本发明专利技术公开了一种同时定量测定三聚氰胺和三聚氰酸含量的方法，通过探索发现一种能够使两者在非强酸强碱条件下良好共溶的溶剂，使检测结果真实准确。本发明专利技术方法中样品的制备操作简单，能够实现三聚氰胺和三聚氰酸的良好共溶，为准确测定两者的含量值提供了实验基础；本方法中使用的仪器为高效液相色谱(HPLC)，该设备比起液相色谱串联质谱法中用到的设备便宜、易得，而且使用的溶剂和流动相对仪器的色谱柱伤害很小，检测过程快捷、经济；将本发明专利技术方法应用到同时定量检测食品中的三聚氰胺和三聚氰酸含量，得到的检测结果同样准确可信，不仅适用于大规模的样品检测，同时也广泛适用于各类需要检测蛋白质含量的样品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及食品检测领域，特别是设及一种对Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸含量的同时定 量检测方法及运种方法的应用。
技术介绍
阳00引立聚氯胺（Melamine)俗称蛋白精，是一种立嗦类含氮杂环有机化合物，常见的化 工原料，可用于合成塑料、涂料、纺织物防摺防缩处理剂、耐热装饰薄板、防潮纸、灰色皮革 较皮剂等。Ξ聚氯胺对人体（尤其是婴幼儿）的泌尿系统、生殖系统有毒性，甚至可W导致 死亡，因此，国家食品质量监督检验中屯、明确指出，Ξ聚氯胺属于化工原料，不允许添加到 食品中。蛋白质是维持生命活动最需要摄入的营养物质之一，主要由氨基酸组成，其含氮 量一般不超过30%。现阶段通用的蛋白质测试方法采用"凯氏定氮法"，是通过测出含氮量 来估算蛋白质含量。于是，一些不法商家在利益的驱使下，为了使蛋白含量不达标的食品通 过蛋白含量测试，就在食品中添加含氮量为66. 7%的Ξ聚氯胺W增大食品中的含氮量。 阳004]Ξ聚氯酸（切anuricacid)也是一种Ξ嗦类含氮杂环有机化合物，也是常用化工 原料，主要用作除草剂、杀菌剂、漂白剂等的成分或原料。由于Ξ聚氯酸可W被反当类动物 消化，因此也被广泛添加到动物饲料中。奶牛食用添加有Ξ聚氯酸的饲料或喷洒过Ξ聚氯 酸除草剂的青草，分泌出的牛奶里就会含有Ξ聚氯酸。目前已经在宠物饲料及刚挤出的牛 奶里检测到Ξ聚氯酸。 阳0化]研究表明，单独摄入Ξ聚氯酸或Ξ聚氯胺的急性毒性很低，但同时摄入两者比单 独摄入两者之一对肾功能和肝脏组织的损伤要严重得多，运是因为Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸可 W通过分子间氨键生成难溶于水的网状结构晶体，Ξ聚氯胺在人体内还能与Ξ聚氯酸结合 生成难溶的氯尿酸Ξ聚氯胺复合物，形成结石堵塞肾小管，损伤肾脏，造成肾脏衰竭。因此 食品中Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸含量的检测有重要的实际意义。 由于Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸共存时容易生成沉淀，在同时检测二者的过程中若溶剂 使用不当，两者结合成沉淀，最终得到的检测结果是沉淀后样品中两者的余量，而非真实含 量，检测结果严重偏离真实值，致使检测结果不可靠。目前，同时测定Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸 含量的方法主要是液相色谱串联质谱法，运种方法用的溶剂和流动相对仪器的色谱柱损伤 很严重，大大缩短了色谱柱的使用寿命；加之液相色谱串联质谱法用到的仪器设备造价高 昂，而检测的条件对仪器伤害很大，增加了检验成本，不利于大规模样品的测定；此外，运种 方法样品制备过程繁琐，还很容易造成Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸的沉淀，使检测过程难度增加。 因此，尽快探索出一种能够准确、简便、同时检测Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸含量的方法 成为本领域技术人员需要攻克的难题。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，提供一种操作简便、结果 准确可靠的能够同时定量检测Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸的方法。 为实现本专利技术的目的所采用的技术方案是： 同时定量检测样品中Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸含量的方法，包括W下步骤： (1)配制标准溶液：分别用溶剂配制多个Ξ聚氯胺浓度和Ξ聚氯酸浓度分布在 0-120μg/mL的Ξ聚氯胺标准溶液和Ξ聚氯酸标准溶液；其中，所述溶剂为1% (质量体积 百分含量，w/v，g/100mL)的Ξ氯乙酸水溶液或盐酸水溶液与乙腊混合配制而成的；或lOmM 的氨氧化钢水溶液或氨氧化钟水溶液与乙腊混合配制而成的； (2)用高效液相色谱0PLC)检测步骤（1)中各标准溶液的峰面积，紫外检测波长 为 21；3nm; (3)W标准溶液的浓度为横坐标，W对应的峰面积为纵坐标，分别绘制出Ξ聚氯胺 标准曲线和Ξ聚氯酸标准曲线，并得到对应的标准曲线方程； (4)将样品用步骤（1)中所述溶剂稀释或溶解成样品溶液，用HPLC检测样品溶液 的峰面积后，将峰面积数值带入步骤（3)得到的对应的标准曲线方程中，即得到样品中Ξ 聚氯胺和Ξ聚氯酸的含量。 所述溶剂中1 % (质量体积百分含量，w/v，g/100血）的Ξ氯乙酸水溶液或盐酸水 溶液与乙腊的体积比为（2. 5-3. 5) : 1 ;优选的，所述溶剂中Ξ氯乙酸水溶液或盐酸水溶液 与乙腊的混合体积比为3:1。 所述溶剂中lOmM的氨氧化钢水溶液或氨氧化钟水溶液与乙腊的体积比为 (0. 8-1. 2) : 1 ;优选的，所述溶剂中氨氧化钢水溶液或氨氧化钟水溶液与乙腊的混合体积比 优选为1:1。 步骤（2)中高效液相色谱的流动相为lOmM的乙酸锭水溶液与乙腊按体积比 10:90-20:80混合配制而成的混合液；所述流动相中乙酸锭水溶液与乙腊的混合体积比优 选 15:85。 所述Ξ聚氯胺标准溶液和Ξ聚氯酸标准溶液的浓度依次为5μg/mL、10μgAiL、 20μg/mL、30μg/mL、50μg/血、100μg/血。 所述流动相的流速为1.ο血/min,所述高效液相色谱的色谱柱柱溫为35°C。 本专利技术还提供一种同时定量检测食品中Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸含量的方法，利用上 述方法同时定量检测食品中Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸的含量，仅是将步骤（4)中的样品替换成 所述食品，并用步骤（1)中所述溶剂溶解或稀释至其中Ξ聚氯胺浓度或Ξ聚氯酸浓度在 0-120μg/mL内，充分混匀后过滤，得到食品溶液，用HPLC检测食品溶液的峰面积后，将峰 面积数值带入对应的标准曲线方程中，即得到食品中Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸的含量。 所述食品包括奶制品、含奶制品和豆制品中的一种或几种。 所述奶制品包括牛奶、酸奶、奶粉、奶酪；所述含奶制品包括乳酸菌饮料、奶糖、奶 精、奶茶、奶茶粉、奶昔、巧克力、饼干、蛋糕。 所述豆制品包括豆奶、豆奶粉、豆浆、豆腐。 本专利技术提供的同时对Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸定量检测方法中样品的制备操作简单， 能够实现Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸的良好共溶，为准确测定两者的含量值提供了基础；本方法 中使用的仪器为高效液相色谱化PLC)，该设备比起液相色谱串联质谱法中用到的设备便 宜、易得很多，而且使用的溶剂和流动相对仪器的色谱柱伤害很小，色谱柱的使用寿命是液 相色谱串联质谱法的2-3倍，检测过程快捷、经济。本专利技术方法得到的检测结果准确可信， 不仅适用于大规模的样品检测，同时也广泛适用于各类样品。【附图说明】图1为Ξ聚氯胺溶于溶剂b中绘制出的标准曲线图； 图2为Ξ聚氯酸溶于溶剂b中绘制出的标准曲线图； 图3为Ξ聚氯胺溶于溶剂C中绘制出的标准曲线图； 图4为Ξ聚氯酸溶于溶剂C中绘制出的标准曲线图； 图5为通过本专利技术方法使用溶剂b得到的空白对照谱图； 图6为通过本专利技术方法使用溶剂b得到的测试样品谱图 图7为通过本专利技术方法使用溶剂C得到的空白对照谱图； 图8为通过本专利技术方法使用溶剂C得到的测试样品谱图。【具体实施方式】 本专利技术通过大量实验，发现Ξ聚氯胺能在乙腊中良好溶解，Ξ聚氯酸也能够在乙 腊中良好溶解，但是将Ξ聚氯胺的乙腊溶液和Ξ聚氯酸的乙腊溶液混合会出现大量的沉 淀，运是因为Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸反应生成了难溶于乙腊的氯尿酸Ξ聚氯胺复合物。在此 发现的基础上，专利技术人探索出一种溶剂能够实现Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸的良好共溶，接着又 探索出一种适用于高效液相色谱法同时检测运两种物质的流动相，从而建立了一种利用 HPLC同时定量检测Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸含量的方法，并将运种方法应用到各类含蛋白质食 品中Ξ聚氯胺和Ξ聚氯酸的定量检测。 W下结本文档来自技高网...
【技术保护点】
同时定量检测样品中三聚氰胺和三聚氰酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制标准溶液：分别用溶剂配制多个三聚氰胺浓度和三聚氰酸浓度分布在0‑120μg/mL的三聚氰胺标准溶液和三聚氰酸标准溶液；其中，所述溶剂为1％(质量体积百分含量，w/v，g/100mL)的三氯乙酸水溶液或盐酸水溶液与乙腈混合配制而成的；或10mM的氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液与乙腈混合配制而成的；(2)用高效液相色谱(HPLC)检测步骤(1)中各标准溶液的峰面积，紫外检测波长为213nm；(3)以标准溶液的浓度为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标，分别绘制出三聚氰胺标准曲线和三聚氰酸标准曲线，并得到对应的标准曲线方程；(4)将样品用步骤(1)中所述溶剂稀释或溶解成样品溶液，用HPLC检测样品溶液的峰面积后，将峰面积数值带入步骤(3)得到的对应的标准曲线方程中，即得到样品中三聚氰胺和三聚氰酸的含量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：于晓辉，杨秀玉，万仁玲，张广川，赵富华，董玲玲，马秋冉，杨星，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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