The invention relates to an enzyme-linked immunosorbent assay kit for detecting paraquat and a detection method thereof. The method is sensitive, accurate, rapid, simple in operation and strong in specificity, and is suitable for the detection of a large number of samples. The kit comprises by paraquat antigen ELISA plate, paraquat standard, paraquat antibody solution, paraquat ELISA two anti solution, substrate solution A, substrate liquid B, termination liquid, concentration dilution liquid and condensed washing liquid. The principle of detection of paraquat ELISA kit is a solid phase immunoassay indirect competitive enzyme, the enzyme extracted from the samples, the standard two resistance of working fluid and the corresponding antibody was added to microtiter plate microporous, incubated for a period of time, wash the plate and adding substrate solution A, B chromogenic substrate solution. Agent under the action of the enzyme showed blue, adding the stop solution, the color changed from blue to yellow. The depth of color is inversely proportional to the content of paraquat in the standard or sample. The method can be directly used for the detection of paraquat residues in crops.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽药残留检测
,特别是检测大米中百草枯的酶联免疫试剂盒。
技术介绍
百草枯,化学名称是1-1-二甲基-4-4-联吡啶阳离子盐,是一种快速灭生性除草剂,具有触杀作用和一定内吸作用。能迅速被植物绿色组织吸收,使其枯死。对非绿色组织没有作用。在土壤中迅速与土壤结合而钝化,对植物根部及多年生地下茎及宿根无效。但百草枯对人毒性极大,且无特效解毒药,口服中毒死亡率可达90%以上,目前已被20多个国家禁止或者严格限制使用。我国自2014年7月1日起,撤销百草枯水剂登记和生产许可、停止生产;但保留母药生产企业水剂出口境外使用登记、允许专供出口生产,2016年7月1日停止水剂在国内销售和使用。因此定期对百草枯残留进行检测成为许多国家的监控的必要手段。酶联免疫吸附法是一种准确、可靠、快速、特异的检测方法,适合于大批样品的快速筛选,近年来已广泛应用于食品安全检测行业。本专利技术旨在建立一种检测百草枯的酶联免疫试剂盒及其检测方法。
技术实现思路
为了克服色谱法的不足,本专利技术提供一种检测百草枯的酶联免疫试剂盒及其检测方法。该方法灵敏、准确、快速,操作简便、特异性强,适用于大批样品的快速检测。本专利技术检测百草枯的酶联免疫试剂盒,包括酶标板、百草枯标准品、百草枯抗体工作液、百草枯酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液。本专利技术检测百草枯的酶联免疫试剂盒的制备,包括以下步骤:酶标板的制备、百草枯标准品的制备、百草枯抗体工作液的制备、百草枯酶标二抗工作液的制备、底物液A的制备、底物液B的制备、终止液的制备、浓缩稀释液的制备和浓缩洗涤液的 ...
【技术保护点】
检测百草枯的酶联免疫试剂盒及其检测方法,包括酶标板、百草枯标准品、百草枯抗体工作液、百草枯酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液。
【技术特征摘要】
1.检测百草枯的酶联免疫试剂盒及其检测方法,包括酶标板、百草枯标准品、百草枯抗体工作液、百草枯酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液。2.检测百草枯的酶联免疫试剂盒及其检测方法,包括以下步骤:酶标板的制备、百草枯标准品的制备、百草枯抗体工作液的制备、百草枯酶标二抗工作液的制备、底物液A的制备、底物液B的制备、终止液的制备、浓缩稀释液的制备和浓缩洗涤液的制备。3.根据权利要求2所述的检测百草枯的酶联免疫试剂盒及其检测方法,其特征在于:所述的酶标板制备方法为将百草枯半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联得到百草枯包被抗原,用0.05mol/LpH9.6的碳酸盐(CBS)缓冲液作为包被液,将包被抗原稀释成1:40000比例,100μL/孔,37℃孵育2h,取出酶标板甩掉板内液体,加入稀释后的浓缩洗涤液300μL/孔,洗板2次,30s/次,然后加入0.5%牛血清白蛋白(BSA)封闭,150μL/孔,37℃放置1.5h,弃去封闭液直接拍干,拍干后的酶标板放置恒温间(25℃)晾干,抽检合格后将酶标板真空密封于4℃条件下保存。4.根据权利要求2所述的检测百草枯的酶联免疫试剂盒及其检测方法,其特征在于:百草枯标准品的浓度分别为0mg/kg、0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.9mg/kg、2.7mg/kg、8.1mg/kg。5.根据权利要求2所述的检测百草枯的酶联免疫试剂盒及其检测方法,其特征在于:所述的百草枯抗体工作液是采用百草枯人工抗原免疫小鼠得到单克隆抗体,用抗...
【专利技术属性】
技术研发人员:洪霞,张淑雅,
申请(专利权)人:镇江先创生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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