本发明专利技术涉及蛋白领域，具体涉及一种具有增强机体免疫力的乳源性生物活性多肽，其氨基酸序列为Ser-Leu-Pro-Gln。经过体外免疫功能促进实验，验证了本发明专利技术的多肽SLPQ能够增强机体免疫力，增强淋巴细胞和巨噬细胞的体外增殖能力，使巨噬细胞一氧化氮诱生量增加，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，而且不会引起机体的免疫排斥反应，同时在消化道中稳定，不会被分解，表明发明专利技术的生物活性多肽SLPQ可以被机体直接吸收发挥其具有的生物活性作用。为开发含有SLPQ的保健品和功能型乳制品奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白领域，具体涉及一种乳源性生物活性多肽SLPQ及其制备和应用。
技术介绍
在牛乳经乳酸菌发酵的过程中，牛乳中的一部分蛋白质被乳酸菌代谢利用，并发生了一系列生理生化反应，使蛋白质变为多肽或者游离的氨基酸，被人体消化吸收或通过小肠上皮细胞的吸收转运直接进入人体的血液循环。在这些多肽中，有一部分具有特殊的生理功能，被称为“生物活性肽”。免疫活性肽是继阿片肽发现后首次从乳中获得并证明其生理活性的一类生物活性多肽。1981年Jolles等人首次发现，利用胰蛋白酶水解人乳蛋白，可以得到一个氨基酸序列为Val-Glu-Pro-1le-Pro-Tyr的六肽，体外实验证明该肽能够增强小鼠腹腔巨曬细胞对绵羊红细胞的吞曬作用。Migliore-Samour等人发现来自酪蛋白的六肽Thr-Thr-Met-Pro-Leu-Trp能够刺激绵羊血红细胞对小鼠腹膜巨噬细胞的吞噬作用以及增强对于肺炎克雷伯菌的抵抗。李素萍等人用合成的乳源免疫调节肽(PGPIPN)饲喂大鼠发现大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用和红细胞相关的免疫调节功能有显著的增强。研究表 明，免疫活性肽不仅能够增强机体免疫力，刺激机体淋巴细胞的增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进细胞因子的释放、提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，而且不会引起机体的免疫排斥反应。免疫活性肽无论是作为功能食品还是药品，其最终都要摄入人体内被人体吸收，只有到达相应的靶器官才能发挥其生理功能。在人体胃肠道复杂的环境下，肽极容易受到胃蛋白酶、胰蛋白酶等一系列酶的影响而发生降解，从而在体内失去生理活性，无法达到预期目的。因此，研究免疫调节肽的抗胃肠道酶降解的能力对于其今后的应用具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种生物活性多肽，其氨基酸序列为Ser-Leu-Pro-Gln(SLPQ, SEQ ID NO:1)。较优的，所述生物活性多肽的来源为乳源性。本专利技术的生物活性多肽SLPQ为乳源性，具体来源于￠-酪蛋白，并且为￠-酪蛋白(SEQ IDNO: 3)第84 87位的氨基酸残基。较优的，所述生物活性多肽具有增强机体免疫力的功能。本专利技术的生物活性多肽可以通过基因工程的方法和化学方法人工合成，也可以从乳制品中通过分离纯化的方法直接获得。本专利技术还公开了编码前述生物活性多肽的核苷酸片段。￠-酪蛋白的氨基酸序列以及核苷酸序列为既有技术，编码￠-酪蛋白第84 87位氨基酸残基的核苷酸片段能编码成熟的生物活性多肽SLPQ。进一步的,编码前述生物活性多肽的核苷酸片段,其序列为:agc ctc cca cag(SEQIDN0:2)。本专利技术第二方面公开了前述生物活性多肽的制备方法，步骤如下:I)发酵:将瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)添加到脱脂乳中进行厌氧发酵，获得瑞士乳杆菌发酵乳；2)多肽的粗提:对步骤I)的瑞士乳杆菌发酵乳进行低温离心分离，取上清液；3)多肽的纯化:a.对步骤2)的上清液进行超滤处理，收集滤液；b.收集的滤液采用反向层析柱S0URSE5RPC ST (4.6X 150mm)进行反相高效液相色谱分离，收集洗脱时间 为21min的多肽混合物；c.采用超高效液相-电喷雾-四级杆-飞行时间质仪分离获得多肽SLPQ。本专利技术所述脱脂乳为经过脱脂处理的乳制品，通常脱脂乳中脂肪含量小于0.1%。较优的，步骤I)所述厌氧发酵的条件为:发酵温度36 38°C，发酵培养15 20h ；优选发酵培养19h。较优的，步骤2)所述低温离心的条件为:4°C,8000 IOOOOrpm,离心15 30min。较优的，步骤3) a所述超滤法所采用的滤膜的截留分子量分别为IOkDa和3kDa。本专利技术采用截留分子量分别为10kDa、3kDa的滤膜，使样品依次通过两张滤膜进行超滤。更优的，步骤3)a所述超滤过程中，压力范围为0.1 0.3MPa，滤液流速为0.8 1.2mL/min。较优的，步骤3 ) b反相高效液相色谱分离法中，流动相A为含有2%乙腈和0.05%TFA的ddH20 ;流动相B为100%乙腈。本专利技术生物活性多肽SLPQ的分子量为444.24Da。本专利技术第三方面公开了前述生物活性多肽在制备增强机体免疫力的食品、保健品及药物中的应用。本专利技术还公开了编码前述生物活性多肽的核苷酸片段在制备增强机体免疫力的食品、保健品及药物中的应用。本专利技术的生物活性多肽SLPQ可以用于酸奶等乳制品食品，并且由于本专利技术的生物活性多肽SLPQ能够通过胃肠道直接吸收不被降解，因此可以用于制备提高免疫力的保健品，或者增强机体免疫力的药物。编码所述生物活性多肽SLPQ的核苷酸片段由于可以用于制备SLPQ，因此，也可以用于制备食品、提高免疫力的保健品，或者增强机体免疫力的药物。本专利技术第四方面公开了一种增强机体免疫力药物，包含前述生物活性多肽SLPQ或前述生物活性多肽SLPQ的衍生物。所述多肽的衍生物，是指在多肽的氨基酸侧链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、磷酸化、酯化或糖基化等修饰，得到的多肽衍生物。本专利技术的生物活性多肽SLPQ能够增强机体免疫力，增强淋巴细胞和巨噬细胞的体外增殖能力，促进巨噬细胞一氧化氮诱生量增加，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，而且不会引起机体的免疫排斥反应，对开发具有增强免疫功能的乳制品和保健品具有十分重要的意义。附图说明图1:瑞士乳杆菌发酵乳与未经发酵处理的脱脂乳超滤后粗提物的质谱对比图(A:3000Da未经发酵的脱脂乳粗提物质谱图，B:3000Da瑞士乳杆菌发酵乳粗提物质谱图)图2:3000Da未经发酵脱脂乳粗提物与3000Da瑞士乳杆菌发酵脱脂乳粗提物分子量差异及丰度比较图3:反相高效液相色谱分离对照发酵乳和瑞士乳杆菌发酵乳中生物活性多肽比较图(a曲线:对照发酵乳反相高效液相色谱215nm的洗脱图谱；b曲线:瑞士乳杆菌发酵乳3000Da上清液反相高效液相色谱215nm的洗脱图谱)图4:B峰的一级质谱和二级质谱原始5:经过Masslynx软件处理过的B峰的二级质谱图(m/z=444)图6:B峰小肽的氨基酸序列以及az，by断裂情况图7:生物活性多肽SLPQ经过消化酶处理前后的总离子流8:生物活性多肽SLPQ经过胃蛋白酶-胰酶处理所得444.24前峰的一级质谱图 图9:生物活性多肽SLPQ经过胃蛋白酶-胰酶处理所得444.24后峰的一级质谱图具体实施例方式在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
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【技术保护点】
一种生物活性多肽，其氨基酸序列为Ser?Leu?Pro?Gln。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张少辉，卢姗姗，孙冠华，马鎏镠，周婕慧，郭海滨，胡迪，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：
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