一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法技术

本发明专利技术涉及一种甾体化合物的杂质分析方法，特别是涉及一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，包括：（1）选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；采用流动相梯度洗脱，流动相的组成为水、甲醇和乙腈；检测波长为230～254nm；（2）取测试样品炔诺酮衍生物或其中间体适量，精密称定甲醇溶解并稀释成一定浓度的样品溶液，摇匀，进样，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。本发明专利技术可快速准确的实现炔诺酮衍生物的杂质分析，尤其适用于庚酸炔诺酮的杂质分析，同时可用于炔诺酮衍生物中间体的杂质分析，可有效追踪合成过程中产生的杂质。

【技术实现步骤摘要】
一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法
本专利技术涉及一种甾体化合物的杂质分析方法，特别是涉及一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法。
技术介绍
炔诺酮类药物为一类孕激素，可以用来治疗经前综合症、痛经、经期出血量过多、经期不正常、更年期综合症，也常用来作为口服短效避孕药。炔诺酮是首个可以合成的口服高效孕激素，其酯化衍生物具有同样的药理作用，而且延长了作用的时间。常见的炔诺酮酯化衍生物有醋酸炔诺酮、己酸炔诺酮、庚酸炔诺酮，辛酸炔诺酮等，其中庚酸炔诺酮与戊酸雌二醇复方注射液作为长效避孕药可以持续避孕1个月，是一种非常理想的避孕制剂。作为复方庚酸炔诺酮注射液主要成分的庚酸炔诺酮，其杂质检测方法各国药典均没有收载，且文献报告极少。现有技术中关注点多为庚酸炔诺酮的制剂含量检测方法，或者使用液质联用检测方法检测炔基类甾体化合物，诸如：文献“薄层扫描测定复方炔诺酮庚酸酯注射液中炔诺酮庚酸醋的薄层层析条件探讨”，金宜纫，《中国现代应用药学》,1988,3:004，公开了用薄层扫描测定复方炔诺酮庚酸酯注射液中主药和两个辅料的方法。文献“HPLCAnalysisofInjectableContraceptivePreparationContainingNorethisteroneEnanthateandEstradiolValerate”，Journalofliquidchromatography,1990,13(17):3473-3479，公开了一种复方庚酸炔诺酮注射液的高效液相色谱分析方法，方法为：色谱柱：2ZOrbaX-Cgcolumn(250X46mmI.D.)；检测波长：222nm；柱温：15℃；流动相：甲醇：水=85：1。此方法主要用来分析复方庚酸炔诺酮注射液中庚酸炔诺酮与戊酸雌二醇的含量。公开号为CN103389351A的中国专利技术，公开了一种液相-串联质谱同时检测9种炔基类甾体激素的方法，可同时检测包括炔诺酮、庚酸炔诺酮在内的多种化合物。众所周知，药物杂质对用药安全影响非常大，药物副作用在很大比例上都来自杂质的问题。药物杂质来源一般包括药物制备工艺中的中间体、副产物以及降解产物。现有公开文献中研究对象多为庚酸炔诺酮的制剂含量检测方法，或者使用液质联用检测方法检测炔基类甾体化合物，对于实际原料药生产过程中潜在的杂质，如中间体、降解产物等均没有涉及，也没有相关的杂质分析方法可以同时适用于炔诺酮衍生物产品和合成该类产品所涉及到的中间体的杂质检测。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的不足和缺点，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种炔诺酮衍生物及其中间体的HPLC杂质分析方法。该方法研究参照并符合《中国药典》2010版二部附录VD对高效液相色谱法的规定。具体说来，专利技术人提供如下的技术方案：一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，包括：（1）HPLC色谱分析主要参数：a、色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；b、流动相梯度洗脱，其中：流动相的组成为水、甲醇和乙腈，0～25min，按体积百分比，流动相水:甲醇:乙腈=45%～20%:0%～35%:30%～73%，水+乙醇+乙腈=100%；c、检测波长为230～254nm；（2）检测方法：取测试样品炔诺酮衍生物或其中间体适量，精密称定甲醇溶解并稀释成一定浓度的样品溶液，摇匀，进样，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。作为优选，所述的炔诺酮衍生物选自符合式I结构的化合物，所述的中间体选自符合式II结构的化合物，式其中，R为-COCH3，-CO(CH2)4CH3，-CO(CH2)5CH3，-CO(CH2)6CH3；式其中R’为-H，-CH2OH。作为优选，所述的步骤（2）中流速为1～2ml/min。更优选1.5ml/min。作为优选，所述的步骤（2）中柱温为20～40℃。更优选30℃。作为优选，所述的样品溶液的浓度为0.5～2mg/ml。更优选1mg/ml。作为优选，所述的进样中的进样量为5~20μL。更优选10μL。作为优选，所述的流动相梯度洗脱之后，进行第二梯度洗脱：25～50min，水、甲醇和乙腈组成流动相，梯度洗脱的体积百分比为：流动相水:甲醇:乙腈=40%～0%:35%～0%:30%～100%，水+甲醇+乙腈=100%。更优选的是，所述的第二梯度洗脱之后，进行第三梯度洗脱：50～60min，水、甲醇和乙腈组成流动相，梯度洗脱的体积百分比为：流动相水:甲醇:乙腈=0%～40%:0%:100%～60%，水+甲醇+乙腈=100%。本专利技术还提供该了一种庚酸炔诺酮及其中间体的HPLC杂质检测分析方法：a、色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；b、流动相梯度洗脱，其中：流动相的组成为水、甲醇和乙腈，0～25min，按体积百分比，流动相水:甲醇:乙腈=45%～20%:0%～35%:30%～73%，水+甲醇+乙腈=100%；c、检测波长为230-254nm；d、取庚酸炔诺酮或其中间体适量，精密称定甲醇溶解并稀释成浓度为0.5-2mg/ml的样品溶液，摇匀，进样10μL，在1-2ml/min的流速和25-40℃的柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，所述的中间体为符合式结构的化合物，式其中R’为-H，-CH2OH。作为优选，在所述流动相梯度洗脱之后，进行第二梯度洗脱：25～50min，水、甲醇、乙腈三相流动相梯度洗脱的体积百分比为：流动相水:甲醇:乙腈=40%～0%:35%～0%:30%～100%，水+甲醇+乙腈=100%；作为更优选，在所述第二梯度洗脱之后，进行第三梯度洗脱：50～60min，水、甲醇、乙腈三相流动相梯度洗脱的体积百分比为：流动相水:甲醇:乙腈=0%～40%:0%:100%～60%，水+甲醇+乙腈=100%。本专利技术中，作为优选的检测波长为240nm。本专利技术的杂质检测分析方法，仅第一梯度的洗脱方法就能够实现主成分与杂质有效分离，检测时间短，可大大提高检测效率。本专利技术的杂质检测分析方法，第一梯度和第二梯度的洗脱方法能够实现主成分与杂质有效分离，较快速准确得到样品中主要杂质及杂质总量结果，同时可以更有效地监控样品储存过程中出现单个杂质增大的情况。本专利技术的杂质检测分析方法，三个梯度的洗脱方法，能够实现主成分和可能存在的所有杂质的有效分离。在实际应用中因需求不同而对杂质的关注程度不同，一般药典方法对主要杂质及杂质总量有要求，而对单个小杂质并不要求准确定量，而在进一步提高产品质量的研发或生产过程中会对单个小杂质有不同的要求，因此本专利技术包含了上述三种不同的梯度体系。以庚酸炔诺酮及其中间体为例，专利技术人对本专利技术方法的精密性和有效性做了验证。一种庚酸炔诺酮及其中间体的HPLC杂质检测分析方法：a、色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；b、流动相中A为水、B为甲醇、C为乙腈，流动相梯度洗脱，0～25min，按体积百分比，流动相A:B:C=45%～20%:0%～35%:30%～73%，A+B+C=100%；c、检测波长为240nm；d、取庚酸炔诺酮或其中间体适量，精密称定甲醇溶解并稀释成浓度为1mg/ml的样品溶液，摇匀，进样10μL，在1.5ml/min的流速和30℃的柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，所述的中间本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在于包括：（1）HPLC色谱分析主要参数：a、色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；b、流动相梯度洗脱，其中：流动相的组成为水、甲醇和乙腈，0～25min，按体积百分比，流动相水:甲醇:乙腈=45%～20% : 0%～35% : 30%～73% ，水+乙醇+乙腈=100%；c、检测波长为230～254nm；（2）检测方法：取测试样品炔诺酮衍生物或其中间体适量，精密称定甲醇溶解并稀释成一定浓度的样品溶液，摇匀，进样，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。

【技术特征摘要】
1.一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在于包括：（1）HPLC色谱分析主要参数：a、色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；b、流动相梯度洗脱，其中：流动相的组成为水、甲醇和乙腈，0～25min，按体积百分比，流动相水:甲醇:乙腈=45%～20%:0%～35%:30%～73%，水+甲醇+乙腈=100%；c、检测波长为230～254nm；（2）检测方法：取测试样品炔诺酮衍生物或其中间体适量，精密称定甲醇溶解并稀释成一定浓度的样品溶液，摇匀，进样，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图,所述的炔诺酮衍生物选自符合式I结构的化合物，所述的中间体选自符合式II结构的化合物，式其中，R为-COCH3，-CO(CH2)4CH3，-CO(CH2)5CH3或-CO(CH2)6CH3；式其中R’为–H或-CH2OH。2.如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在于，所述的步骤（2）中流速为1～2ml/min。3.如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在于，所述的步骤（2）中柱温为20～40℃。4.如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在于，所述的样品溶液的浓度为0.5～2mg/ml。5.如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在于，所述的进样中的进样量为5~20μL。6.如权利要求1所述的一种炔诺酮衍生物及其中间体的杂质检测分析方法，其特征在于，所述的流动相梯度洗脱之后，进行第二梯度洗脱：25～50min，水、甲醇和乙腈组成流动相，梯度洗脱的体积百分比为：流动相水:甲醇:乙腈=40%～0%:35%～0%:30...

【专利技术属性】
技术研发人员：王咏，芦飞，李文君，
申请(专利权)人：浙江仙琚制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33