具有纤维素分解增强活性的多肽及编码其的多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及具有纤维素分解增强活性的多肽及编码其的多核苷酸，具体地涉及具有纤维素分解增强活性的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多核苷酸。本发明专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞以及产生和使用所述多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术申请是基于申请日为2010年9月16日，申请号为201080052019.0(国际申请号为PCT/US2010/049124)、名称为“具有纤维素分解增强活性的多肽及编码其的多核苷酸”的专利技术专利申请的分案申请。关于对在联邦资助的研究和开发下完成的专利技术的权利的声明本专利技术是在能源部授予的合作协议DE-FC36-08GO18080下以政府支持完成的。政府对本专利技术具有一定权利。涉及序列表本申请包含计算机可读形式的序列表，其通过提述并入本文。涉及生物材料的保藏本申请包含对于生物材料保藏的引用，所述保藏通过提述并入本文。专利技术背景
本专利技术涉及具有纤维素分解增强活性的多肽和编码所述多肽的多核苷酸。本专利技术还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞以及产生和使用所述多肽的方法。
技术介绍
纤维素是单糖葡萄糖通过β-1,4-键共价连接的聚合物。许多微生物产生水解β-连接的葡聚糖的酶。这些酶包括内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶。内切葡聚糖酶在随机位置消化纤维素聚合物，使其暴露于纤维二糖水解酶攻击(attack)。纤维二糖水解酶继而从纤维素聚合物的末端释放纤维二糖的分子。纤维二糖是水溶性的β-1,4-连接的葡萄糖二聚体。β-葡糖苷酶将纤维二糖水解成葡萄糖。将含木素纤维素原料(lignocellulosic feedstock)转化为乙醇具有以下优势：大量原料现成可用，避免燃烧或填埋材料的合意性和乙醇燃料的清洁性。木材、农业残余物、草本作物和城市固体废物被认为是用于乙醇生产的原料。这些材料主要由纤维素、半纤维素和木质素组成。一旦将纤维素转化成葡萄糖，葡萄糖容易地由酵母发酵成乙醇。WO 2005/074647公开了来自土生梭孢壳(Thielavia terrestris)的具有纤维素分解增强活性的多肽。WO 2005/074656公开了来自橙橘嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)的具有纤维素分解增强活性的多肽。WO 2007/089290公开了来自里氏木霉(Trichoderma reesei)的具有纤维素分解增强活性的多肽。WO 2009/085935；WO 2009/085859；WO 2009/085864；和WO 2009/085868公开了来自嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)的的具有纤维素分解增强活性的多肽。本领域中有对于供用于降解纤维素材料、具有改善性质的具有纤维素分解增强活性的多肽的需要。本专利技术提供了具有纤维素分解增强活性的多肽的编码所述多肽的多核苷酸。
技术实现思路
本专利技术涉及具有纤维素分解增强活性的分离的多肽，其选自下组：(a)多肽，其具有与SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:12的成熟多肽至少60％序列同一性；与SEQ ID NO:4的成熟多肽至少65％序列同一性；与SEQ ID NO:18的成熟多肽至少70％序列同一性；与SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:16，或SEQ ID NO:22的成熟多肽至少75％序列同一性；与SEQ ID NO:8的成熟多肽至少80％序列同一性；与SEQ ID NO:14的成熟多肽至少85％序列同一性；或者与SEQ ID NO:20的成熟多肽至少90％序列同一性；(b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在中等-高，高或非常高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:11，或SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列，(ii)包含于SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:11，或SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列中的cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；在高或非常高严格条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:15，或SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列，(ii)包含于SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:15，或SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列中的cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；或者在非常高严格条件下与以下杂交：i)SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列，(ii)包含于SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列中的cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；(c)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸具有与SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:5，或SEQ ID NO:11的成熟多肽编码序列至少60％序列同一性；与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列至少65％序列同一性；与SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列至少70％序列同一性；与SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:15，或SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列至少75％序列同一性；与SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列至少80％序列同一性；与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列至少85％序列同一性；或者与SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列至少90％序列同一性；或者其cDNA序列；(d)变体，其包含SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:20，或SEQ ID NO:22的成熟多肽的一个或多个(几个)取代，缺失，和/或插入；和(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽具有纤维素分解增强活性的片段。本专利技术还涉及编码本专利技术的多肽的分离的多核苷酸；包含所述多核苷酸的核酸构建体，重组表达载体和重组宿主细胞；以及产生所述多肽的方法。本专利技术还涉及降解或转化纤维素材料的方法，包括：在本专利技术具有纤维素分解增强活性的多肽的存在下用酶组合物处理所述纤维素材料。本专利技术还涉及产生发酵产物的方法，包括：(a)在本专利技术具有纤维素分解增强活性的多肽的存在下用酶组合物糖化所述纤维素材料；(b)用一种或多种(几种)发酵微生物发酵糖化的纤维素材料以产生发酵产物；和(c)从发酵回收所述发酵产物。本专利技术还涉及发酵纤维素材料的方法，包括：用一种或多种(几种)发酵微生物发酵所述纤维素材料，其中所述纤维素材料经在本专利技术具有纤维素分解增强活性的多肽的存在下用酶组合物的糖化。本专利技术还涉及编码信号肽的多核苷酸，所述信号肽包含或组成为(consisting of)SEQ ID NO:2的氨基酸1至17，SEQ ID NO:4的氨基酸1至19，SEQ ID NO:6的氨基酸1至17，SEQ ID NO:8的氨基酸1至19，SEQ ID NO:10的氨基酸1至21，SEQ ID NO:12的氨基酸1至24，SEQ ID NO:14的氨基酸1至16，SEQ ID NO:16的氨基酸1至18，SEQ ID NO:18的氨基酸1至22，SEQ ID NO:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有纤维素分解增强活性的分离的多肽，其选自下组：(a)多肽，其与SEQ ID NO:20的成熟多肽具有至少90％，例如，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性；(b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在非常高严格条件下与SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列或其cDNA序列，或它们的全长互补链杂交，其中所述非常高严格条件定义为：在42℃，在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml已剪切并且变性的鲑精DNA和50％的甲酰胺中进行预杂交和杂交，并使用2X SSC、0.2％SDS在70℃洗涤三次，每次15分钟；(c)一种多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少90％，例如，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性；(d)变体，其包含SEQ ID NO:20的成熟多肽的一个或几个氨基酸的取代、缺失和/或插入；和(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽具有纤维素分解增强活性的片段。...

【技术特征摘要】
2009.09.17 US 61/243,397;2009.09.18 US 61/243,531;1.一种具有纤维素分解增强活性的分离的多肽，其选自下组：(a)多肽，其与SEQ ID NO:20的成熟多肽具有至少90％，例如，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性；(b)多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸在非常高严格条件下与SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列或其cDNA序列，或它们的全长互补链杂交，其中所述非常高严格条件定义为：在42℃，在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml已剪切并且变性的鲑精DNA和50％的甲酰胺中进行预杂交和杂交，并使用2X SSC、0.2％SDS在70℃洗涤三次，每次15分钟；(c)一种多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸与SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少90％，例如，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或100％序列同一性；(d)变体，其包含SEQ ID NO:20的成熟多肽的一个或几个氨基酸的取代、缺失和/或插入；和(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽具有纤维素分解增强活性的片段。2.权利要求1的多肽，其由包含于pAG78的多核苷酸编码，所述pAG78包含于大肠杆菌NRRL B-50325。3.权利要求1的多肽，其中所述成熟多肽是SEQ ID NO:20的氨基酸17至230。4.一种组合物，其包含权利要求1-3中任一项的多肽。5.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1-3中任一项的多肽。6.一种重组宿主细胞，其用与一个或多个指导所述多肽的产生的调控序列可操作地连接的权利要求5的多核苷酸转化。7.一种产生权利要求1-3中任一项的多肽的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：S梅于兰，R克雷默，P哈里斯，
申请(专利权)人：诺维信股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US