炔诺酮检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种炔诺酮检测试剂盒。该试剂盒包括固相载体、放试剂的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，固相载体上设有微孔条，微孔条包括微孔、包被层，包被层由炔诺酮偶联抗原组成；试剂瓶包括装有炔诺酮单克隆抗体溶液的试剂瓶、装有辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体的试剂瓶。本实用新型专利技术试剂盒可用于炔诺酮的残留量检测，与仪器分析技术相比具有使用方便、高灵敏度、检测样本量大等特点。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种炔诺酮检测试剂盒，特别是检测动物源性食品中炔诺酮残留量的试剂盒。
技术介绍
炔诺酮是一种留类同化激素，被大量用于促进反刍动物的生长。但是，研究表明炔诺酮有明显的致癌性，人食用了含有这类药物的畜禽产品也容易被致癌。欧美等国家已相继禁止或严格禁止使用炔诺酮。我国农业部第235号文件中规定，动物源性食品中炔诺酮的残留限量为不得检出。因此，在实践中，需要一种精确度、灵敏度高的检测炔诺酮方法。目前，动物组织中炔诺酮残留量的常规检测方法主要有液相色谱/质谱法(LC/MS)、高效液相色谱(HPLC)等，但是这些方法存在着仪器设备复杂、检测过程繁琐和对检验人员的技能要求高的缺点，不适合现场监控和大量样本的筛查，推广应用受到限制。(三)
技术实现思路
本技术提供一种小巧轻便的炔诺酮检测试剂盒，其操作简便，检测灵敏度高，成本低，稳定性好，可进行一次连续进行多个样品中炔诺酮残留量的测定，减少了检测样本所需要 的时间。炔诺酮检测试剂盒，包括固相载体、放试剂的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，固相载体上设有微孔条，微孔条包括微孔、包被层；试剂瓶包括装有炔诺酮单克隆抗体溶液的试剂瓶、装有辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体的试剂瓶。所述包被层由炔诺酮偶联抗原组成。所述试剂盒还包括6瓶装有炔诺酮标准液的试剂瓶，2瓶装有底物显色液的试剂瓶，I瓶装有终止液的试剂瓶，I瓶装有洗涤液的试剂瓶，I瓶装有缓冲液的试剂瓶。所述固相载体由96孔聚苯乙烯试剂板组成。每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定，既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测。检测时，样本中的炔诺酮将和微孔条包被层的炔诺酮偶联抗原竞争炔诺酮单克隆抗体，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体后，用底物显色液显色，样本吸光度值与样本中炔诺酮的残留量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中炔诺酮残留量。经实验表明本试剂盒具有很高的灵敏度检测灵敏度为0.1 μ g/L。相对于其他炔诺酮检测方法，本试剂盒所需仪器较少，同类实验室一般均有配备，所需成本较低。本技术的有益效果是能快速、简便、灵敏、准确地用于动物源性食品中炔诺酮残留量的检测。附图说明图1本技术试剂盒的固相载体一列微孔条图。图2本技术固相载体图。图3本技术盒体、下凹瓶位结构示意具体实施方式如图1至图3所示，炔诺酮检测试剂盒，盒体I内具有固定模具形成的下凹瓶位2，下凹瓶位用于放置装有溶液的试剂瓶，96孔聚苯乙烯试剂板组成的固相载体3，固相载体的的微孔条4包括微孔5和包被层6，包被层由炔诺酮偶联抗原组成，试剂瓶包括装有炔诺酮单克隆抗体溶液的试剂瓶、装有辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体的试剂瓶。为了更有利于检测炔诺酮残留的检测，试剂盒还可以包括有6瓶装有炔诺酮标准液的试剂瓶，2瓶装有底物显色液的试剂瓶，I瓶装有终止液的试剂瓶，I瓶装有洗涤液的试剂瓶，I瓶装有缓冲液的试剂瓶。试剂盒的试剂瓶内的具体成分如下(I)炔诺酮单克隆抗体工作液I瓶/7ml ；(2)炔诺酮标准品溶液Iml/瓶，浓度分别为0μ g/L、0.1 μ g/L、0. 3 μ g/L、0. 9 μ g/L、2. 7 μ g/L、8.1 μ g/L ；(3)辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体工作液12ml/瓶；(4)底物显色液，分别为底物显色A液，底物显色B液，底物显色液A液为过氧化脲7ml/瓶，底物显色液B液为四甲基联苯胺7ml/瓶；(5)终止液 7ml·/瓶；(6)缓冲液50ml/瓶，为含有3-5%卵清蛋白、pH值为6. 5-7. 2,0. 1-0. 2mol/L磷酸盐缓冲液。使用时2倍稀释。(7)洗涤液40ml/瓶，为含有O. 7%-1. 4%吐温_80、0. 02-0. 05%硫柳汞防腐剂、pH7值为6. 4-6. 8,0. 05-0. 2mol/L磷酸盐缓冲液。使用时20倍稀释。试剂盒中用到的主要材料的制备方法炔诺酮偶联抗原的制备(I)炔诺酮半抗原的制备炔诺酮与琥珀酸酐通过缩合反应得到炔诺酮半抗原。(2)炔诺酮偶联抗原的制备将炔诺酮半抗原与牛血清白蛋白通过混合酸酐法偶联得到炔诺酮偶联抗原。炔诺酮单克隆抗体的制备( I)动物免疫将免疫原(炔诺酮半抗原与卵清蛋白通过混合酸酐法偶联得到)注入到Balb/c小鼠体内，免疫剂量为100 μ g/只，使其产生多克隆抗体血清。(2)细胞融合和克隆化小鼠血清测定结果较高后，取其脾细胞，按7:1比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争ELISA测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。(3)细胞冻存和复苏将炔诺酮单克隆杂交瘤细胞株用冻存液制成I X IO9个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37°C水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。(4)单克隆抗体的生产与纯化将Balb/c小鼠腹腔注入灭菌石蜡油O. 5ml/只，7天后腹腔注射炔诺酮单克隆杂交瘤细胞株5X107个/只，7天后采集腹水。用辛酸-饱和硫酸铵法进行腹水纯化，_20°C保存。(5)羊抗鼠抗抗体的制备以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体。(6)辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体的制备将羊抗鼠抗抗体与辣根过氧化物酶(HRP)采用改良后的过碘酸钠法进行偶联得到。(—)使用炔诺酮检测试剂盒检测炔诺酮的操作步骤1、取出需要数量的微孔板。2、加标准品/样本加标准品/样本50 μ I到对应的微孔中，在加入炔诺酮单克隆抗体工作液50 μ I/孔，轻轻振荡混匀，置37°C避光环境中反应30min。3、洗板将孔内液体甩干，用洗涤工作液250 μ I/孔，充分洗涤4 — 5次，每次间隔IOs,用吸水纸拍干。4、酶标二抗加酶标二抗工作液100 μ I到对应的微孔中，轻轻振荡混匀，置37°C避光环境中反应30min。5、显色加入底物液显色液各50 μ I/孔，混匀，置37°C避光环境中反应15min。6、测定加入终止液50 μ I/孔,混勻，设定酶标仪于450nm处测定每孔OD值。(二)结果判定(I)百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准(O标准)的吸光度值，再乘以100%，即本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种炔诺酮检测试剂盒，包括固相载体、放试剂瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，其特征在于：固相载体上设有微孔条，微孔条包括微孔、包被层；试剂瓶包括装有炔诺酮单克隆抗体溶液的试剂瓶、装有辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体的试剂瓶。

【技术特征摘要】
1.一种炔诺酮检测试剂盒，包括固相载体、放试剂瓶的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，其特征在于固相载体上设有微孔条，微孔条包括微孔、包被层；试剂瓶包括装有炔诺酮单克隆抗体溶液的试剂瓶、装有辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗抗体的试剂瓶。2.如权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，赵正苗，罗贵昆，蒲小容，段盈盈，王建霞，何丽霞，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：