前胃泌素和肝病理制造技术

测定了前胃泌素水平以诊断一种或多种肝病理。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】前胃泌素和肝病理I.对相关申请的交叉参考本申请要求在2010年I月8日提交的美国临时申请号61/293，557的优先权，将所述临时申请的内容完整并入本文作为参考。2.对序列表的参考序列表随同本文同时提交。3.背景本公开提供用于诊断和筛选肝病理，包括肝增生或者退化疾病的方法和材料；并·且更特别地，提供用于定量或测定前胃泌素水平的方法和材料来诊断肝病理。3. I.胃泌素和前胃泌素的背景胃泌素是肠肽激素，其作为胃酸分泌的刺激剂行使功能。在成体哺乳动物中，它主要由胃窦的G细胞产生，并且在小肠上部和胰脏内产生的程度不同，在结肠内几乎没有可检测的量。最近，对在结肠直肠致癌作用中肽的胃泌素家族作用有越来越多的兴趣。特别地，有证据表明以前被认为是无活性的胃泌素的前体形式(前胃泌素和甘氨酸延伸的胃泌素)，在结直肠癌的发展中起作用。胃泌素基因被翻译成101个氨基酸的多肽，称作前胃泌素原，其包含信号序列(下划线)，信号序列被切割，产生一个80个氨基酸的多肽前胃泌素。依次地，前胃泌素被加工以便提供裂解产物G34，其是相应于前胃泌素残基38至71的一个34个氨基酸的肽。然后G34在它的羧基末端用甘氨酸残基延伸，产生甘氨酸延伸的胃泌素(G34-Gly)15前胃泌素切割的副产物是6个氨基酸的肽，称作C末端侧翼肽或者CTFP，其在序列中对应于前胃泌素的残基55到72并且称作G17-Gly。G34-Gly和G17-Gly的C-末端甘氨酸的去除，接着C 一末端酰胺化，分别产生G34和G17,其都被C-末端酰胺化。大部分前胃泌素的测定法不能区分前胃泌素和其他的胃泌素基因产物，导致全长的前胃泌素水平的不准确测量。因为前胃泌素水平在一种或者多种疾病中起作用，希望有用于测量前胃泌素的准确方法。3.2.肝病理背景许多肝病理是很难诊断的。例如，通过常规的血液测试不能诊断肝癌。通常需要医生用肿瘤标记甲胎蛋白(AFP)筛查。然而，升高的AFP不是对肝癌特异的。在成人中，在三种情况下肝癌、生殖细胞肿瘤(睾丸和卵巢的癌症)、肝的转移癌(起源于其他器官的癌症)可见高血液水平(超过500ng/mL)的AFP。此外，AFP对于肝癌的敏感性是约60%。换句话说，只有在约60%的肝癌患者中可见升高的AFP血液水平；40%的肝癌患者中具有正常的AFP水平。另一种难于诊断的肝病理是肝硬化，其是特征为肝斑痕形成和肝功能不全的慢性肝疾病的结果。诊断的金标准是通过肝的活组织检查，其是侵入性的技术。丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒(HCV)引起的影响肝的传染病。这种感染通常是无症状的，但是一旦建立感染，慢性感染可以进展到肝的斑痕形成(纤维化)并且晚期斑痕形成(硬化)。通常通过血清学的筛选诊断丙型肝炎。将期望检测和/或证实丙型肝炎的其他手段。因为肝癌、肝硬化和丙型肝炎的早期和准确检测具有增加患者存活率的可能，现在并且长期需要诊断或者检测这些病理的方法，所述病理包括患者患有超过一种或者全部上述疾病的的情况。4.概述已经发现尽管具有一种或者两种肝病理的患者可以显示出升高的人前胃泌素(hPG)水平，但是具有肝癌、丙型肝炎和肝硬化的患者显示极其升高的hPG水平，其超过具有这些病症的一种或者两种的患者显示出的hPG水平的仅仅相加的结果。基于本公开，患者的hPG血浆或血清水平可以用于为肝病理分配危险度系数。此外，hPG的过量的血清或者血浆水平可用于诊断患有肝癌、丙型肝炎和肝硬化的患者。通过本公开的方法可以诊断的肝癌包括原发性肝癌(例如肝细胞癌，起源于肝的癌)和继发性肝癌。本申请也提供了诊断方法，其中，如果检测到了高于阈值(例如，至少约 400，450，500，550，600，650，700或者750pM)的人前胃泌素(hPG)水平，那么鉴定患者患有肝疾病。在具有比肝疾病平均发生率更高的群体中，例如，在吸毒者或者嗜酒者群体中或者居住在比肝疾病平均发生率更高的地理区域的人中，这种方法也可用作标准诊断。因此，也提供了在这些群体中检测升高的hPG水平的方法。基于患者的hPG水平，本公开也提供将患者分配至一种或者多种肝病理如肝癌(肝细胞癌)、丙型肝炎和肝硬化的风险群体中的方法。例如，hPG的第一个阈值水平可以表明患者对于肝病理处于“低风险”;hPG的第二个阈值水平可以表明患者对于肝病理处于“升高的风险” ;hPG的第三个阈值水平可以表明患者对于肝病理处于“高风险”，hPG的第四个阈值水平可以表明患者对于肝病理处于“严重风险”。定量的hPG水平也可以与额外的生物标记如甲胎蛋白(“AFP”)一起使用来帮助鉴定、诊断、区分肝病理或者对其进行风险分配。本文公开的方法可以用于确定合适的疗程。在某些情况下，筛选已经诊断为具有肝病理的患者以确定是否要保证进一步的治疗选项是有用的。因此，在某些方面，在患者生物学样品的hPG水平的基础上，将以前诊断为具有肝病理的患者诊断为患有另外的肝疾病。以前的肝病理可以是丙型肝炎、肝硬化或者肝癌如肝细胞癌。有利地，非常高的hPG水平(例如，在高于400、450、500、550、600、650、700pM的hPG浓度)表明患者具有全部这些疾病。可以对患者进行进一步的测试来鉴定具体的肝疾病，所述患者的hPG水平表明该患者患有肝病理，或者所述患者以前被诊断具有肝病理并且其hPG水平比一种肝疾病指示的更高。可以对所述患者测试肝癌、丙型肝炎或者肝硬化。使用本公开的方法已经鉴定具有一种或者多种肝病理的患者，可以按照它们的病症被治疗。经历肝病理治疗的患者也可以对他们的hPG水平进行监测来评估疾病的进展和/或治疗效果。hPG水平保持在阈值之上的患者可以继续接受治疗。在实施本文公开的方法中，如果测量的hPG水平是准确的，那么测量hPG水平的具体测定法不是关键的。在一些实施方案中，将抗_hPG抗体方便地用于测量hPG水平。如提到的，hPG被机体切割成更小的肽。优选地，在本公开的方法中，使用不检测出前胃泌素加工的副产物的测定法来检测和测量hPG以避免不准确的hPG测量。通过使用与全长hPG结合但不与更小的hPG肽结合的抗体可以实现此目的。通过使用两种不同的抗体也可以实现此目的，所述抗体都与全长hPG结合，但是在所述两种抗体与较小的hPG肽结合的程度上，不与相同的较小的hPG肽结合。在这种测定法中，两种抗体都结合的唯一产物是全长hPG。例如，与hPG的C末端和N末端表位结合的抗体允许检测和测量全长hPG，而不检测和测量较小的hPG肽。因此，在某些方面，本公开提供诊断患者的方法，其中生物学样品与第一抗体接触，所述第一抗体结合hPG的第一表位，优选地C末端或者N末端表位，并且与第二抗体接触，所述第二抗体结合hPG的不同的表位，优选地在另一末端的表位。在使用抗hPG的抗体来检测和测量hPG的示例性方法中，通过将来自患者的样品接触至少一种抗hPG抗体，并且基于与抗体结合的hPG的量，确定样品是否具有高于阈值的hPG浓度，例如，至少约400、450、500、550、或者600pM，通常400、450或者500pM，鉴定患者患有肝疾病。本公开的方法通常包括测定生物学样品的hPG水平。所述生物学样品可以是血浆或者血清。也可以使用组织水平；然而，当患者患有肝病理时，预期组织中的测量的hPG水平与血清或者血浆中发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.01.08 US 61/293,5571.诊断患者是否患有肝疾病的方法，其包括通过生物化学测定法测定在来自患者的样品中至少约400pM的人前胃泌素(hPG)浓度的步骤。2.权利要求I的方法，其中所述患者具有选自由肝癌、丙型肝炎和肝硬化组成的组的一种或者两种疾病。3.权利要求I或者权利要求2的方法，其中所述肝癌是肝细胞癌。4.权利要求I至3中任一项的方法，其中所述浓度是至少约500pM。5.权利要求I至4中任一项的方法，其中所述测定包括来自所述患者样品中的hPG与至少一种抗体的结合。6.权利要求5的方法，其中所述测定包括来自所述患者的样品中的hPG与多种抗体的彡口口 7.权利要求I至6中任一项的方法，其中所述患者属于具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的群体。8.权利要求I至7中任一项的方法，其中所述患者居住在具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的地理区域。9.权利要求I至8中任一项的方法，其中所述患者具有药物或者酒精依赖性状况。10.诊断患者是否患有肝疾病的方法，其包括步骤 Ca)将来自患者的样品接触至少一种抗-hPG抗体；和 (b)基于与所述至少一种抗体结合的hPG的量测定样品是否具有至少约400pM的hPG浓度。11.权利要求10的方法，其中所述样品与特异针对hPG的第一表位的第一抗体以及特异针对hPG的不同表位的第二抗体接触。12.权利要求10或权利要求11的方法，其中所述抗体的一种带有可检测的标记并且通过对所述可检测标记的水平定量测定结合的hPG的水平。13.权利要求10至12任一项的方法，其中所述患者属于具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的群体。14.权利要求10至13任一项的方法，其中所述患者居住在具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的地理区域。15.权利要求10至14任一项的方法，其中所述患者具有药物或者酒精依赖性状况。16.诊断患者是否患有肝疾病的方法，其中患者已经被诊断具有除了丙型肝炎以外的肝病理，所述方法包括测定来自所述患者的样品中的人前胃泌素(hPG)水平的步骤，其中如果前胃泌素水平高于阈值，那么表明患者患有丙型肝炎。17.权利要求16的方法，其中所述阈值是至少400pM。18.权利要求16的方法，其中所述患者属于具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的群体。19.权利要求16的方法，其中所述患者居住在具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的地理区域。20.权利要求16的方法，其中所述患者具有药物或者酒精依赖性状况。21.诊断患者是否患有肝疾病的方法，其中所述患者已经被诊断具有第一肝病理，所述方法包括测定来自所述患者样品中的人前胃泌素(hPG)水平的步骤，其中如果前胃泌素水平高于阈值，那么表明所述患者患有至少一种额外的肝病理。22.权利要求21的方法，其中所述阈值是至少400pM。23.权利要求21或权利要求22的方法，其中所述患者属于具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的群体。24.权利要求21至23中任一项的方法，其中所述患者居住在具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的地理区域。25.权利要求21至24中任一项的方法，其中所述患者具有药物或者酒精依赖性状况。26.诊断患者是否患有肝疾病的方法，其包括使用生物化学测定检测来自被诊断具有第一种肝病理的患者的样品中人前胃泌素(hPG)水平的步骤，所述人前胃泌素水平指示多种肝病理。27.权利要求26的方法，其中所述第一种肝病理选自由肝硬化、丙型肝炎和肝细胞癌组成的组。28.权利要求26或27中的任一项的方法，其中所述水平是至少400pM。29.权利要求26至28中任一项的方法，其中所述患者属于具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的群体。30.权利要求26至29中任一项的方法，其中所述患者居住在具有比丙型肝炎的平均发生率更高发生率的地理区域。31.权利要求26至30中任一项的方法，其中所述患者具有药物或者酒精依赖性状况。32.检测至少具有一种非肝病理的患者的肝病理的发展的方法，其包括使用生物化学测定检测来自患者的样品中的指示所述肝病理的发展的...

【专利技术属性】
技术研发人员：JF·弗洛克，L·胡胡，
申请(专利权)人：拜若提，
类型：
国别省市：