求1-6中任一项所述的啮齿动物，其中所述人部分包含与图8中呈现的人PD-1多肽的相应氨基酸序列相同的氨基酸序列。12.如前述权利要求中任一项所述的啮齿动物，其中包含人部分和内源部分的所述PD-1多肽由内源Pdcd1基因编码。13.如权利要求12所述的啮齿动物，其中所述内源Pdcd1基因包含内源Pdcd1外显子1、4和5。14.如权利要求13所述的啮齿动物，其中所述内源Pdcd1基因还包含全部或部分的内源Pdcd1外显子3。15.一种包含含有内源部分和人部分的Pdcd1基因的啮齿动物，其中所述内源部分和人部分有效连接至啮齿动物Pdcd1启动子。16.如权利要求15所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物Pdcd1启动子为内源啮齿动物Pdcd1启动子。17.如权利要求15或权利要求16所述的啮齿动物，其中所述内源部分包含内源Pdcd1外显子1、4和5。18.如权利要求17所述的啮齿动物，其中所述内源部分还包含全部或部分的内源Pdcd1外显子3。19.如权利要求17或权利要求18所述的啮齿动物，其中所述内源Pdcd1基因的外显子1、全部或部分的外显子3、外显子4和5与图8中呈现的内源Pdcd1基因的相应外显子1、全部或部分的相应外显子3、相应外显子4和5至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同。20.如权利要求15-19中任一项所述的啮齿动物，其中所述人部分编码人PD-1多肽的氨基酸26-169。21.如权利要求15-19中任一项所述的啮齿动物，其中所述人部分包含人Pdcd1基因的外显子2。22.如权利要求21所述的啮齿动物，其中所述人部分还包含全部或部分的人Pdcd1外显子3。23.如权利要求22所述的啮齿动物，其中人Pdcd1外显子2和全部或部分的人Pdcd1外显子3与图8中呈现的人Pdcd1基因的相应外显子2和全部或部分的相应外显子3至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同。24.如权利要求22所述的啮齿动物，其中所述人部分包含经密码子优化以在所述啮齿动物中表达的序列。25.如权利要求22所述的啮齿动物，其中所述人部分包含SEQIDNO:23。26.如权利要求1-25中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物为大鼠或小鼠。27.一种PD-1多肽，其通过如权利要求1-26中任一项所述的啮齿动物产生。28.如权利要求27所述的PD-1多肽，其中所述PD-1多肽包含与图8中呈现的人源化PD-1多肽至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列。29.一种分离的啮齿动物细胞或组织，所述分离的啮齿动物细胞或组织的基因组包含编码具有人部分和内源部分的PD-1多肽的Pdcd1基因，所述部分有效连接至啮齿动物Pdcd1启动子。30.如权利要求29所述的分离的啮齿动物细胞或组织，其中所述啮齿动物Pdcd1启动子为内源啮齿动物Pdcd1启动子。31.如权利要求29或权利要求30所述的分离的细胞或组织，其中所述人部分包含人Pdcd1外显子2。32.如权利要求31所述的分离的细胞或组织，其中所述人部分还包含全部或部分的人Pdcd1外显子3。33.如权利要求29-32中任一项所述的分离的啮齿动物细胞或组织，其中所述啮齿动物细胞或组织为小鼠细胞或小鼠组织，或大鼠细胞或大鼠组织。34.一种啮齿动物胚胎干细胞，所述啮齿动物胚胎干细胞的基因组包含编码具有人部分和内源部分的PD-1多肽的Pdcd1基因，所述部分有效连接至啮齿动物Pdcd1启动子。35.如权利要求34所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述啮齿动物Pdcd1启动子为内源啮齿动物Pdcd1启动子。36.如权利要求34或权利要求35所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述人部分包含人Pdcd1外显子2。37.如权利要求36所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述人部分还包含全部或部分的人Pdcd1外显子3。38.如权利要求34-37中任一项所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述啮齿动物胚胎干细胞为小鼠胚胎干细胞并且来自129品系、C57BL品系或它们的混合物。39.如权利要求38所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述啮齿动物胚胎干细胞为小鼠胚胎干细胞并且为129品系和C57BL品系的混合物。40.一种啮齿动物胚胎，其由如权利要求34-...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·布罗瓦，A·O·穆吉卡，KM·V·赖，A·J·莫菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US