人源化的T细胞共受体的小鼠制造技术

本发明专利技术提供了表达嵌合的人/非人T细胞共受体多肽(例如CD4、CD8α、CD8β)的基因修饰的非人动物，及包含其的胚胎、细胞和组织。本发明专利技术还提供了制备所述基因修饰的动物的构建体和制备其的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】人源化的T细胞共受体的小鼠 巧关申请的香叉引用 本申请要求根据35U.S.C. § 119(e)的2013年10月15日提交的美国临时专利申 请序列号61/890, 915和2013年2月20提交的美国临时专利申请序列号61/766, 762的优 先权，其全部内容在此参考并入。 序列表 本申请的说明书中引用了W电子形式于2014年2月20日提交的序列表，其为文 件名为"2010794-0441_ST25"的ascii,txt文件。该.txt文件于2014年2月13日生成， 其大小为47化。 专利
本专利技术设及非人动物（例如，晒齿动物，例如小鼠或大鼠），所述非人动物经基因 工程改造W表达人源化的T细胞共受体。本专利技术设及经基因工程改造W表达人源化的CD4 或CD8共受体的非人动物，W及表达其的胚胎、组织和细胞。本专利技术还设及经工程改造W共 表达人源化的CD4共受体和人源化的主要组织相容性复合物（MHC)II的非人动物。本专利技术 还设及经工程改造W共表达人源化的CD8共受体和人源化的血ICI的非人动物。本专利技术还 提供了制备经基因工程改造的动物的方法，所述动物表达人源化的T细胞共受体（例如，人 源化的CD4或CD8)。本专利技术还提供了使用表达人源化的T细胞共受体的所述经基因工程改 造的动物用于研发人类疗剂的方法。 发巧背景 在适应性免疫应答中，外来抗原被B淋己细胞和T淋己细胞上的受体分子（例如， 免疫球蛋白和T细胞受体或TCR)所识别。运些外来抗原被特定蛋白作为肤片段递呈至细 胞表面上，通常将所述特定蛋白称为主要组织相容性复合物（MHC)分子。在T细胞介导的 应答过程中，由MHC分子递呈的抗原被T细胞受体所识别。然而，有效的免疫应答除了需要 MHC-抗原复合物的T细胞受体识别W外，还需要T细胞共受体分子（例如，CD4或CD8)与 MHC恒定部分的结合。 T细胞分为几个种类，包括辅助T细胞和细胞毒性T细胞。辅助T细胞表达共受 体CD4并且识别与MHCII分子结合的抗原。CD4+T细胞活化免疫系统中的其他效应细胞， 例如活化表达MHCII的B细胞W产生抗体，活化表达MHCII的巨隧细胞W破坏病原体等。 CD4和T细胞受体与相同MHCII递呈的外来抗原的结合使得T细胞对该抗原具有更加显著 的敏感性。 而相反的是，细胞毒性T细胞（CTL)表达共受体CD8并且识别与MHCI分子结合 的外来抗原。CTL专口地杀伤携带被其自身膜结合TCR所识别的MHCI结合肤的任意细胞。 当细胞展示出来源于非正常存在的（例如，来源于病毒、肿瘤或其他非自身来源）细胞蛋白 的肤时，此类肤被CTL所识别，CTL被活化并且杀伤展示出所述肤的细胞。与CD4类似，CD8 的结合使得CTL对MHCI递呈的抗原更加敏感。 由于耐受机制使得并非所有的抗原均激发T细胞活化。然而，在一些疾病中（例 如，癌症、自身免疫性疾病）来源于自身蛋白的肤成为免疫系统细胞成分的祀点，运导致递 呈此类肤的细胞被破坏。其对于识别具有临床意义的抗原（例如，与多种类型的癌症相关 的抗原）方面具有显著的推动作用。然而，为了改进对在人类T细胞中激发适宜应答的肤的 鉴定和选择，特别是具有临床意义的抗原的肤，仍需要模拟人免疫系统的体内和体外系统。 因此，需要能够展示出人免疫系统成分的生物系统（例如，基因修饰的非人动物和细胞）。 发巧概沐 本申请提供了包含非人细胞的非人动物，所述非人细胞表达在细胞免疫应答中具 有功能的人的或人源化的分子。本申请还提供了编码人或人源化的T细胞共受体（例如， CD4和/或CD8)蛋白的人源化的晒齿动物基因座。本申请还提供了表达人或人源化的T细 胞共受体（例如，CD4和/或CD8)蛋白的人源化的晒齿动物细胞。本申请提供了体内和体 外系统，所述系统包含人源化的晒齿动物细胞，其中所述晒齿动物细胞表达一种或多种人 或人源化的免疫系统分子。 本申请提供一种基因修饰的非人动物，所述非人动物在其基因组中包含编码人或 人源化的T细胞共受体多肤的核巧酸序列。在不同实施方式中，本申请提供了一种基因修 饰的非人动物，所述非人动物包含编码嵌合的人/非人T细胞共受体多肤的核巧酸序列。 在一个实施方式中，所述核巧酸序列存在于内源性T细胞共受体基因座。在一个实施方式 中，所述嵌合的T细胞共受体多肤的人部分包含全部或基本上全部的人T细胞共受体的胞 外域，和所述非人动物表达功能性的嵌合的T细胞共受体多肤。在一个实施方式中，所述嵌 合的T细胞共受体多肤的非人部分至少包含非人T细胞共受体的跨膜和胞质结构域，和所 述非人动物表达功能性的嵌合的T细胞共受体多肤。在本专利技术的一个方面，所述嵌合的T 细胞共受体多肤仅在所述非人动物的T细胞上表达，例如其不在所述非人动物的B细胞上 表达。在一个方面，所述动物不表达来自其内源性非人T细胞共受体基因座的功能性非人T 细胞共受体。在本专利技术的一个方面，所述嵌合的T细胞共受体多肤包含在所述非人动物的 种系中。在一个方面，所述动物在内源性T细胞共受体基因座包含编码所述嵌合的T细胞 共受体多肤的核巧酸序列的一个或两个拷贝；因此，所述动物针对编码嵌合的T细胞共受 体多肤的所述核巧酸序列可W是杂合的或纯合的。 在一个实施方式中，所述T细胞共受体是CD4。因此，在一个方面，本专利技术提供了一 种基因修饰的非人动物，所述非人动物包含编码嵌合的人/或非人CD4多肤的核巧酸序列。 在一个实施方式中，所述核巧酸序列存在于内源性CD4基因座。在一个实施方式中，所述动 物是晒齿动物，例如小鼠或大鼠。因此，在一个实施方式中，本专利技术提供了一种基因修饰的 小鼠，所述小鼠在其内源性CD4基因座包含编码嵌合的人/小鼠CD4多肤的核巧酸序列，其 中所述嵌合的CD4多肤的人源部分包含全部或基本上全部的人CD4多肤的胞外域，其中所 述嵌合的CD4多肤的小鼠部分至少包含小鼠CD4多肤的跨膜和胞质结构域，和其中所述小 鼠表达功能性的嵌合的人/小鼠CD4。在一个实施方式中，本申请提供了一种基因修饰的小 鼠，所述小鼠在其内源性CD4基因座包含编码嵌合的人/小鼠CD4多肤的核巧酸序列，其中 所述嵌合的多肤的人源部分至少包含全部或基本上全部的人CD4多肤的结构域D1-D3,其 中所述嵌合的多肤的小鼠部分至少包含小鼠CD4的跨膜和胞质结构域，和其中所述小鼠表 达功能性的嵌合的人/小鼠CD4。在一个方面，所述小鼠不表达来自其内源性小鼠CD4基因 座的功能性内源性小鼠CD4。在一个实施方式中，编码嵌合的人/小鼠CD4多肤的所述核巧 酸序列与内源性小鼠启动子和调控序列可操作地连接。因此，在一个实施方式中，所述小鼠 在CD8谱系的B细胞或T细胞上不表达所述嵌合的CD4蛋白。在一个实施方式中，所述嵌 合的CD4蛋白的人源部分包含如SEQIDN0:57所示的氨基酸序列。在一个实施方式中，所 述嵌合的人/小鼠CD4多肤如SEQIDNO:4所示。 在一个方面，包含本申请所述的嵌合的CD4多肤的所述基因修饰的非人动物，例 如所述基因修饰的小鼠，还包含人或人源化的MHCII蛋白，其中所述MHCII蛋白包含人 MHCIIa多肤的胞外域和人MHCII0多肤的胞外域。在一个方面，所述动物包含人源 化的MHCII蛋白。在一个实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因修饰的非人动物，所述非人动物包含编码嵌合的人/非人T细胞共受体多肽的核苷酸序列，其中所述嵌合多肽的非人部分至少包含非人T细胞共受体的跨膜和胞质结构域，和其中所述非人动物表达嵌合的T细胞共受体多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·麦克唐纳，A·J·莫菲，N·图，V·沃罗宁那，C·古雷尔，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US