具有分解纤维增强活性的多肽及其编码多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及具有分解纤维增强活性的分离多肽和编码该多肽的分离多核苷酸。本发明专利技术也涉及包括该多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞以及生产和使用该多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
具有分解纤维增强活性的多肽及其编码多核苷酸本专利技术是基于申请日为2005年1月28日，申请号为“201410683392.6”，专利技术名称为“具有分解纤维增强活性的多肽及其编码多核苷酸”的专利申请的分案申请。关于在联邦政府资助的研究和开发下所产生的专利技术权利的声明本专利技术是在能源部授予的主要合同DE-AC36-98GO10337，NREL副合同号ZCO-30017-02的政府支持下产生的。政府具有本专利技术的某些权利。专利技术背景专利
本专利技术涉及具有分解纤维(cellulolytic)增强活性的分离多肽和编码该多肽的分离多核苷酸。本专利技术也涉及包括该多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞以及生产和使用该多肽的方法。相关技术的说明纤维素是通过β-1,4-键共价结合的单糖葡萄糖聚合物。许多微生物生产水解β-连接的葡聚糖的酶。这些酶包括内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡萄糖苷酶。内切葡聚糖酶在随机的位置消化纤维素聚合物，使其打开而受到纤维二糖水解酶的攻击。继而纤维二糖水解酶从该纤维素聚合物的末端释放纤维二糖分子。纤维二糖是葡萄糖的水溶性β-1,4-连接的二聚物。β-葡萄糖苷酶水解纤维二糖为葡萄糖。纤维素原料(feedstock)转化成为乙醇的好处是准备好可利用的大量原料、可以避免燃烧或掩埋该材料，并且乙醇燃料非常洁净。木材、农业废物、草本作物、和城市固体废物已经被认为是乙醇生产的原料。这些材料主要由纤维素、半纤维素和木质素组成。一旦纤维素被转化为葡萄糖，该葡萄糖通过酵母被轻易地发酵成为乙醇。这在改善纤维素原料转化的技术中是非常有益的。本专利技术的目的是提供具有分解纤维增强活性的分离多肽和编码该多肽的分离核酸序列来改善纤维素原料的转化。专利技术概述本专利技术涉及以下：1、具有增强的纤维素分解活性的分离多肽，包括∶[ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ]和[FW]-[TF]-K-[AIV],其中X是任何氨基酸，X(4,5)是在4或5个连续位置的任何氨基酸，以及X(4)是在4个连续位置的任何氨基酸。2、项1的分离多肽，进一步包括∶H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV],[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV]，或H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV]和[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV],其中X是任何氨基酸，X(1,2)是在1个位置或2个连续位置的任何氨基酸，X(3)是在3个连续位置的任何氨基酸，以及X(2)是在2个连续位置的任何氨基酸。3、包括编码项1或2所述多肽的核苷酸序列的分离多核苷酸。4、核酸构建体，其包括与指导所述多肽在表达宿主中产生的一个或多个调控序列可操作连接的项4所述的多核苷酸。5、包括项4的核酸构建体的重组表达载体。6、包括项4的核酸构建体的重组宿主细胞。7、用于生产项1或2所述的多肽的方法，包括(a)在有助于生产该多肽的条件下培养细胞；以及(b)回收该多肽。8、具有增强的纤维素分解活性的分离多肽，选自：(a)具有与SEQIDNO:2的第20至326位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:10的第20至304位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:10的第20至304位氨基酸有至少75％同一性的氨基酸序列的多肽；(b)由至少在中等严谨条件下与下列杂交的多核苷酸编码的多肽：(i)SEQIDNO:1的第388至1332位核苷酸、SEQIDNO:3的第98至821位核苷酸、SEQIDNO:5的第126至978位核苷酸、SEQIDNO:7的第55至678位核苷酸、或SEQIDNO:9的第58至912位核苷酸,(ii)包含于SEQIDNO:1的第388至1332位核苷酸、SEQIDNO:3的第98至821位核苷酸、或SEQIDNO:5的第126至978位核苷酸中的cDNA序列、或包括SEQIDNO:7的第55至678位核苷酸或SEQIDNO:9的第58至912位核苷酸的基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的互补链；以及(c)包括SEQIDNO:2的第20至326位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:10的第20至304位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:10的第20至304位氨基酸中一个或多个氨基酸保守取代、缺失、和/或插入的变体。9、项8的多肽，具有与SEQIDNO:2的第20至326位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:10的第20至304位氨基酸有至少75％同一性的氨基酸序列。10、项9的多肽，具有与SEQIDNO:2的第20至326位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:10的第20至304位氨基酸有至少80％同一性的氨基酸序列。11、项10的多肽，具有与SEQIDNO:2的第20至326位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:10的第20至304位氨基酸有至少85％同一性的氨基酸序列。12、项11的多肽，具有与SEQIDNO:2的第20至326位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:11的第20至304位氨基酸有至少90％同一性的氨基酸序列。13、项12的多肽，具有与SEQIDNO:2的第20至326位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:12的第20至304位氨基酸有至少95％同一性的氨基酸序列。14、项13的多肽，具有与SEQIDNO:2的第20至326位氨基酸、SEQIDNO:4的第18至240位氨基酸、SEQIDNO:6的第20至258位氨基酸、SEQIDNO:8的第19至226位氨基酸、或SEQIDNO:13的第20至304位氨基酸有至少97％同一性的氨基酸序列。15、项8-14中任一项的多肽，包括SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、或SEQIDNO:10的氨基酸序列。16、项8-15中任一项的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.具有增强的纤维素分解活性的分离多肽，选自：(a)多肽，其含有与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:4的第18至240氨基酸具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；(b)多肽，其由与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:3的第98至821位核苷酸具有至少99％序列同一性的多核苷酸编码。

【技术特征摘要】
2004.01.30 US 60/540,6611.具有增强的纤维素分解活性的分离多肽，选自：(a)多肽，其含有与SEQIDNO:4或SEQIDNO:4的第18至240氨基酸具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；(b)多肽，其由与SEQIDNO:3或SEQIDNO:3的第98至821位核苷酸具有至少99％序列同一性的多核苷酸编码。2.包括编码权利要求1的多肽的核苷酸序列的分离多核苷酸。3.核酸构建体，其包括与指导多肽在表达宿主中产生的一个或多个调控序列可操作连接的权利要求2所述的分离多核苷酸。4.包括权利要求3的核酸构建体的重组表达载体或重组宿主细胞。5.包含编码权利要求1所述多肽的基因的核酸构建体，所述基因与由SEQIDNO:3的第47至97位核苷酸组成的编码信号肽的核苷酸序列可操作连接，其中该基因与该核苷酸序列是异源的。6.包括权利要求5的核酸构建体的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：金伯利布朗，保罗哈里斯，伊丽莎白扎雷特斯基，爱德华雷，埃琳娜弗拉森科，基思麦克法兰，艾尔弗雷多洛佩兹德利昂，
申请(专利权)人：诺维信股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US