具有抗菌活性的多肽混合物制造技术

本发明专利技术涉及微生物学领域，具体地涉及一种第一酶促活性结构域的源与第二酶促活性结构域的源的组合并且涉及包含所述组合的组合物。本发明专利技术进一步涉及一种用作药物的包含所述组合的组合物，涉及所述组合物作为抗微生物剂的用途并且涉及一种用于控制食品产品或饲料产品中、食品或饲料加工设备上和/或食品或饲料加工设备中、食品或饲料容器上和/或食品或饲料容器中的微生物污染的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有抗菌活性的多肽混合物
本专利技术涉及微生物学领域，具体地涉及第一酶促活性结构域的源与第二酶促活性 结构域的源的组合、多肽、多核苷酸并且涉及包含所述组合、多肽和/或多核苷酸的组合 物。本专利技术进一步涉及一种用作药物的包含所述组合、多肽和/或多核苷酸的组合物，涉及 所述组合物、多肽和/或多核苷酸作为抗微生物剂的用途并且涉及一种用于控制食品产品 或饲料产品中、食品或饲料加工设备上和/或中、食品或饲料容器上和/或中的微生物污染 的方法。
技术介绍
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)是一种经常造成严重传染性疾病和食 物中毒的主要的人类病原体。其治疗因为不断出现抗生素耐药菌株而变得越来越困难。来 自感染了金黄色葡萄球菌的噬菌体的内溶素（endolysin)已显示出潜在地将这些病原体 控制在一定程度上并且可以用于它们的特异性检测。在大多数情况下，靶向葡萄球菌物种 的内溶素的应用中的主要障碍是低酶活性、难以大批量生产和/或蛋白质稳定性。 因此，仍然需要在例如抗微生物活性和/或稳定性上具有改善特性的新抗微生物 剂。
技术实现思路
在第一方面，本专利技术提供了第一酶促活性结构域的源与第二酶促活性结构域的 源的组合（combination),其中所述第一和第二酶促活性结构域表现出不同的（独特的， distinct)革巴键（祀向键合，target bond)特异性并且被包含在不同的第一和第二多肽上， 艮P，所述第一酶促活性结构域被包含在第一多肽上并且所述第二酶促结构域被包含在第二 多肽上，其中所述第一和第二多肽各自具有不同的氨基酸序列。此外，本专利技术提供了第一酶 促活性结构域的源、第二酶促活性结构域的源与第三酶促活性结构域的源的组合，其中所 述第一、第二和第三酶促活性结构域表现出不同的靶键特异性并且被包含在不同的第一、 第二和第三多肽上，即，所述第一酶促活性结构域被包含在第一多肽上，所述第二酶促结构 域被包含在第二多肽上，并且所述第三酶促结构域被包含在第三多肽上，其中所述第一、第 二和第三多肽各自具有不同的氨基酸序列。此外，本专利技术提供了第一酶促活性结构域的源、 第二酶促活性结构域的源、第三酶促活性结构域的源与另外的酶促活性结构域的源的组 合，其中所述第一、第二、第三和另外的酶促活性结构域表现出不同的靶键特异性并且被包 含在不同的第一、第二、第三和另外的多肽上，即，所述第一酶促活性结构域被包含在第一 多肽上，所述第二酶促结构域被包含在第二多肽上，所述第三酶促结构域被包含在第三多 肽上，并且所述另外的酶促活性结构域被包含在另外的多肽上，其中所述第一、第二、第三 和另外的多肽各自具有不同的氨基酸序列。另外的酶促活性结构域在本文中指的是第四、 第五、第六、第七、第八、第九、第十或更多的酶促活性结构域，优选第四酶促活性结构域。另 外的多肽在本文中指的是第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十或更多的多肽，优选第四 多肽。 表现出肽聚糖水解酶活性的大多数天然金黄色葡萄球菌噬菌体内溶素由 C-末端细胞壁结合结构域（CBD)、中央的N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酸酰胺酶结构域 (N-acetylmuramoyl-L-Alanine amidase domain)以及具有半胱氨酸、组氨酸依赖性酰 胺水解酶/肽酶（CHAP)同源性的N-末端丙氨酰-甘氨酰肽链内切酶结构域组成，或在 Ply2638的情况下由具有肽酶_M23同源性的N-末端甘氨酰-甘氨酸肽链内切酶结构域组 成，表现出肽聚糖水解酶活性的后三个结构域各自具有不同的靶键特异性并且在本文中一 般地被称为酶促活性结构域。在本专利技术的范围内，根据本专利技术的第一酶促结构域具有水解 特异靶键的催化活性，该特异靶键不同于被本专利技术的第二和可选的第三和/或另外的酶促 活性结构域水解的靶键。此外，在本专利技术的范围内，根据本专利技术的第二酶促结构域具有水解 特异靶键的催化活性，该特异靶键不同于被本专利技术所述的第一和可选的第三和/或另外的 酶促活性结构域水解的靶键。 本专利技术人们惊奇地发现，同时应用两种以上具有不同的靶键特异性的酶促活性结 构域赋予了协同效应。出人意料的是，这不仅当具有不同特异性的酶促活性结构域如同在 天然葡萄球菌内溶素中一样位于同一分子上时有效，并且当所述具有不同特异性的酶促活 性结构域被分离在不同的多肽上时也有效。 使不同的酶促活性结构域位于分离的个体多肽上的益处是：所产生的多肽更小， 可更容易地生产。此外，这些更小的多肽在特定的环境中具有更好的扩散性并且可以更耐 降解并具有更高的热稳定性。另一个优点是，可以以最适合于水解具体细菌靶细胞的比率， 将位于独立的不同的多肽分子上的独立的不同的酶促活性结构域混合并汇集在可变组合 物中。可以通过使用来自于许多不同来源（包括噬菌体细胞溶素、细菌素、自溶素或任何其 他细胞壁溶解酶）的具有几乎任何靶键特异性的几乎任何功能性酶促活性结构域来增补 (supplement)和/或补充（complement)根据本专利技术的组合。 在本专利技术的上下文中，'组合'是指第一酶促活性结构域的源和第二酶促活性结构 域的源被考虑并包括在内。此外，在本专利技术的上下文中，'组合'是指第一酶促活性结构域的 源、第二酶促活性结构域的源和可选的第三和/或另外的酶促活性结构域的源被考虑并包 括在内。每个源可以是与其他源在一起或一起存在或组合在一起或物理上接触以形成一种 单一组合物。可替代地，每个源可以被包含在不同的组合物中。然而，本专利技术提供的认识是， 需要或使用第一和第二酶促活性结构域的源两者以获得本文所定义的本专利技术的效果。如果 每个源不存在于相同的单一组合物中，那么可以顺序地或同时地使用每个源和/或包含本 专利技术所述的组合的源的各个不同的组合物。 '第一酶促活性结构域的源'、'第二酶促活性结构域的源'、'第三酶促活性结 构域的源'和'另外的酶促活性结构域的源'优选地包含基于蛋白质的（蛋白质类， protein-based)来源（即，多肽、蛋白质、蛋白质的消化和/或蛋白质或消化的片段）或非 基于蛋白质的（非蛋白质类，non protein-based)来源（即，编码蛋白质或衍生的肽或蛋 白质片段的核酸）。以下，我们定义了包括于本专利技术中的优选的第一酶促活性结构域的源、 第二酶促活性结构域的源、第三酶促活性结构域的源和另外的酶促活性结构域的源。由于 本专利技术涉及第一酶促活性结构域的源、第二酶促活性结构域的源和可选的第三和/或另外 的酶促活性结构域的源的组合，所以本文中定义的第一酶促活性结构域的源的每一个均可 以与本文中定义的第二和可选的第三和/或另外的酶促活性结构域的源的每一个进行组 合。本专利技术还包括使用基于蛋白质的第一酶促活性结构域的源与非基于蛋白质的第二和可 选的第三和/或另外的酶促活性结构域的源的组合，反之亦然。 本文中定义的酶促活性结构域是具有裂解活性（细胞溶解酶的活性，lytic activity)、优选表现出肽聚糖水解酶活性的结构域。包含在根据本专利技术的不同的第一、第 二、第三和/或另外的多肽上的根据本专利技术的第一、第二、第三和/或另外的酶促活性结构 域的裂解活性可以由本领域技术人员熟知的方法来评估。在一个实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种第一酶促活性结构域的源与第二酶促活性结构域的源的组合，其中所述第一酶促活性结构域和第二酶促活性结构域各自表现出不同的靶键特异性并且被包含在不同的第一多肽和第二多肽上。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.05.07 EP 12166977.4;2012.05.07 US 61/643,4171. 一种第一酶促活性结构域的源与第二酶促活性结构域的源的组合，其中所述第一酶 促活性结构域和第二酶促活性结构域各自表现出不同的靶键特异性并且被包含在不同的 第一多肽和第二多肽上。2. 根据权利要求1所述的组合，其中所述不同的靶键是细菌细胞的肽聚糖层中必不可 少的键，优选地其中所述细菌细胞是葡萄球菌。3. 根据权利要求2所述的组合，其中所述第一酶促活性结构域和/或所述第二酶促活 性结构域是从由半胱氨酸、组氨酸依赖性酰胺水解酶/肽酶结构域，肽链内切酶结构域，酰 胺酶结构域和糖基水解酶组成的群组中选择的结构域。4. 根据权利要求1-3所述的组合，其中所述第一多肽和所述第二多肽包含不同多重性 的所述第一酶促活性结构域和/或所述第二酶促活性结构域。5. 根据权利要求1-4所述的组合，其中所述不同的第一多肽和第二多肽中的每一个进 一步包含细胞壁结合结构域。6. 根据权利要求5所述的组合，其中： -所述第一酶促活性结构域是半胱氨酸、组氨酸依赖性酰胺水解酶/肽酶结构域并且 所述第二酶促活性结构域是肽链内切酶结构域， _所述组合进一步包含第三酶促活性结构域的源，所述第三酶促活性结构域被包含在 不同的第三多肽上， -所述第三酶促活性结构域是酰胺酶结构域， -所述不同的第三多肽进一步包含细胞壁结合结构域，并且 -所述不同的第一多肽、第二多肽和第三多肽中的每一个包含多重性的所述第一酶促 活性结构域、第二酶促活性结构域和第三酶促活性结构域。7. 根据权利要求6所述的组合，其中所述第一多...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丁·约翰内斯·勒斯纳，弗里茨·艾兴泽埃尔，
申请(专利权)人：迈克瑞欧斯人体健康有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL