本发明专利技术涉及蛋白领域，具体涉及一种具有体外抗氧化活性和促进机体免疫活性的乳源性生物活性多肽DELQ，其氨基酸序列为Asp-Glu-Leu-Gln。经过体外抗氧化实验、体外免疫功能促进实验，验证了多肽DELQ具有较好的抗氧化生物学活性和促进细胞免疫的活性，一方面能够清除机体内的自由基，减少自由基对人体的伤害；另一方面，本发明专利技术的生物活性多肽DELQ还能够增强机体免疫力，增强巨噬细胞的吞噬功能，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，而且不会引起机体的免疫排斥反应。对开发具有抗氧化功能及增强免疫功能的乳制品、保健品及药物具有十分重要的意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白领域，具体涉及一种生物活性多肽DELQ及其制备和应用。
技术介绍
在牛乳经乳酸菌发酵的过程中，牛乳中的一部分蛋白质被乳酸菌代谢利用，并发生了一系列生理生化反应，使蛋白质变为多肽或者游离的氨基酸，被人体消化吸收或通过小肠上皮细胞的吸收转运直接进入人体的血液循环。在这些多肽中，有一部分具有特殊的生理功能，被称为“生物活性肽”。氧化反应和氧化代谢对于食物和人体来说都是至关重要的，自由基和活性氧引起了一系列的氧化反应。当过量的自由基形成，它们会超过保护性酶如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的保护作用，从而导致脂质氧化、细胞凋亡等一系列的副作用产生。这一类的氧化反应，不仅影响含脂食物的保质期，也对人体的健康造成了一定的危害，如风湿性关节炎、糖尿病、动脉硬化等。此外，Collins等人2005年研究发现癌症的发生也与DNA的氧化损伤有关。 早期一些人工合成的抗氧化剂如丁基羟基茴香醚(BHA)、2，6- 二叔丁基_4_甲基苯酚(BHT)被运用到食品中，作为脂质的抗氧化剂，但这些人工合成的添加剂对于人体都有潜在的风险。因此，在天然食物来源中寻找安全的抗氧化剂尤为重要。近些年来，人们发现一些食物来源的多肽类物质具有良好的抗氧化作用，如玉米短肽、大豆肽、牛乳多肽等。这些多肽可以通过微生物发酵、消化酶解等多种途径得到，并且大多具有抗氧化活性的多肽是由2 20个氨基酸残基组成，分子量小于6000Da，含有一定量的疏水氨基酸、芳香族氨基酸。免疫活性肽是继阿片肽发现后首次从乳中获得并证明其生理活性的一类生物活性多肽。1981年Jolles等人首次发现，利用胰蛋白酶水解人乳蛋白，可以得到一个氨基酸序列为Val-Glu-Pro-1Ie-Pro-Tyr的六肽，体外实验证明该肽能够增强小鼠腹腔巨曬细胞对绵羊血红细胞的吞曬作用。Migliore-Samour等人发现来自酪蛋白的六肽Thr-Thr-Met-Pro-Leu-Trp能够刺激绵羊血红细胞对小鼠腹膜巨噬细胞的吞噬作用以及增强对于肺炎克雷伯菌的抵抗。李素萍等人用合成的乳源免疫调节肽(PGPIPN)饲喂大鼠发现大鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用和红细胞相关的免疫调节功能有显著的增强。研究表明，免疫活性肽不仅能够增强机体免疫力，刺激机体淋巴细胞的增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进细胞因子的释放、提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，而且不会引起机体的免疫排斥反应。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种生物活性多肽，其氨基酸序列为Asp-Glu-Leu-Gln(SEQIDN0:1)。较优的，所述生物活性多肽的来源为乳源性。本专利技术的生物活性多肽DELQ为乳源性，具体来源于￠-酪蛋白，并且为￠-酪蛋白(SEQ IDNO: 3)第58 61位的氨基酸残基。较优的，所述生物活性多肽具有体外抗氧化活性和增强机体免疫力的功能。本专利技术的生物活性多肽可以通过基因工程的方法和化学方法人工合成，也可以从乳制品中通过分离纯化的方法直接获得。本专利技术还公开了编码前述生物活性多肽的核苷酸片段。￠-酪蛋白的氨基酸序列以及核苷酸序列为既有技术，编码￠-酪蛋白第58飞I位氨基酸残基的核苷酸片段能编码成熟的生物活性多肽DELQ。进一步的，编码前述生物活性多肽的核苷酸片段，其序列为:5’ -gatgaactccag-3’(SEQ IDNO:2)。本专利技术第二方面公开了前述生物活性多肽的制备方法，步骤如下:I)发酵:将瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)添加到脱脂乳中进行厌氧发酵，获得瑞士乳杆菌发酵乳；2)多肽的粗提:对步骤I)的瑞士乳杆菌发酵乳进行低温离心分离，取上清液；3)多肽的纯化:a.对步骤2)的上清液进行超滤处理，收集滤液； b.收集的滤液采用反向层析柱SOURSE 5 RPC ST (4.6X 150mm)进行反相高效液相色谱分离，收集生物活性多肽DELQ。本专利技术所述脱脂乳为经过脱脂处理的牛乳，通常脱脂乳中脂肪含量小于0.1%。较优的，所述厌氧发酵的条件为:发酵温度36 38°C，发酵培养15 20h ;优选发酵培养19h。较优的，步骤2)所述低温离心的条件为:4°C,8000 IOOOOrpm,离心15 30min。较优的，步骤3) a所述超滤法所采用的滤膜的截留分子量分别为IOkDa和3kDa。本专利技术采用截留分子量分别为10kDa、3kDa的滤膜，使样品依次通过两张滤膜进行超滤更优的，步骤3) a所述超滤过程中，压力范围为0.f 0.3MPa，滤液流速为0.8 1.2mL/min。较优的，步骤3 ) b反相高效液相色谱分离法中，流动相A为含有2%乙腈和0.05%TFA的ddH20 ;流动相B为100%乙腈。较优的，步骤3) b反相高效液相色谱分离法中，收集分子量为504.23Da的多肽的洗脱峰，即为生物活性多肽DELQ。在本专利技术反相高效液相色谱法分离过程中，已知DELQ的分子量，收集分子大小为504.23Da的洗脱峰，即为本专利技术的生物活性多肽DELQ。具体的，本专利技术分子大小为504.23Da的洗脱峰其保留时间为24min。本专利技术第三方面公开了前述生物活性多肽在制备抗氧化和/或增强机体免疫力的食品、保健品及药物中的应用。本专利技术的生物活性多肽DELQ可以用于酸奶等乳制品、减少自由基对皮肤伤害的化妆品、并且由于本专利技术的生物活性多肽DELQ能够通过胃肠道直接吸收不被降解，因此可以用于制备提高免疫力的保健品，或者用于制备具有抗氧化和/或增强机体免疫力的药物。本专利技术第四方面公开了一种抗氧化药物，包含前述生物活性多肽DELQ或前述生物活性多肽DELQ的衍生物。本专利技术第五方面公开了一种增强机体免疫力药物，包含前述生物活性多肽DELQ或前述生物活性多肽DELQ的衍生物。所述多肽的衍生物，是指在多肽的氨基酸侧链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、磷酸化、酯化或糖基化等修饰，得到的多肽衍生物。本专利技术生物活性多肽DELQ的有益效果为:本专利技术的乳源性生物活性多肽DELQ具有很好的抗氧化活性和促进机体免疫力活性；一方面能够清除机体内的自由基，减少自由基对人体的伤害；另一方面，本专利技术的生物活性多肽DELQ还能够增强机体免疫力，增强巨噬细胞的吞噬功能，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率，而且能够通过胃肠道直接吸收不被降解，进入体内不会引起机体的免疫排斥反应。对开发具有抗氧化功能及增强免疫功能的乳制品、保健品和药品具有十分重要的意义。附图说明图1:瑞士乳杆菌发酵乳与未经发酵处理的脱脂乳超滤后粗提物的质谱对比图(A:3000Da未经发酵的脱脂乳粗提物质谱图，B:3000Da瑞士乳杆菌发酵乳粗提物质谱图)图2:3000Da未经发酵脱脂乳粗提物与3000Da瑞士乳杆菌发酵脱脂乳粗提物分子量差异及丰度比较图3:反相高效液相色谱分离对照发酵乳和瑞士乳杆菌发酵乳中生物活性多肽比较图(a曲线:对照发酵乳反相高效液相色谱215nm的洗脱图谱；b曲线:瑞士乳杆菌发酵乳3000Da上清液反相高效液相 色谱215nm的洗脱图谱)图4:质量色谱提取图(m/z=504.23)图5:质荷比为504.23的片段的一级质谱6:质荷比为504.23的片段的二级质谱7:质荷比为504.23本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种生物活性多肽，其氨基酸序列为Asp?Glu?Leu?Gln。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张少辉，卢姗姗，孙冠华，马鎏镠，周婕慧，李锡安，占东升，
申请(专利权)人：上海交通大学，浙江熊猫乳品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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