一种用于海参活性多肽的酶解方法技术

本发明专利技术提供了一种用于海参活性多肽的酶解方法，本方法在对海参干粉进行脱脂处理后，先后利用胰蛋白酶、碱性蛋白酶水解，避免化学方法制备多肽过程中的残留和污染，且本法制备多肽水解度高，多肽片段分子量较小，对于先胰蛋白酶酶解再进行碱性蛋白酶酶解的不仅水解度高，而且其分子量更多的分布在30kDa以下且较均匀，利于人体消化吸收。酶作为具有高效的催化性，pH、温度对其催化活性均有较大影响，本发明专利技术采用的酶解时间、pH、温度为最适酶解条件。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物分离
，具体涉及一种用于海参活性多肽的酶解方法。
技术介绍
海参具有很高的滋补和药用价值，属于典型的高蛋白低脂肪食品，干海参蛋白质含量高达55％。由于海参本身胶原蛋白的包裹作用，无论是新鲜产品或干制品水发，蛋白质都不能有效利用和吸收，有效利用率通常在20％左右。近年的研究证实，如果直接摄入多肽，吸收程度几乎达到100％。因此，用多肽代替蛋白质来补充营养可以获得事半功倍的效果。但多肽属于热敏性物质，温度、阳光及空气都会使其因降解而失活，虽然现有技术的提取方法对上述易使其失活的因素均注重加以控制，但是效果仍不尽理想。此外，提取工艺中的酶解步骤极大的影响着海参多肽的提取效率。目前用于海参多肽提取的酶解蛋白种类很多，按其来源大致可分为动物来源、植物来源和微生物来源三类。动物蛋白酶主要来源于动物的血液及消化道，主要有胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、凝血酶、透明质酸酶等。植物蛋白酶主要来源于植物的器官和组织，主要有木瓜凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶等。微生物蛋白酶主要来源于各种菌蛋白，如细菌中枯草杆菌蛋白酶，霉菌中黑曲酶和米曲酶，酵母菌蛋白酶及放线菌蛋白酶等。相关报道中，在海参酶解工艺中已有枯草杆菌中性蛋白酶的应用。不同的蛋白酶对同一种底物的水解效率是不同的，而且不同蛋白酶酶解液的化学组成、理化特性及功能性上都存在极大的差异，所以海参多肽提取过程中所选用的工具蛋白酶对之后的各类研究室非常重要的。与此同时，酶解工艺中酶制剂的用量、料水比、温度、pH值和酶解时间等因素都对水解度及酶解产物的品质构成影响。
技术实现思路
本专利技术旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种用于海参活性多肽的酶解方法，以解决现有技术中存在的酶解效率较低的技术问题。本专利技术解决的另一技术问题是提升海参多肽酶解产物的风味。为实现以上技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种海参多肽酶解液的制备方法，包括以下步骤：1)将海参原料粉碎后得到海参干粉，再采用CO2超临界萃取技术进行脱脂，得到海参脱脂干粉；2)将海参脱脂干粉加水配制成20～30g/L的悬浊液，而后向悬浊液中加入所述海参脱脂干粉总重量2～4％的胰蛋白酶，调整悬浊液pH至8.5～9，于40～50℃酶解4～6h，而后对酶解液执行沸水浴10～15min；3)而后将悬浊液在50～60℃中保持一定时间，加入海参脱脂干粉重量2～4％碱性蛋白酶后调节pH至8.5～9.5，每隔20～30min调节一次pH至8.5～9.5，酶解6～7h后，置于沸水浴中灭酶活10min，将上述酶解液在5000r/min条件下进行离心20min，取上清液得到海参多肽酶解液。优选的，步骤1)中所述的CO2超临界萃取技术进行脱脂的条件为：萃取温度为58℃、萃取压强为35MPa、静态萃取10min后调节CO2流量为15L/h、动态萃取时间为125min的萃取条件下对海参干粉进行脱脂。优选的，步骤2)中所述的悬浊液中海参脱脂干粉的浓度为27g/L。优选的，步骤2)中所述的胰蛋白酶的酶解条件为：温度为45℃、添加量为海参脱脂干粉重量3％、pH为8.8、时间为4h，间隔25min调节一次pH至8.8。优选的，步骤3)中所述的碱性蛋白酶酶解条件为：温度为54.7℃、添加量为海参脱脂干粉重量的3％、pH为9、时间为6h，间隔25min调节一次pH至9。优选的，其特征在于：所述的海参为花刺参。优选的，其特征在于：所述的海参为梅花参。本专利技术提供的技术方案，其工艺简单，操作方便，仪器设备要求低，能耗小，避免化学方法制备多肽过程中的残留和污染，且本法制备多肽水解度高，多肽片段分子量较小，对于先胰蛋白酶酶解再进行碱性蛋白酶酶解的不仅水解度高，而且其分子量更多的分布在30kDa以下且较均匀，利于人体消化吸收。酶作为具有高效的催化性，pH、温度对其催化活性均有较大影响，本专利技术采用的酶解时间、pH、温度为最适酶解条件。具体实施方式以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。实施例1一种海参多肽酶解液的制备方法，包括以下步骤：1)将海参原料粉碎后得到海参干粉，再采用CO2超临界萃取技术进行脱脂，得到海参脱脂干粉；2)将海参脱脂干粉加水配制成20g/L的悬浊液，而后向悬浊液中加入所述海参脱脂干粉总重量2％的胰蛋白酶，调整悬浊液pH至8.5，于40℃酶解4h，而后对酶解液执行沸水浴10min；3)而后将悬浊液在50℃中保持一定时间，加入海参脱脂干粉重量2％碱性蛋白酶后调节pH至8.5，每隔20min调节一次pH至8.5，酶解6h后，置于沸水浴中灭酶活10min，将上述酶解液在5000r/min条件下进行离心20min，取上清液得到海参多肽酶解液。实施例2一种海参多肽酶解液的制备方法，包括以下步骤：1)将海参原料粉碎后得到海参干粉，再采用CO2超临界萃取技术进行脱脂，得到海参脱脂干粉；2)将海参脱脂干粉加水配制成30g/L的悬浊液，而后向悬浊液中加入所述海参脱脂干粉总重量4％的胰蛋白酶，调整悬浊液pH至9，于50℃酶解6h，而后对酶解液执行沸水浴15min；3)而后将悬浊液在60℃中保持一定时间，加入海参脱脂干粉重量4％碱性蛋白酶后调节pH至9.5，每隔30min调节一次pH至9.5，酶解7h后，置于沸水浴中灭酶活10min，将上述酶解液在5000r/min条件下进行离心20min，取上清液得到海参多肽酶解液。在以上技术方案的基础上：步骤1)中所述的CO2超临界萃取技术进行脱脂的条件为：萃取温度为58℃、萃取压强为35MPa、静态萃取10min后调节CO2流量为15L/h、动态萃取时间为125min的萃取条件下对海参干粉进行脱脂。所述的海参为花刺参。实施例3一种海参多肽酶解液的制备方法，包括以下步骤：1)将海参原料粉碎后得到海参干粉，再采用CO2超临界萃取技术进行脱脂，得到海参脱脂干粉；2)将海参脱脂干粉加水配制成25g/L的悬浊液，而后向悬浊液中加入所述海参脱脂干粉总重量3％的胰蛋白酶，调整悬浊液pH至8.8，于45℃酶解5h，而后对酶解液执行沸水浴12min；3)而后将悬浊液在55℃中保持一定时间，加入海参脱脂干粉重量3％碱性蛋白酶后调节pH至9，每隔25min调节一次pH至9，酶解6.5h后，置于沸水浴中灭酶活10min，将上述酶解液在5000r/min条件下进行离心20min，取上清液得到海参多肽酶解液。在以上技术方案的基础上：所述的海参为梅花参。以上对本专利技术的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术。凡在本专利技术的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海参多肽酶解液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)将海参原料粉碎后得到海参干粉，再采用CO2超临界萃取技术进行脱脂，得到海参脱脂干粉；2)将海参脱脂干粉加水配制成20～30g/L的悬浊液，而后向悬浊液中加入所述海参脱脂干粉总重量2～4％的胰蛋白酶，调整悬浊液pH至8.5～9，于40～50℃酶解4～6h，而后对酶解液执行沸水浴10～15min；3)而后将悬浊液在50～60℃中保持一定时间，加入海参脱脂干粉重量2～4％碱性蛋白酶后调节pH至8.5～9.5，每隔20～30min调节一次pH至8.5～9.5，酶解6～7h后，置于沸水浴中灭酶活10min，将上述酶解液在5000r/min条件下进行离心20min，取上清液得到海参多肽酶解液。

【技术特征摘要】
1.一种海参多肽酶解液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)将海参原料粉碎后得到海参干粉，再采用CO2超临界萃取技术进行脱脂，得到海参脱脂干粉；2)将海参脱脂干粉加水配制成20～30g/L的悬浊液，而后向悬浊液中加入所述海参脱脂干粉总重量2～4％的胰蛋白酶，调整悬浊液pH至8.5～9，于40～50℃酶解4～6h，而后对酶解液执行沸水浴10～15min；3)而后将悬浊液在50～60℃中保持一定时间，加入海参脱脂干粉重量2～4％碱性蛋白酶后调节pH至8.5～9.5，每隔20～30min调节一次pH至8.5～9.5，酶解6～7h后，置于沸水浴中灭酶活10min，将上述酶解液在5000r/min条件下进行离心20min，取上清液得到海参多肽酶解液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述的CO2超临界萃取技术进行脱脂的条件为：萃取温度为58℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：季延滨，李涛，侯继明，
申请(专利权)人：天津振邦水产养殖有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12