一种食品中沙丁胺醇的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种食品中沙丁胺醇的检测试剂盒，包括偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠、复溶液和磁铁；偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠是由沙丁胺醇单克隆抗体与磁珠的质量比为1：20～40混合并溶于二（2‑羟乙基）亚胺基三（羟甲基）甲烷缓冲液中偶联制备而成；沙丁胺醇单克隆抗体是由沙丁胺醇半抗原与兔血清白蛋白得到的偶联物作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备获得；沙丁胺醇半抗原是采用混合酸酐法将沙丁胺醇与鸡卵清白蛋白偶联而得。本发明专利技术试剂盒具有较高的特异性和准确性，对沙丁胺醇的捕获浓度可达到25μg/g，样品添加回收率≥88.2%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品检测
，具体是一种食品中沙丁胺醇的检测试剂盒。
技术介绍
β-肾上腺素受体激动剂，简称β-激动剂，是动物源性食品中检出率最高、危害最严重的化学性残留危害物。我国农业、卫生及食品药品监督管理等部门均明令禁止在畜禽养殖和食用农产品中添加β-激动剂。沙丁胺醇为选择性β2受体激动剂，能有效地抑制组胺等致过敏性物质的释放，防止支气管痉挛。作为药物，沙丁胺醇广泛用于治疗哮喘等呼吸系统疾病，但摄入过量对人体危害较大，对于高血压、糖尿病等患者尤其危险。人如果摄入量过大或无病摄入该药，就可能出现副作用或中毒事故，表现为：肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、肌肉痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗。目前，沙丁胺醇残留量常用的仪器分析检测高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用技术等。由于上述检测方法的样品前处理均需要使用净化装置，包括C18柱、石墨化碳固相萃取柱、弗罗里硅土固相萃取柱、硅胶SPE固相萃取柱等。上述固相萃取柱价格昂贵，约为500～2000元/支，且净化步骤繁琐，需要多种有机溶剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种低成本、分离操作简便、检测结果准确的食品中沙丁胺醇的检测试剂盒。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种食品中沙丁胺醇的检测试剂盒，包括偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠、复溶液和磁铁；所述的偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠是由沙丁胺醇单克隆抗体与磁珠的质量比为1：20～40混合并溶于二（2-羟乙基）亚胺基三（羟甲基）甲烷缓冲液中偶联制备而成；所述的沙丁胺醇单克隆抗体是由沙丁胺醇半抗原与兔血清白蛋白得到的偶联物作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备获得；所述的沙丁胺醇半抗原是采用混合酸酐法将沙丁胺醇与鸡卵清白蛋白偶联而得。作为本专利技术进一步的方案：所述的沙丁胺醇半抗原的具体制备步骤为：将0.5mmol硫酸沙丁胺醇溶于15～18ml无水乙醇中，加入0.5mmol戊二酸酐，室温下反应3.6～4.0h，离心，将下层固体溶于12～16ml的N，N-二甲基甲酰胺，加入0.5mmol三正丁胺和0.5mmol氯甲酸异丁酯，继续反应2.0～2.5h；将上述反应液加入到14～18ml含有7～8mg/ml鸡卵清白蛋白的磷酸缓冲液中，室温反应过夜；将上述反应液用磷酸缓冲液透析4～5次，冷冻干燥，得到沙丁胺醇半抗原。作为本专利技术进一步的方案：所述的复溶液为含有0.55～0.70wt.%兔血清白蛋白、0.06～0.08wt.%吐温-20、0.01～0.015wt.%大庆霉素的磷酸盐缓冲液，偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠在复溶液中保存。作为本专利技术进一步的方案：或者含有0.58～0.62wt.%兔血清白蛋白、0.10～0.12wt.%吐温-20、0.008～0.012wt.%大庆霉素的pH值7.3～7.5的三羟甲基氨基甲烷-硼酸电泳缓冲液，偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠在复溶液中保存。作为本专利技术进一步的方案：所述的磁铁产生外加磁场，使偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠聚集在磁铁上，达到分离磁珠的目的。利用所述的食品中沙丁胺醇的检测试剂盒进行检测的方法，步骤为：用试剂盒进行样品中沙丁胺醇的分离富集；将富集有沙丁胺醇的偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠用甲醇洗脱，回收甲醇液，用于检测分析。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1、本专利技术试剂盒具有较高的特异性和准确性，对沙丁胺醇的捕获浓度可达到25μg/g（每克免疫磁珠可以捕获25μg沙丁胺醇），样品添加回收率≥88.2%；2、本专利技术试剂盒中的偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠与液体经磁力作用容易快速分离开来，分离过程简单，可省去离心和过滤等繁琐的操作过程，节约时间，在撤去外加磁场时，磁珠无磁性记忆，能够均匀分散，不出现聚集现象；3、磁珠具有一定的机械度和化学稳定性，能耐受一定浓度的酸碱溶液和微生物的降解，其结构内的磁性物质不易被氧化，磁性微粒的这种物理化学性质稳定特点，使其磁性不易下降；4、磁珠的润洗和洗脱分别用去离子水和甲醇，0.1mL的偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠只需10mL去离子水润洗、0.5mL甲醇洗脱即可，所用试剂的量较少，磁珠的润洗和洗脱过程较环保。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术实施例中，一种食品中沙丁胺醇的检测试剂盒，包括偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠、复溶液和磁铁，偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠是由沙丁胺醇单克隆抗体与磁珠的质量比为1：20～40混合并溶于二（2-羟乙基）亚胺基三（羟甲基）甲烷缓冲液中偶联制备而成，沙丁胺醇单克隆抗体是由沙丁胺醇半抗原与兔血清白蛋白得到的偶联物作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备获得；复溶液为含有0.55～0.70wt.%兔血清白蛋白、0.06～0.08wt.%吐温-20、0.01～0.015wt.%大庆霉素的磷酸盐缓冲液或者含有0.58～0.62wt.%兔血清白蛋白、0.10～0.12wt.%吐温-20、0.008～0.012wt.%大庆霉素的pH值7.3～7.5的三羟甲基氨基甲烷-硼酸电泳缓冲液，偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠在复溶液中保存。磁铁产生外加磁场，使偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠聚集在磁铁上，达到分离磁珠的目的。一、试剂盒的各组分的制备1、沙丁胺醇半抗原合成将0.5mmol硫酸沙丁胺醇溶于15～18ml无水乙醇中，加入0.5mmol戊二酸酐，室温下反应3.6～4.0h，离心，将下层固体溶于12～16ml的N，N-二甲基甲酰胺，加入0.5mmol三正丁胺和0.5mmol氯甲酸异丁酯，继续反应2.0～2.5h；将上述反应液加入到14～18ml含有7～8mg/ml鸡卵清白蛋白的磷酸缓冲液中，室温反应过夜（大约16h）；将上述反应液用磷酸缓冲液透析4～5次，冷冻干燥，得到沙丁胺醇半抗原。2、免疫原的制备取8～10mL沙丁胺醇半抗原，溶解于1mLN,N-二甲基甲酰胺中，得到沙丁胺醇半抗原溶液；取25～30mg二氯乙烷和N-羟基琥珀酰亚胺用0.2～0.5mL水充分溶解后，加入沙丁胺醇半抗原溶液中，室温下搅拌24h，即可得到反应液A；称取兔血清白蛋白50mL，使之充分溶解在4mL的pH值为7.2的磷酸盐缓冲液中，接着缓慢滴加反应液A，并于室温下搅拌24h；用0.01mol/L的磷酸盐缓冲液于4℃透析3天，每天换5次透析液，以除去未反应的小分子物质，得到沙丁胺醇免疫原；分装，于-20℃保存，得免疫原，备用。3、沙丁胺醇单克隆抗体的制备1）动物免疫：用上述制备出的免疫原按100μg/只，以生理盐水溶解免疫原与弗氏完全佐剂等体积混匀，颈背部皮下注射免疫6～8周龄Balb/c雌鼠，初次免疫后第7、14、28天以免疫原与弗氏不完全佐剂等体积混匀，各追加免疫一次，融合前3天以免疫复合物100μg/只，不加弗氏佐剂再追加免疫一次。2）细胞融合：按常规方法进行，取免疫小鼠的脾细胞与处于对数生长期的小鼠骨髓瘤细胞混合，然后在45秒内缓慢加入预热的聚乙二醇4000进行融合，用HA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食品中沙丁胺醇的检测试剂盒，其特征在于，包括偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠、复溶液和磁铁；所述的偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠是由沙丁胺醇单克隆抗体与磁珠的质量比为1：20～40混合并溶于二（2‑羟乙基）亚胺基三（羟甲基）甲烷缓冲液中偶联制备而成；所述的沙丁胺醇单克隆抗体是由沙丁胺醇半抗原与兔血清白蛋白得到的偶联物作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备获得；所述的沙丁胺醇半抗原是采用混合酸酐法将沙丁胺醇与鸡卵清白蛋白偶联而得。

【技术特征摘要】
1.一种食品中沙丁胺醇的检测试剂盒，其特征在于，包括偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠、复溶液和磁铁；所述的偶联沙丁胺醇单克隆抗体的磁珠是由沙丁胺醇单克隆抗体与磁珠的质量比为1：20～40混合并溶于二（2-羟乙基）亚胺基三（羟甲基）甲烷缓冲液中偶联制备而成；所述的沙丁胺醇单克隆抗体是由沙丁胺醇半抗原与兔血清白蛋白得到的偶联物作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备获得；所述的沙丁胺醇半抗原是采用混合酸酐法将沙丁胺醇与鸡卵清白蛋白偶联而得。2.根据权利要求1所述的食品中沙丁胺醇的检测试剂盒，其特征在于，所述的沙丁胺醇半抗原的具体制备步骤为：将0.5mmol硫酸沙丁胺醇溶于15～18ml无水乙醇中，加入0.5mmol戊二酸酐，室温下反应3.6～4.0h，离心，将下层固体溶于12～16ml的N，N-二甲基甲酰胺，加入0.5mmol三正丁胺和0.5mmol氯甲酸异丁酯，继续反应2.0～2.5h；将上述反应液加入到14～18ml含有...

【专利技术属性】
技术研发人员：张进，吴念绮，周朱晨，张根义，胡彬，朱倩倩，
申请(专利权)人：百奥森江苏食品安全科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32