本发明专利技术公开了一种食品中三聚氰胺的检测试剂盒，包括：1）三聚氰胺校准品；2）三聚氰胺‑羧基磁珠连接物试剂；3）酶结合物；4）化学发光底物；5）清洗液。本发明专利技术通过三聚氰胺与固相载体直接稳定连接的方法，既可保证与固相载体连接的稳定性、又能保证三聚氰胺分子得到充分暴露，同时还通过引入磁性微粒扩大有效反应面积，建立了灵敏度更高、反应时间更短的三聚氰胺化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒可适用于各种发光检测仪器。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品检测
，具体是一种食品中三聚氰胺的检测试剂盒。
技术介绍
三聚氰胺（Melamine），俗称密胺、蛋白精，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，为纯白色单斜棱晶体。三聚氰胺是一种用途广泛的有机化工原料，最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂的原料，还可以用作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。食品工业上通常采用凯氏定氮法，通过测定氮含量来推算蛋白质含量，三聚氰胺的含氮量为66％，常被不法分子违法添加到食品中，以造成蛋白质含量达标的假象。然而，这种添加三聚氰胺的食品不仅没有真正增加蛋白质的含量，其毒副作用反而会给我们的身体健康带来危害。由于三聚氰胺具有较强的黏性，进入人体后水解生成三聚氰胺，容易在体内吸附形成结石的草酸、鞣酸及钙等物质，并沉淀在泌尿系统中。长期摄入三聚氰胺会造成泌尿系统损害，会损害人体和动物的生殖、泌尿系统，产生肾、膀胱结石。2008年，我国爆发了三鹿婴幼儿奶粉添加三聚氰胺的事件，该事件被曝光的起因在于食用了添加三聚氰胺奶粉的婴幼儿产生了肾结石病症。可见，三聚氰胺掺入乳制品的作法已经直接挑战食品安全，并威胁着我们的健康。因此，为了杜绝食品中添加三聚氰胺，需要一种针对食品中的三聚氰胺进行检测的方法。现有的三聚氰胺检测方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、气相色谱-串联质谱法等。这些方法虽然能够实现三聚氰胺的精确检测，但其灵敏度、反应效率均有一定的不足。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵敏度更高、反应时间短的食品中三聚氰胺的检测试剂盒。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种食品中三聚氰胺的检测试剂盒，包括：1）三聚氰胺校准品；2）三聚氰胺-羧基磁珠连接物试剂；3）酶结合物；4）化学发光底物；5）清洗液。作为本专利技术进一步的方案：所述的三聚氰胺标准品的浓度梯度为0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、200ng/ml。作为本专利技术进一步的方案：所述的三聚氰胺-羧基磁珠连接物试剂的主要成份是三聚氰胺偶联羧基磁珠连接物。作为本专利技术进一步的方案：所述的羧基磁珠的粒径为2～3μm，表面活性基团为羧基（-COOH）。作为本专利技术进一步的方案：所述的酶结合物的主要成份是碱性磷酸酶标记的三聚氰胺结合蛋白。作为本专利技术进一步的方案：所述的化学发光底物的主要成份是(3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐)。所述的食品中三聚氰胺的检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：1）配制三聚氰胺校准品；2）将三聚氰胺连接到羧基磁珠上制备连接物，用磁珠缓冲液稀释连接物到一定浓度，制备出连接物试剂；3）用酶标记三聚氰胺结合蛋白，制备酶结合物；4）配制化学发光底物；5）配制清洗液；6）分装以上各试剂，组成成品。作为本专利技术进一步的方案：所述的三聚氰胺校准品的配制，包括以下步骤：1）校准品缓冲液的配制：称取5gTris碱、9g氯化钠（NaCl）、0.6gProclin-300，加入900ml纯化水，用2mol/L柠檬酸钠将pH值调节至7.2±0.1；加入5g兔血清白蛋白，定容至1000ml后复测pH值，使之处于7.2±0.1，0.22μm过滤后于2～8℃保存；2）将三聚氰胺纯品粉末用校准品缓冲液溶解，配制成为1μg/ml的浓溶液，随后依次稀释出5个浓度，分别为：10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、200ng/ml；加上0点，共6个浓度的校准品梯度值。作为本专利技术进一步的方案：所述的三聚氰胺-羧基磁珠连接物试剂的制备，包括以下步骤：1）准确称取三聚氰胺5mg，溶解于纯水中，终浓度为2.5mg/ml，得到三聚氰胺溶液；2）配制pH值7.0的25mmol/L的磷酸盐缓冲液：称取NaH2PO4·H2O1.5g、Na2HPO4·2H2O2.5g、氯化钠（NaCl）3g，加入900ml纯化水，用2mol/L柠檬酸钠或碳酸氢钠将pH值调节至7.0±0.1，定容至1000ml后复测pH值，使之处于7.0±0.1，0.22μm过滤后于2～8℃保存；3）配制5mg/ml的磺基琥珀酰亚胺4-[N-甲基马来酸]-1-羧环己烷（SMCC），用二甲基亚砜（DMSO）溶解；4）往三聚氰胺溶液中加入80μL的5mg/ml的磺基琥珀酰亚胺4-[N-甲基马来酸]-1-羧环己烷（SMCC）进行活化，20～22℃反应40分钟，反应过程中充分混匀；5）量取10mg羧基磁珠，将羧基磁珠放置于磁架上静置2分钟，移除上清，用pH＝7.0的25mmol/L磷酸盐缓冲液洗涤三次后加入磷酸盐缓冲液保存，使磁珠浓度为20mg/ml；6）将活化后的三聚氰胺溶液加入清洗后的羧基磁珠中，并将反应液中磁珠浓度调整为5mg/ml，20～22℃反应35分钟，反应过程中充分混匀；7）配制磁珠缓冲液：称取12gTris碱、9g氯化钠（NaCl）、0.5ml吐温-20、1gProclin-300，加入900ml纯化水，用2mol/L柠檬酸钠将pH值调节至7.2±0.1；加入1g干酪素钠，定容至1000ml后复测pH值，使之处于7.2±0.1，0.22μm过滤后于2～8℃保存；8）反应完成后移除上清，用25mmol/L磷酸盐缓冲液洗涤三次后加入1ml磁珠缓冲液进行保存；使用时用磁珠缓冲液稀释成浓度为0.03mg/ml的工作液。作为本专利技术进一步的方案：所述的酶结合物的制备，包括以下步骤：1）取碱性磷酸酶1.0mg，将浓度调整为6mg/ml；2）称取5mg磺基琥珀酰亚胺4-[N-甲基马来酸]-1-羧环己烷（SMCC），用二甲基亚砜（DMSO）进行溶解，终浓度为15mg/ml，加入5μL至碱性磷酸酶中，20～22℃反应15分钟；3）用分子筛层析法根据分子量的差别对反应混合物进行纯化，收集活化后的碱性磷酸酶溶液；4）取纯品三聚氰胺结合蛋白0.5mg，加入活化后的碱性磷酸酶缓冲液中，2～8℃反应4小时，最后用分子筛层析法将酶标记的三聚氰胺结合蛋白提纯出来；5）酶结合物缓冲液配制：称取12g三羟甲基氨基甲烷（Tris）、9g氯化钠（NaCl）、6g甘油、0.6gProclin-300，加入900ml纯化水，用2mol/L柠檬酸钠将pH值调节至7.2±0.1；加入10g兔血清白蛋白，定容至1000ml后复测pH值，使之处于7.2±0.1，0.22μm过滤后于2～8℃保存；6）将结合物用酶结合物缓冲液稀释至酶标记的三聚氰胺结合蛋白浓度为2μg/ml即为工作液。作为本专利技术进一步的方案：所述的化学发光底物的配制，包括以下步骤：准确称取3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐（AMPPD）0.5g、三羟甲基氨基甲烷（Tris）18g、氯化钠（NaCl）100g、十六烷基三甲基氯化铵（CTAC）0.02g，纯化水定容至1000ml，调整化学发光底物溶液pH值为9.4±0.05。作为本专利技术进一步的方案：所述的清洗液的配制，包括以下步骤：称取1g三羟甲基氨基甲烷（Tris）、8.5g氯化钠（NaCl）、1g吐温-20，加入纯化水约900ml，混匀至各试剂溶解，用2mol/L柠檬酸钠溶液调整溶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种食品中三聚氰胺的检测试剂盒，其特征在于，包括：1）三聚氰胺校准品；2）三聚氰胺‑羧基磁珠连接物试剂；3）酶结合物；4）化学发光底物；5）清洗液。
【技术特征摘要】
1.一种食品中三聚氰胺的检测试剂盒，其特征在于，包括：1）三聚氰胺校准品；2）三聚氰胺-羧基磁珠连接物试剂；3）酶结合物；4）化学发光底物；5）清洗液。2.根据权利要求1所述的食品中三聚氰胺的检测试剂盒，其特征在于，所述的三聚氰胺标准品的浓度梯度为0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、200ng/ml。3.根据权利要求1所述的食品中三聚氰胺的检测试剂盒，其特征在于，所述的三聚氰胺-羧基磁珠连接物试剂的主要成份是三聚氰胺偶联羧基磁珠连接物，所述的羧基磁珠的粒径为2～3μm，表面活性基团为羧基（-COOH）。4.根据权利要求1所述的食品中三聚氰胺的检测试剂盒，其特征在于，所述的酶结合物的主要成份是碱性磷酸酶标记的三聚氰胺结合蛋白。5.根据权利要求1所述的食品中三聚氰胺的检测试剂盒，其特征在于，所述的化学发光底物的主要成份是(3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐)。6.根据权利要求1～5任一所述的食品中三聚氰胺的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）配制三聚氰胺校准品；2）将三聚氰胺连接到羧基磁珠上制备连接物，用磁珠缓冲液稀释连接物到一定浓度，制备出连接物试剂；3）用酶标记三聚氰胺结合蛋白，制备酶结合物；4）配制化学发光底物；5）配制清洗液；6）分装以上各试剂，组成成品。7.根据权利要求6所述的食品中三聚氰胺的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的三聚氰胺-羧基磁珠连接物试剂的制备，包括以下步骤：1）准确称取三聚氰胺5mg，溶解于纯水中，终浓度为2.5mg/ml，得到三聚氰胺溶液；2）配制pH值7.0的25mmol/L的磷酸盐缓冲液：称取NaH2PO4·H2O1.5g、Na2HPO4·2H2O2.5g、氯化钠3g，加入900ml纯化水，用2mol/L柠檬酸钠或碳酸氢钠将pH值调节至7.0±0.1，定容至1000ml后复测pH值，使之处于7.0±0.1，0.22μm过滤后于2～8℃保存；3）配制5mg/ml的磺基琥珀酰亚胺4-[N-甲基马来酸]-1-羧环己烷，用二甲基亚砜溶解；4）往三聚氰胺溶液中加入80μL的5mg/ml的磺基琥珀酰亚胺4-[N-甲基马来酸]-1-羧环己烷进行活化，20～22℃反应40分钟，反应过程中充分混匀；5）量取10mg羧基磁珠，将羧基磁珠放置于磁架上静置2分钟，移除上清，用pH＝7.0的25mmol/L磷酸盐缓冲液洗涤三次后加入磷酸盐缓冲液保存，使磁珠浓度为20mg/ml；6）将活化后的三聚氰胺...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴敏芳，徐静，赵春城，胡勇，蒋韦艳，刘金杰，朱倩倩，
申请(专利权)人：无锡艾科瑞思产品设计与研究有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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