肽混合物制造技术

本发明专利技术公开了一种适于引起免疫应答的肽混合物。其包含第一肽和第二肽，所述第一肽和第二肽各自对应于RAS蛋白的片段。所述第一肽和第二肽中的每种包含包括RAS蛋白的位置13的至少8个氨基酸的区域。所述第一肽和第二肽的所述区域中的每个独立地具有不在所述位置13处的与RAS蛋白的相应区域相同的至少6个氨基酸残基。所述第一肽和所述第二肽中的每种在对应于所述位置13的氨基酸处具有点突变。所述第一肽的点突变不同于所述第二肽的点突变。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术提供用于引起免疫应答的包含RAS蛋白的肽的肽混合物，用于引起免疫应答的RAS蛋白的肽，以及包含对递呈在MHC分子上时的此种肽具有特异性的T细胞的T细胞混合物和T细胞制剂。本专利技术还涉及包含这样的肽混合物和T细胞混合物及制剂的药物制剂，这样的肽混合物、肽和T细胞混合物及制剂用于预防和/或治疗癌症的用途，以及选择用于治疗癌症的肽混合物、肽、T细胞混合物和T细胞制剂的方法。专利技术背景癌症发作的遗传背景是原癌基因、癌基因和肿瘤抑制基因的改变。原癌基因是具有变成癌基因的潜能的细胞的正常基因。所有癌基因都编码蛋白质并且通过蛋白质来行使功能。在大部分情况中，其被证明是信号转导通路的组分。在自然中癌基因通过点突变或易位而由原癌基因产生，由此导致载有所述突变的细胞的状态转变。癌症通过涉及癌基因和肿瘤抑制细胞的若干突变事件的多步过程而发展。在其最简单的形式中，原癌基因中的单碱基置换可能导致编码的蛋白质有一个氨基酸不同。在涉及鼠肿瘤的实验模型中，已经证明细胞内“自我”-蛋白质的点突变可能产生由与正常的肽具有单个氨基酸差异的肽组成的肿瘤排斥抗原。在肿瘤细胞表面上的主要组织相容性(MHC)分子的背景中识别这些肽的T细胞能够杀死肿瘤细胞并因此将肿瘤排出宿主。(Boon,T.等,Cell 1989,Vol.58,p.293-303)在近三十年，进行了大量努力以分析人肿瘤抗原的抗体。已经表明此种抗体可以用于诊断和治疗用途两者，例如连同抗癌剂一起。一个问题是抗体仅能够结合暴露在肿瘤细胞的表面上的肿瘤抗原。因为此原因，产生基于身体免疫系统的癌症治疗的努力不如预期的成功。抗体典型地识别天然构象的游离抗原并且可以有效地识别暴露在抗原表面上几乎任何位点。相对于由B细胞产生的抗体，T细胞仅识别在MHC分子背景中的抗原，所述抗原在人中被称为HLA(人白细胞抗原)，并且所述识别仅在适当的抗原加工之后，所述抗原加工通常由蛋白质的蛋白水解片段化组成，其产生适配到MHC分子的沟中的肽。这使得T细胞能够识别来源于胞内蛋白质的肽。T细胞可以因此识别来源于肿瘤细胞中的任何地方的异常肽(当其被MHC分子展示在肿瘤细胞表面上时)。随后T细胞可以被激活以消灭带有异常肽的肿瘤细胞。T细胞可以通过多种机制控制癌症的发展和生长。细胞毒性T细胞，HLA I类限制性CD8+和HLA II类限制性CD4+，可以直接杀死带有适当的肿瘤抗原的肿瘤细胞。需要CD4+辅助T细胞来诱导和保持细胞毒性T细胞反应以及抗体反应，并且诱导巨噬细胞和淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK细胞)杀伤。已经鉴定了很多癌基因及其蛋白质产物。此外，已经证明健康人的T细胞库(repertoire)包括对被递呈在适当的HLA分子上时的来源于一种p21RAS癌基因产物的合成的肽片段具有特异性的T细胞。此外，预期全部癌症中的约20％与RAS癌基因的突变相关。由于以下风险，即肽混合物中的一些肽是免疫显性的并且因此抑制其他肽的HLA递呈，所以对将所述混合物用于患者的疫苗接种存在很大的担心(Pion S等,Blood,1999Feb 1；93(3):p952-62)。由体外进行的实验已知，多种突变的RAS肽可以竞争结合负责向相关T细胞的递呈的HLA分子，并且具有相同长度但是表现不同突变的肽可以以不同程度的效力抑制表现另一种突变的肽的结合和识别(T.Gedde-Dahl III等,Human Immunol.1994,33,p.266-274,以及B.H.Johanssen等,Scand.J.Immunol.,1994,33,p.607-612)。由这些事实，免疫显性问题已被认为是突变RAS肽疫苗的一个问题。WO 92/14756公开了引起T细胞免疫性的癌基因蛋白质产物的合成的肽和片段，其用于针对与RAS相关的癌症的疫苗和用于治疗癌症的组合物。所述肽必须对应于由癌细胞递呈的癌基因的活性片段并且在对应于癌基因突变的一个或多个位置处包括突变。该文献公开了在RAS蛋白的位
置12、13和61处的突变并且仅具体公开了G12A、G12V、G12C、G12S、G12K、G12D、G12R、Q61R、Q61K、Q61L、Q61H、G13V和G13D突变。此外，虽然该文献提及疫苗可以包含具有在癌基因蛋白质中发现的最常见的突变的肽的选择，但是其没有提示任何具体的组合。WO 00/66153讨论了用于癌症疫苗的引起T细胞免疫性的合成的肽混合物。所述肽混合物由RAS p21突变体肽组成并且该文献仅具体公开了G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V、Q61H、Q61K、Q61L、Q61R和G13D突变。该文献还公开了由肽混合物引起的免疫应答显著高于由单个肽引起的免疫应答；然而，其没有启示可以使用除了其中所公开的那些以外的任何其他的肽组合。GB 2328689公开了能够诱导特异性细胞毒性T细胞反应(CD 8+)的肽，其包含p21ras原癌基因蛋白质的8至10个氨基酸(包括p21RAS原癌基因蛋白质的位置12和/或13或位置61)并且在位置12、13或61具有氨基酸置换。该文献还公开了所述肽可以用作癌症疫苗并且可以在用于抗癌治疗的组合物中使用。然而，没有公开特别有用的具体肽混合物。此外，这些文献都没有讨论具体的肽如何与具体类型的癌症相关，并且没有解决包含多种肽的混合物中的肽的冗余。Gjertsen等(Int.J.Cancer 2001,92,p.441-450)公开了涉及用合成的突变体RAS肽连同粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子给患有胰腺的腺癌的患者进行疫苗接种的I/II期试验。该试验使用单个肽疫苗或四种突变体肽的混合物。组合疫苗由四种在胰腺癌中发现的最常见的K-RAS突变组成，即具有G12V、G12D、G12C或G12R突变的肽。然而，该文献没有公开可用的任何其他肽组合，没有公开与癌症相关的任何其他RAS蛋白突变，并且没有讨论具体的肽如何与具体类型的癌症相关。Wedén等(Int.J.Cancer 2010,128(5),p.1120-1128)报道了用合成的突变体RAS肽进行疫苗接种的患有胰腺癌的患者的长期随访。所述疫苗由单个的RAS肽或七种RAS肽的混合物组成。特别的，用于该试验的七种RAS肽具有G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V或G13D突变。然而，该文献没有讨论具体的肽如何与具体类型的癌症相关，并且没有公开可用的任何其他肽组合。Hunger等(Exp.Dermatol.2001,10:161-167)报道了以安全性作为第一终点并且以RAS肽的免疫原性作为第二终点的RAS肽的体内免疫原性的临床前导性研究。用具有四密码子61突变的N-ras肽9残基49-73)对黑素瘤患者进行皮内免疫。八名患者显示阳性的DTH反应。然而，该文献没有讨论具体的肽如何与具体类型的癌症相关，并且没有公开可用的任何其他肽组合。Prior等(Cancer Res.2012,72(10),p.2457-2467)公开了不同类型的癌症与特定RAS同种型的突变相关并且各同种型具有不同的密码子突变特征。此外，Prior等公开了在RAS蛋白的位置12、13和61中出现总计18种突变，每个位置出现六种突变。本文档来自技高网...

【技术保护点】
适于引起免疫应答的肽混合物，其包含第一肽和第二肽，所述第一肽和第二肽各自对应于RAS蛋白的片段，其中：所述第一肽和第二肽中的每种包含包括RAS蛋白的位置13的至少8个氨基酸的区域，所述第一肽和第二肽的所述区域中的每个独立地具有不在所述位置13处的与RAS蛋白的相应区域相同的至少6个氨基酸残基，所述第一肽和所述第二肽中的每种在对应于所述位置13的氨基酸处具有点突变，并且所述第一肽的点突变不同于所述第二肽的点突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.09 EP 13196333.21.适于引起免疫应答的肽混合物，其包含第一肽和第二肽，所述第一肽和第二肽各自对应于RAS蛋白的片段，其中：所述第一肽和第二肽中的每种包含包括RAS蛋白的位置13的至少8个氨基酸的区域，所述第一肽和第二肽的所述区域中的每个独立地具有不在所述位置13处的与RAS蛋白的相应区域相同的至少6个氨基酸残基，所述第一肽和所述第二肽中的每种在对应于所述位置13的氨基酸处具有点突变，并且所述第一肽的点突变不同于所述第二肽的点突变。2.根据权利要求1所述的肽混合物，其中所述点突变中的每个独立地选自G13A、G13C、G13D、G13R、G13S或G13V突变。3.根据权利要求1或2所述的肽混合物，其中所述肽混合物还包含：至少一种另外的肽，所述至少一种另外的肽对应于RAS蛋白的片段，所述RAS蛋白的片段包含至少8个氨基酸的区域，所述区域包括RAS蛋白的位置12，其中所述至少一种另外的肽的所述区域中的每个独立地具有不在所述位置12处的与RAS蛋白的相应区域相同的至少6个氨基酸残基，并且其中在对应于RAS蛋白的位置12的氨基酸处存在点突变；和/或至少一种另外的肽，所述至少一种另外的肽对应于RAS蛋白的片段，所述RAS蛋白的片段包含至少8个氨基酸的区域，所述区域包括RAS蛋白的位置61，其中所述至少一种另外的肽的所述区域中的每个独立地具有不在所述位置61处的与RAS蛋白的相应区域相同的至少6个氨基酸残基，并且其中在对应于RAS蛋白的位置61的氨基酸处存在点突变。4.根据权利要求3所述的肽混合物，其中在对应于RAS蛋白的位置12的氨基酸处的点突变选自G12A、G12C、G12D、G12R、G12S或G12V突变和/或其中在对应于RAS蛋白的位置61的氨基酸处的点突变选自Q61E、Q61H、Q61K、Q61L、Q61P或Q61R突变。5.根据权利要求3所述的肽混合物，其中所述第一肽是具有G13C突变的肽并且所述第二肽是具有G13D突变的肽，并且其中所述至少一种另外的肽包括：具有G12A突变的肽，具有G12C突变的肽，具有G12D突变的肽，具有G12R突变的肽，具有G12S突变的肽，和具有G12V突变的肽。6.根据权利要求3所述的肽混合物，其中所述第一肽是具有G13R突变的肽并且所述第二肽是具有G13V突变的肽，并且其中所述至少一种另外的肽包括：具有Q61H突变的肽，具有Q61K突变的肽，具有Q61L突变的肽，和具有Q61R突变的肽。7.适于引起免疫应答的肽混合物，其包含至少五种肽，所述五种肽各自对应于RAS蛋白的片段，其中：所述至少五种肽中的每种包含至少8个氨基酸的区域并且包括RAS蛋白的位置13，所述至少五种肽的所述区域中的每个独立地具有不在所述位置13处的与RAS蛋白的相应区域相同的至少6个氨基酸残基，所述肽中的每种在对应于所述位置13的氨基酸处具有点突变，所述点突变选自G13A、G13C、G13D、G13R、G13S或G13V突变，并且每种肽的点突变不同于其他肽的点突变。8.适于引起免疫应答的肽混合物，其由六种肽组成，所述六种肽各自对应于RAS蛋白的片段，其中：每种肽包含至少8个氨基酸的区域，所述区域包括RAS蛋白的位置12，所述肽的所述区域中的每个独立地具有不在所述位置12处的与RAS蛋白的相应区域相同的至少6个氨基酸残基，所述肽中的每种在对应于所述位置12的氨基酸处具有点突变，所述点突变选自G12A、G12C、G12D、G12R、G12S或G12V突变，并且每种肽的点突变不同于其他肽的点突变。9.适于引起免疫应答的肽混合物，其由六种肽组成，所述六种肽各自对应于RAS蛋白的片段，其中：每种肽包含至少8个氨基酸的区域，所述区域包括RAS蛋白的位置61，所述肽的所述区域中的每个独立地具有不在所述位置61处的与RAS蛋白的相应区域相同的至少6个氨基酸残基，所述肽中的每种在对应于所述位置61的氨基酸处具有点突变，所述点突变选自Q61E、Q61H、Q61K、Q61L、Q61P或Q61R突变，并且每种肽的点突变不同于其他肽的点突变。10.适于引起免疫应答的肽混合物，其由第一肽、第二肽、第三肽和第四肽组成，所述第一肽、第二肽、第三肽和第四肽各自对应于RAS蛋白的片段，其中：所述第一肽、第二肽和第三肽中的每种包含至少8个氨基酸的区域，所述区域包括RAS蛋白的位置12，所述第四肽包含包括RAS蛋白的位置13的至少8个氨基酸的区域，所述第一肽、第二肽、第三肽和第四肽的所述区域中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔恩·阿蒙·埃里克森，
申请(专利权)人：塔格瓦克斯公司，
类型：发明
国别省市：挪威;NO